抑制消减杂交技术分析牙龈卟啉单胞菌基因差异初探

摘要

目的:对比牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)低毒力株标准参考菌ATCC 33277与高毒力株W83之间的差异核苷酸序列,查找高毒力株W83缺失基因.方法:抑制消减杂交技术对比牙龈卟啉单胞菌低毒力株标准参考菌ATCC 33277与高毒力株W83的基因差异.以低毒力株ATCC 33277为tester,高毒力株W83株为driver,将提取的基因组DNA用内切酶Rsa Ⅰ酶切,连接特殊设计的adaptor进行两次消减杂交和PCR扩增,并与TA克隆载体连接,转化到JM109中,建立差异消减文库,经PCR筛选鉴定阳性克隆,进而对部分片段进行测序和同源分析.结果:经SSH筛选鉴定得到62个片段大小为125～632 bp的阳性克隆基因片段.结论:这些差异基因为研究牙周病的发生和发展提供重要线索.