人参皂苷Rh2对实验性子宫内膜异位症治疗作用的机制研究

摘要

目的:通过构建子宫内膜异位症的体外模型,研究人参皂苷Rh2对实验性子宫内膜异位症的治疗作用,并探讨人参皂苷Rh2对子宫内膜异位症的作用机制.方法:子宫内模异位症患者的异位内膜组织经Ⅱ胶原酶消化后,过筛后人子宫异位内膜细胞进行体外培养,建立人子宫内膜异位症的体外细胞模型.用无酚红DMEM/F12培养液(含10％活性炭吸附FBS)培养人子宫异位内膜细胞,用不同浓度的Rh2(0.0001～100μmol/L)作用于离体培养的人子宫异位内膜细胞24h、48h和72h,分析人参皂苷Rh2对人子宫异位内膜细胞生长的影响.采用R&D蛋白芯片检测溶剂对照组(DMSO)和Rh2(30μmol/L)组磷酸化蛋白激酶表达的差异,筛选出主要的差异性表达激酶,并用Real-time RT-PCR技术验证蛋白芯片的结果,研究人参皂苷Rh2对人子宫异位内膜细胞磷酸化激酶的影响.利用Western blot技术检测溶剂对照组(DMSO)和Rh2(30μmol/L)组蛋白表达差异性(pp38,pSrc,Bcl-2,Bax等),并比较存在特异性拮抗剂下,各蛋白水平表达的差异.结果:人参皂苷Rh2对人子宫异位内膜细胞具有正性和负性双重作用,表现为低浓度(0.0001～1μmol/L)时有促进增殖的作用,高浓度(10μmol/L～100μmol/L)时有抑制生长的作刚.人参皂苷Rh2(30μmol/L)可上调人子宫异位内膜细胞磷酸化蛋白激酶Src(Y419)的表达,下调磷酸化蛋白激酶JNK pan(T183/Y185,T221/Y223)、GSK-3α/β(S21/S9)、β-catenin、ERKl/2(T202/Y204, T185/Y187)、MSKl/2(S376/S360)的表达.进一步分析结果显示,磷酸化蛋白激酶差异性表达主要涉及Src及MAPK通路.当Src/p38 MAPK通路受到抑制时,人参皂苷Rh2能增加Bax/Bcl-2的表达,提示了人参皂苷Rh2抑制人子宫异位内膜细胞生长可能与抑制Src/p38 MAPK通路有关.结论:人参皂苷Rh2抑制人子宫异位内膜细胞生长可能与抑制Src/p38 MAPK通路有关.