单宁酶

摘要： 单宁酶在食品、饲料和制药等领域具有巨大应用潜力。本研究通过对柿树单宁酶基因PsnTanA进行密码子优化,使得该基因的GC含量由60.2%调整到57.1%,CAI值由0.62调整到0.76,优化前后基因序列的一致性为78.3%。单宁酶PsnTanA经大肠杆菌BL21表达后,重组酶PsnTanA在40°C和pH 7.0下表现出最大活性,比酶活力为1.53 U/mg,表观分子量约为39 kD。多种金属离子抑制了重组酶PsnTanA的活力,并随着金属离子浓度的增大而增强,其中Cu;和Fe;表现出的抑制效应最为明显,部分有机试剂也表现出类似的现象。以没食子酸正丙酯为底物时,单宁酶PsnTanA的Km值和Vmax值分别为1.43 mmol/L和3.28 mmol/(L·min)。除此之外,研究发现单宁酶PsnTanA能够有效降解高粱、茶和绿豆单宁等底物。本研究不仅丰富了现有单宁酶资源,也为进一步为单宁酶在食品和饲料中的应用提供了必要的理论支撑。

摘要： 基于大肠杆菌的密码子偏好性,对茶树单宁酶基因CsTanA碱基进行优化,基因优化后GC含量为51.9%,密码子适应指数为0.8,优化前后基因序列的一致性为77.8%,以pET-30a为表达载体对优化基因进行重组表达及酶学性质分析。A_(600nm)约0.6的重组菌株以1 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷在30°C诱导12 h,破碎上清液重组单宁酶rCsTanA比活力为0.35 U/mg,镍柱纯化后的rCsTanA比活力为1.53 U/mg,纯化倍数约为4.4。纯化重组单宁酶rCsTanA分子质量为39 kDa,其最适温度和最适pH值分别为40°C和7.0。不同金属离子浓度对酶活力的影响存在差异,在低浓度(1 mmol/L)条件下,K^(+)增强了rCsTanA 37.28%的酶活力,而Ag^(+)、Cu^(2+)和Fe^(3+)使该酶活力均丧失80%以上;而在高浓度(5 mmol/L)条件下,Cu^(2+)表现出完全抑制rCsTanA活性的特性。表面活性剂(十二烷基硫酸钠、吐温80和十六烷基三甲基溴化铵)和极性溶剂(甲醇、乙醇、丙三醇、异丙醇及丙酮)对rCsTanA活性具有较强抑制作用。本研究不仅实现了茶树单宁酶的表达和酶学性表征,同时也丰富了单宁酶资源,为植物单宁酶的进一步应用研究提供了必要的理论支撑。

摘要： 夏秋茶鲜叶原料中酯型儿茶素含量丰富,经传统方法加工而成的绿茶苦涩味重,不被广大消费者所接受,导致经济效益低,因而被广泛弃采并造成严重资源浪费。单宁酶是一种作用于没食子酰基的生物酶,可催化酯型儿茶素生成非酯型儿茶素与没食子酸,改变绿茶儿茶素组成,从而达到改善滋味品质的目的。文章在绿茶加工过程中添加单宁酶处理杀青叶,并分析了酶添加量与处理温度对成品绿茶浸提液感官品质与理化指标的影响。研究表明,单宁酶处理杀青叶可有效改善夏秋季绿茶浸提液滋味品质。随着酶添加量的提高,浸提液外观色泽越发清亮,苦涩味降低而回甘显著增强,整体口感得到极大改善。此外,酶解处理后,浸提液中的总儿茶素含量虽无明显变化,但酯型儿茶素含量与比例均显著降低,浸提液抗氧化活性得以提升。处理温度的影响虽不及酶添加量,但40°C处理的浸提液品质显著最佳。

