摘要:目的:构建结构杆菌H37RV株HSP65基因与IL-12基因的共表达载体PVIV02-HSP65-IL- 12,并研究其在VER0-E6细胞内表达的可行性,为新一代结核多价dNA疫苗寻找理论依据。方法:采用 PCR技术,从培养的结核杆菌H37RV中抽提HSP65基因,克隆到PVIV02-mCS上的一个多克隆位 上,构建成共表达载体PVIV02-HSP65-IL-12。并经XBAl/AVRII和NC0l/NHEl进行双酶切和测序鉴定; 用间接免疫荧光法(IFA)检测HSP65和mIL-12基因在VER0-E6细胞中的表达。结果:双酶切和测分 析证明HSP65基因和mIL-12基因成功克隆到PVIV02-mCS上,且方向正确,序列无突变;间接免疫荧 光试验结果为阳性。结论:共表达载体PVIV02-HSP65-IL-12构建成功,且PVIV02-HSP65-IL-12可在 VwER0-E6细胞中获得共表达。