人参二醇对造血细胞GATA-1和GATA-2转录调控蛋白的诱导作用

摘要

目的:借鉴研究生长因子作用机理的方法,观察了人参二醇(PDS)对转录调控蛋白GAT-1,GATA-2的诱导作用,探讨PDS对造血细胞增殖与分化的调控作用.方法:选用人粒系细胞株HL-60、红系细胞株K562、巨核系细胞株CHRF-288和Meg-01作靶细胞,经PDS刺激处理后提取核蛋白.采用抗人GATA-1或GA-TA-2抗体作Western印迹杂交法,分析抗原-抗体结合反应.并用32 P标记的具有与GATA族转录因子共同结合位点的双链寡核苷酸探针作电泳带移动阻滞试验(EMSA),放射自显影显示GATA蛋白与特异性DNA结合复合物的条带.抗体胶结合移动试验(supershift assay)分别加入抗人GATA-1,GATA-2或GATA-3抗体,以确定复合物条带的成分.结果:(1)Western印迹杂交法显示PDS诱导的K562,CHRF-288和Meg-01细胞核内GATA-1转录调控蛋白含量增高,经图像扫描密度分析分别是未经处理细胞的4.5,5.9和2.0倍.(2)K562,CHRF-288和Meg-01细胞的GATA-2表达水平低,但经PDS诱导后明显提高,分别是未经处理细胞的的2.5,4.9和2.1倍.而HL-60细胞在PDS处理前后无明显变化.(3)EMSA结果表明PDS诱导的K562,CHRF-288和Meg-01三株细胞的GATA转录调控蛋白与特异性DNA结合的活性均明显增高,而HL-60细胞结合活性低,且PDS处理前后无明显变化.(4)用抗GATA-1,GATA-2或GATA-3抗体作supershift assay,经PDS处理的K562,CHRF-288细胞核内GATA与DNA结合复合物主要与GATA-1,GATA-2抗体结合,分子量增大使特异性条带上移或消失,提示这种复合物的主要成分为GATA-1,GATA-2转录因子.结论:PDS在细胞内的信号传递途径涉及到GATA-1和GATA-2,通过诱导GATA-1转录因子水平增加,并与DNA结合活性增高而调控与红细胞发育和巨核细胞分化有关基因的表达;而GATA-2蛋白合成增加,及与DNA结合活性增加可促进细胞增殖.这些结果提示PDS不但具有刺激造血细胞增殖,而且能够诱导造血细胞发育和分化的类生长因子双向效应.