单纯疱疹病毒胸苷激酶基因联合内皮抑素基因治疗肝癌的实验研究

摘要

第一部分 HSV-TK/GCV系统对SMMC-7721细胞体外杀伤效应的研究 目的:研究自杀基因HSV-TK/GCV系统在体外对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤作用和旁观者效应.方法:应用携带HSV-TK基因的质粒pDR2-TK通过阳离子脂质体介导转染人肝癌细胞SMMC-7721,并经潮霉素筛选,获得抗性细胞集落,并命名为SMMC/TK,RT-PCR检测转染细胞HSV-TK基因mRNA表达,MTT法检测给予丙氧鸟苷(GCV)后,对肝癌细胞的杀伤作用和旁观者效应,并观察给药后细胞形态的改变.结论:HSV-TK系统对SMMC-7721细胞有很好的抑制作用,转染细胞较之未转染细胞对GCV敏感度显著增加,且呈剂量依赖性.第二部分 重组人内皮抑素真核表达载体pCD-sEndo的构建及其在SMMC-7721细胞中的表达 目的:构建表达人内皮抑素的重组真核表达载体,并将其转染人肝癌SMMC-7721细胞,观察其体外抑制血管生成的活性.结论:重组Endostatin真核表达质粒构建正确,将其转染SMMC-7721细胞后可以有效的表达具有生物学活性的人Endostatin蛋白并能分泌到细胞外,为下一步应用于肿瘤的基因治疗提供了基础.第三部分 HSV-TK基因与内皮抑素基因联合治疗实验性肝癌 目的:寻求有效的肿瘤基因治疗方法,研究阳离子脂质体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)与内皮抑素基因(Endostatin)联合治疗裸鼠人肝癌的作用.结论:瘤内注射携带endostatin基因的阳离子脂质体,可减少裸鼠体内种植性人肝癌的微血管数目,促进肿瘤细胞凋亡,与TK基因联合使用更能够直接杀死肿瘤细胞,可以更加有效地抑制肿瘤生长.

目录

前言

第一部分HSV-TK/GCV系统对SMMC-7721细胞体外杀伤效应的研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

附图

第二部分重组人内皮抑素真核表达载体pCD-sEndo的构建及在SMMC-7721中的表达

材料与方法

结果

讨论

参考文献

附图

第三部分HSV-TK基因与内皮抑素基因联合治疗实验性肝癌

材料与方法

结果

讨论

参考文献

附图

文献综述

综述一内皮抑素抗肿瘤治疗研究进展

综述二自杀基因治疗肝癌的研究进展

致谢