重组虎源H5N1流感病毒HA基因犬2型腺病毒的构建与实验免疫研究

摘要

H5N1流感病毒可以对虎和猫产生致死性感染,为研制可用于预防猫科动物流感的新型疫苗,构建了重组虎源H5N1流感病毒HA基因的犬2型腺病毒.将A/Tiger/Harbir/01/2003(H5N1)的HA基因克隆入pVAX1载体中,然后将含有HA基因的表达盒(CMV+HA+PolyA)克隆入pVAX△E3的SSPⅠ酶切缺失处,获得含有HA表达盒的穿梭载体p△EHA.用SalⅠ+Nru Ⅰ分别对p△EHA和pPoly-2-CAV2进行双酶切,将含有HA表达盒的SalⅠ+Nru Ⅰ片段克隆入pPoly2-CAV2,获得了在E3区缺失处插入HA表达盒的重组质粒pCAV-2/HA.释放CAV-2/HA重组基因组转染MDCK细胞,获得了重组活病毒CAV2/HA,经Western blot分析表明重组表达产物可被流感病毒HA单克隆抗体3A13所识别.使用该重组病毒免疫猫可以产生效价为1:8～1:16的抗H5亚型流感病毒血凝抑制抗体.