南瓜胰蛋白酶抑制剂Ⅰ在毕赤酵母中的表达和活性的初步测定

摘要

本文以酵母表达质粒pGAPZαA为载体,构建了含有CMTIⅠ全长基因的重组酵母表达质粒pGAPZαA-CMTIⅠ,重组质粒分别以PCR及测序鉴定正确后大量制备,然后用BlnⅠ将其线性化,电转化巴斯德毕赤酵母GS115,通过Tricine-SDS-PAGE及特异性PCR扩增法对酵母阳性重组子进行筛选,筛选获得的阳性菌表达产物较空白菌表达产物在3.0-4.0kD处有一条明显的条带,高效阳性菌目的蛋白表达量占分泌总蛋白的6.21﹪。经对表达产物进行初步抑制活性的测定,结果表明阳性重组菌的表达产物具有抑制胰蛋白酶活性的作用。