恒古骨伤愈合剂对实验性骨质疏松症的治疗作用及其机制研究

摘要

目的：研究恒古骨伤愈合剂治疗实验性骨质疏松症的疗效及其机制。
　　方法：85只6月龄雌性新西兰大白兔适应性喂养2周后随机分为手术组（OVX组）60只和假手术组（Sham组）25只。OVX组手术双侧卵巢去势；Sham组只打开腹腔，找到卵巢外置1 min后原位植回，并切除腹腔内两块与卵巢大小相当的脂肪块后关闭腹腔。术后150 d时每组各取6兔行骨密度、血清生化指标、MicroCT、生物力学检测，证实OVX组骨质疏松模型复制成功后，Sham组随机抽取16兔继续实验，OVX组随机抽取48兔分为模型组、（OVX+300 mg/kg恒古骨伤愈合剂）组、（OVX+600 mg/kg恒古骨伤愈合剂）组，每组16兔，恒古骨伤愈合剂组按设定剂量给药，Sham组和模型组给予相应量的生理盐水。分别于用药60 d、120 d时，每组随机抽取6兔制备含药血清，并通过骨密度、血清生化指标、MicroCT、生物力学、骨组织病理学检测验证恒古骨伤愈合剂疗效，同时用含药血清干预体外培养的前成骨细胞MC3T3-E1，观察其对细胞增殖及胞内BMP-2、Cbfα1、OPG、RANKL mRNA水平的影响。
　　结果：⑴术后150d时，与Sham组比较，OVX组全身BMD和脊柱BMD降低；血清中PINP、TRAP5b和NTX等骨代谢指标升高；腰椎最大载荷、最大位移、结构刚度和能量吸收能力等生物力学参数降低；Tb.N、Tb.Th和BV/TV等骨微结构参数降低，Tb.Sp和BS/BV等骨微结构参数升高。⑵恒古骨伤愈合剂给药60 d、120 d时，全身BMD和脊柱BMD升高；血清中PINP、TRAP5b和NTX等骨代谢指标降低；腰椎最大载荷、结构刚度和能量吸收能力等生物力学参数升高；腰椎Tb.N、Tb.Th、BV/TV升高，Tb.Sp、BS/BV降低；MicroCT与骨组织病理学检测显示骨微结构改善。⑶与模型组血清比较，恒古骨伤愈合剂含药血清能促进成骨细胞的增值，以10％、20%终浓度含药血清效果最为明显，且2月含药血清细胞效果好于4月含药血清；⑷与模型组血清比较，10%终恒古骨伤愈合剂含药血清能明显提高胞内Cbfα1 mRNA水平，且以2月含药血清效果较为明显。不同月份的10%终浓度恒古骨伤愈合剂含药血清对胞内BMP-2、OPG、RANKL mRNA水平均无明显影响。
　　结论：①手术双侧卵巢去势150d可成功复制兔骨质疏松模型。②恒古骨伤愈合剂对实验性骨质疏松症有疗效。③恒古骨伤愈合剂能明显促进前成骨细胞的增殖和胞内Cbfα1的表达，但对胞内BMP-2、OPG、RANKL mRNA水平均无明显影响。

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中文摘要

1 前 言

1.1 骨质疏松症 (Osteoporosis，OP ) 简介

1.2 OP 的危害

1.3骨髓间充质干细胞 ( mesenchymal stem cells，MSCs ) 异常分化是导致 OP的主要原因之一。

1.4骨形态发生蛋白 -2 ( bone morphogenetproteins-2， BMP-2 )与核心结合因子 α1 （core binding factor alpha 1， Cbfα1 ）是公认的成骨关键因子。

1.5 骨保护素 （Osteoprotegerin，OPG ）与核因子 –κB 受体活化因子配基（ receptor activator of NF-κB ligand，RANKL ） 已被证实在骨吸收与骨重建中起关键作用，并在代谢性骨病的发病和治疗中发挥关键靶标作用。

1.6 骨质疏松症的药物治疗现状

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 方法

2.3 动物分组与药物干预

2.4 整体水平对恒古骨伤愈合剂疗效的评价

2.5 恒古骨伤愈合剂含药血清对前成骨细胞 MC3T3-E1 的影响

2.6 数据分析

3 结果

3.1 骨质疏松模型的验证

3.2 恒古骨伤愈合剂疗效评价

3.3 恒古骨伤愈合剂含药血清对前成骨细胞 MC3T3-E1 的影响

4 讨论

4.1 OP 兔模型的复制与验证

4.2 从动物整体水平评价恒古骨伤愈合剂对 OP 的疗效

4.3 恒古骨伤愈合剂含药血清对 MC3T3 增殖及其 Cbfα1 mRNA、BMP-2 mRNA、OPG mRNA和RANKL mRNA表达的影响。

参考文献

英文摘要

致谢

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声明

附录：综述:先天性髋关节脱位的手术治疗进展