猪β干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及蛋白活性的初步研究

摘要

干扰素是一类动物机体产生的多功能分泌蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等生物学功能。为了研制高活性重组表达的猪β干扰素，试验成功地构建了重组酵母表达质粒pPICZαC-PoIFNβ，该质粒经SacⅠ单酶切电泳后，电击转化感受态的毕赤酵母工程菌X-33，结果获得多个单菌落。通过提高抗生素浓度，筛选出具高抗性的转化子。重组菌诱导表达的上清液进行SDS-PAGE电泳分析，可见一条分子量约25Ku和27Ku的清晰蛋白条带，比理论值偏大，可能是蛋白在表达后发生不同程度的糖基化所致。将表达蛋白进行Western-blot分析，显示表达蛋白与小鼠抗猪β干扰素单克隆抗体能发生特异的反应，具有免疫原性。表达的蛋白对VSV病毒在BHK-21细胞上的增殖有抑制作用，并且能够活化淋巴细胞，具有免疫调节作用。该重组蛋白在预防和治疗猪病毒性疾病及在调节机体免疫方面具有潜在的应用前景和推广价值。