摘要： 探究固、液发酵方式在重组毕赤酵母单宁酶工程菌的形态、产酶量及酶学特性等方面的差异。研究发现,重组菌株在固、液发酵方式下表现出了较大差异。固态发酵条件下,重组菌株能够积累更多的生物量,当培养48 h后积累的生物量比液态发酵高22.3%;经电镜分析发现,固态条件下,重组菌株个体之间更容易出现聚集,并伴随着有生物膜的产生;在不同甲醇体积分数诱导下,固、液发酵的重组菌株的产酶量均出现了先升高后降低的趋势,而诱导两者最高产酶量的甲醇体积分数却存在差异,分别是2%和3%。进一步研究发现,固、液发酵条件下,重组菌株发酵的单宁酶酶学性质也存在一定差异,固、液态发酵单宁酶的最适反应温度分别为30°C和为20°C,且酶的热稳定性也有一定提高,其余酶学性质差异不显著。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析发现,固态发酵生产的单宁酶存在不同的修饰,这可能是造成上述性质差异的原因之一。综上所述,本研究探究了固、液发酵条件下,重组单宁酶毕赤酵母菌株生长及产酶特性的差异,为高效制备单宁酶提供了一定的理论指导。

摘要： 为促进茶叶加工废料的高效利用,对黑曲霉B1401利用茶叶加工废料固态发酵生产单宁酶进行初步研究.

摘要： 单宁酶(Tannase,EC 3.1.1.20)能水解单宁中的酯键和羧酚酸键,产生没食子酸以及对应醇,在食品、饮料、饲料、制药、医药、化妆品等各类工业中应用广泛,也在普洱茶发酵中具有重要作用.从普洱茶发酵中分离的黑曲霉菌株PU001中克隆得到单宁酶基因Tan2,并连接到表达载体pCold-Ⅰ构建BL21-pCdd Ⅰ原核冷诱导表达系统,转化至感受态大肠杆菌BL21中,SDS-PAGE与质谱鉴定均表明单宁酶Tan 2表达成功,旨在为进一步研究该酶在普洱茶发酵中的作用机制以及其他领域的应用奠定基础.

摘要： 利用单宁酶脱除花生衣提取液涩味,改善花生衣提取液品质,比较不同处理条件下花生衣提取液在口感、原花青素、多酚、游离氨基酸含量方面的变化,优化单宁酶处理花生衣提取液的条件.结果表明:添加单宁酶能明显脱除花生衣提取液的涩味,游离氨基酸含量有所增加,花生衣提取液滋味品质明显改善.单宁酶处理花生衣提取液的优化条件为:酶解温度为50°C,酶解时间为5 h,酶添加量0.2％和底物浓度为0.8％,在此条件下制备的花生衣提取液无苦涩味,口感好,原花青素得率9.2％,多酚得率15.3％,游离氨基酸得率为1.35％.本研究对于改善花生衣提取液的滋味品质、拓宽花生衣应用有积极意义.

摘要： 采用常压室温等离子体技术(atmospheric room temperature plasma,ARTP)对炭黑曲霉FCYN212菌株进行诱变,选育单宁酶高产菌株,并对单宁酶产量提高的菌株进行发酵罐发酵参数优化.结果表明:通过ARTP诱变后结合溴酚蓝平板变色圈法初筛,摇瓶发酵复筛,成功筛选到1株单宁酶活力较高的突变株NCUFM8,且与原始菌株酶活力(0.135 U/mL)相比,NCUF M8酶活力为0.212 U/mL,显著提高了 57％(P＜0.05);遗传稳定性结果表明,经8次连续传代并摇瓶发酵,NCUF M8平均酶活力达0.208 U/mL,具有良好的遗传稳定性.发酵罐发酵参数优化结果表明:最佳发酵参数为,发酵时间4 d,接种量2％,单宁酸质量浓度60 g/L,溶氧体积分数45％,诱导物添加时间36 h,该条件下NCUF M8酶活力为1.377 U/mL,相比未优化酶活力(0.212 U/mL)显著提高了549％(P＜0.05).研究实验结果为单宁酶的高产菌株选育提供了新的依据,并可助力节约单宁酶的工业化生产成本.

