缺氧诱导因子-1α基因转染人间充质干细胞的体内促血管生成作用

摘要

目的研究将缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因转染人间充质干细胞（hMSCs）的体内促血管生成作用,为促进组织工程骨血管化提供新的方法和策略。方法构建pIRES3/HIF-1α逆转录病毒载体,制备含目的基因的重组逆转录病毒,感染hMSCs。用逆转录-聚合酶链反应（RT- PCR）法检测转基因hMSCs表达HIF-1α的水平,用免疫组织化学法检测转基因hMSCs在缺氧和常氧条件下HIF-1α蛋白的存在情况。体内促血管生成的实验分为两组：实验组采用转基因hMSCs．对照组采用未转基因的hMSCs。两种细胞分别接种到13d的鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）,3d后将CAM制片,在显微镜下观察并摄像。用图像分析方法测量并分析血管面积。结果转基因hMSCs中HIF-1αmRNA表达较未转基因的hMSCs明显增高。转染HIF-1α基因的hMSCs,缺氧条件下细胞核内HIF-1α能稳定存在；常氧条件下细胞核内HIF-1α不能稳定存在。图像分析结果显示实验组CAM较对照组CAM血管面积明显增多,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论HIF-1α基因能稳定转染到hMSCs并得到强制表达。转染HIF-1α基因的hMSCs有明显的促血管生成作用,对于促进组织工程骨的血管化有重要作用。