普氏立克次体重组表面蛋白制备和免疫印迹抗原特异性分析

摘要

目的 克隆与表达普氏立克次体(Rickettesia prowazekii)主要蛋白抗原基因,分析所表达重组蛋白的抗原特异性.方法 采用PCR法从普氏立克次体全基因组中扩增其主要抗原基因,将扩得的基因片段插入原核表达质粒；将基因重组表达质粒转化大肠杆菌,用IPTG诱导转化菌表达重组蛋白.将普氏立克次体、莫氏立克次体、立氏立克次体、恙虫病东方体、黑龙江立克次体、贝氏柯克斯体等实验感染小鼠血清与重组蛋白做免疫印迹.结果 经过PCR扩增后获得9个目的基因片段,用其构建出9个原核表达质粒；9个原核表达质粒转化菌均高效表达出相应的重组蛋白；结果显示FtsZ、GroEL、Rp828、EF-Ts等4个蛋白特异性最好,仅与普氏立克次体感染小鼠血清反应；其次是Omp,它除与普氏立克次体感染小鼠血清反应外,仅与莫氏立克次体感染血清反应.结论 FtsZ等4个重组蛋白为普氏立克次体的特异性抗原,可以作为研制流行性斑疹伤寒血清学诊断试剂的候选抗原.