芦荟大黄素对非酒精性脂肪性肝炎细胞模型脂质过氧化损伤的影响

摘要

目的: 探讨芦荟大黄素(Aloe-elodin，AE)在脂质过氧化方面对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)细胞模型的影响，为AE改善NASH相关机制的研究提供一定帮助，为NASH的药物治疗提供一些新线索，以期为进一步改善隐源性肝硬化(cryptogenic cirrhosis，CC)发病率作出贡献。 方法: (1)、参照本实验室既往成功建立NASH模型方法，并在此基础上进一步改进，采用30％脂肪乳剂加入细胞培养液培养正常人肝细胞株L-02，再设两组分别为空白对照组和实验组。使用普通的1640培养基培养肝细胞为空白对照组，而在普通培养基中再加入30％脂肪乳剂培养为实验组，使实验组的培养基中含有30％脂肪乳剂的终浓度分别为0.25ml/L，0.5mL/L，0.75ml/L，1ml/L。各组在相同外界条件下进行细胞培养，当细胞生长数量约占视野的70％左右时，开始用不同浓度脂肪乳剂培养基干预实验组，分别干预至24h、48h、72h，再给予油红O染色，观察细胞形态学以及脂滴数量，收集培养72h后的细胞培养液，测定培养液中ALT、AST含量，选择最合适浓度（0.5ml/L组）建立非酒精性脂肪性肝炎模型。 (2)、再设立对照组、模型组、实验组，对照组用正常1640培养基培养，模型组用含30％脂肪乳剂0.5mL/L的培养液培养，实验组为模型组加入芦荟大黄素，使实验组含AE的终浓度分别为104mmol/l，10-5mmol/l，10-6mmol，对此细胞模型进行干预，并动态观察细胞模型内脂滴的数量，同时测定甘油三酯含量和培养液中ALT、AST、SOD、MDA、TNF-α等指标，评价AE对非酒精性脂肪性肝炎细胞的作用。 结果: (1)、用含30％脂肪乳剂的培养液培养正常人肝细胞株L-02，48h培养后可发现肝细胞明显产生甘油三酯的堆积，进一步培养细胞72h，可测得ALT、AST在细胞上清液中含量较对照组升高，其中以脂肪乳剂终浓度0.5ml/L培养基组升高最为明显(P＜0.01)，而脂肪乳剂终浓度过高的0.75ml/L培养基组及1.0ml/L培养基组，细胞生长受到抑制，导致其上清液中ALT、AST测得的含量不如终浓度为0.5ml/L培养基组上升的明显。遵循以可令肝细胞出现脂肪变性，同时伴有ALT、AST升高，并且细胞状态良好的实验原则，选择一个最低的脂肪乳剂浓度为实验最佳浓度，完成NASH模型的建立。因此本实验选择0.5ml/L组建立NASH模型。 (2)、NASH肝细胞模型加入三组不同浓度AE干预72小时后，电镜下所见加入AE组与模型组相比，细胞内脂肪滴堆积减少，细胞损伤减少，培养液中ALT、AST、丙二醛、TNF-α等含量均较模型组下降，SOD含量较模型组升高（P＜0.05），与AE浓度效应之间存在正相关关系，其中以AE终浓度10-4 mmol/L组差异最明显，具有统计学意义(P＜0.01）。 结论: 本研究结果显示，加入AE后可抑制培养液中ALT、AST、MDA、TNF-α含量的上升及SOD含量的下降，减少细胞内脂肪滴堆积，并在一定范围内呈浓度效应关系，提示AE作用后肝细胞脂质过氧化程度改善，炎性指标明显下降，可明显减轻细胞的损伤程度。故此可得，AE可显著保护NASH的细胞模型，从而在细胞水平上证明了AE可改善NASH的脂质过氧化损伤及炎性反应。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 前言

1．2 选题的目的意义、研究内容、技术路线

1．2．1 选题的目的意义

1．2．2 研究内容

1．2．3 技术路线

第二章 芦荟大黄素对非酒精性脂肪性肝炎细胞模型脂质过氧化损伤的影响

2．1 材料

2．1．1 进行肝细胞培养所需材料如下

2．1．2．主要试剂

2．1．3 主要仪器及设备

2．2 实验方法

2．2．1 本实验中肝细胞L-02的培养方法

2．2．2 建立NASH的离体肝细胞模型

2．2．3 AE对NASH细胞模型进行干预

2．2．4 细胞培养液中ALT、AST、SOD、MDA、TNF-α的检测

2．2．5 检测肝细胞内TG的含量

2．2．6 统计学方法

2．3 结果

2．3．1 NASH细胞模型的建立

2．3．2 AE干预NASH细胞模型后对培养液中各种细胞因子含量的影响

2．4 讨论

2．4．1 NAFLD、NASH与其他疾病之间的相关性

2．4．2 NASH体外细胞模型的建立及药物干预

第三章 主要结论和展望

3．1 主要结论

3．2 展望

参考文献

致谢

在学期间发表的学术论文及其他科研成果

附录：综述