摘要： 本实验室自主分离的黑曲霉N5-5所产单宁酶已发现对没食子酸丙酯具有良好酶解效果.为了单宁酶的工业化应用,本次研究大批量培养单宁酶,探究其对单宁酸的酶解效果及酶的固定化效果.发酵采用先液体扩培后固体发酵的形式,提酶后利用陶瓷膜过滤技术纯化、浓缩酶液,并对比冷冻干燥和喷雾干燥两种不同干燥方式,还使用树脂载体对酶进行固定化.实验表明,纯化后单宁酶酶活达258.53 U/mL,可水解10％至50％浓度的单宁酸,其中30％以下底物浓度酶解效果较好;冷冻干燥对酶活影响不大而喷雾干燥使酶活降为174.02 U/mL;另外,单宁酶通过树脂载体固定化后,在实验条件下可重复使用至少4次.研究为提高黑曲霉N5-5发酵所产单宁酶的媒介效率、降低酶解反应成本、实现商业化生产建立了理论基础.

摘要： 高粱中的单宁多集中在种皮上,籽粒颜色深的类型单宁含量较高,籽粒颜色浅的单宁含量较低。单宁带有涩味,遇铁呈蓝黑色,能使蛋白质凝固,对酶制剂和酵母均有破坏作用。本文通过试验在蒸煮过程中添加单宁酶,发现可以减弱单宁对酶制剂和酵母的抑制作用,降低糊化粘度,提高发酵成熟醪酒度。

摘要： 黑曲霉B0201固态发酵生产胞外单宁酶，用HPLC是测定了五倍子中没食子酸的含量，对酶反应的转化的最适pH、温度、反应时间、底物浓度等进行研究，以五倍子为底物时，单宁酶的Km和Vmax分别是24.1g/L和23.04μmol/(L·min)。

摘要： 为获得单宁酶高产菌株，利用低能N+注入技术对黑曲霉原始菌株TA9701进行诱变选育。在最佳辐照能量与剂量条件下，经过多轮注入，最终筛选到一株高产菌株J-T18。通过对底物浓度，接种量，通气量及发酵温度等发酵条件进行优化，突变株的单宁酶产量达到了38.5U/mL，较原始菌株提高了近四倍，且遗传性能稳定。同时研究了金属离子和表面活性剂对突变株产酶的影响，结果表明Mn2+与Sn2+对菌株产酶有促进作用。

摘要： 单宁酶是一种诱导酶,能水解单宁酸生成没食子酸和葡萄糖,广泛应用于茶饮料、食品、医疗、化妆品和制革等领域.本文应用N+离子束注入技术诱变选育黑曲霉单宁酶高产突变株.对出发菌株的生长进程、产酶进程和离子束诱变参数进行研究,结果显示30°C、180 r/pm 条件下发酵80 h时,酶活最高;N+离子在10Kev能量和60×(2.6×1013 )ions/cm2 剂量下的诱变效果最好.在上述条件下,对野生型出发菌株进行三轮连续诱变后得到一株高产突变株,其单宁酶生产性能比野生出发菌株提高了2.66倍.

摘要： 单宁酶通过水解酯型儿茶素释放没食子酸和简单儿茶素,从而可以降低茶汤苦涩味和冷后浑的产生.本试验比较了单宁酶不同添加浓度、水解时间和水解工艺对酯型儿茶素水解程度、感官品质及澄清度的影响。研究结果显示,随着单宁酶添加浓度的增加和水解时间的延长,酯型儿茶素含量下降,简单儿茶素和没食子酸含量增加,茶汤pH下降,苦涩味下降,最佳单宁酶添加浓度和水解时间分别为0.07%(w/v)和60 min;茶汤水解处理的酯型儿茶素水解程度及茶汤澄清度都明显高于混合水解处理,茶汤水解工艺更适合于绿茶茶汤的单宁酶水解处理.

摘要： 单宁酶通过水解酯型儿茶素释放没食子酸和简单儿茶素，从而可以降低茶汤苦 涩味和冷后浑的产生。本试验比较了单宁酶不同添加浓度、水解时间和水解工艺对酯 型儿茶素水解程度、感官品质及澄清度的影响。研究结果显示，随着单宁酶添加浓度 的增加和水解时间的延长，酯型儿茶素含量下降，简单儿茶素和没食子酸含量增加，茶汤pH 下降，苦涩味下降，最佳单宁酶添加浓度和水解时间分别为0.07%（w/v）和 60 min；茶汤水解处理的酯型儿茶素水解程度及茶汤澄清度都明显高于混合水解处理，茶汤水解工艺更适合于绿茶茶汤的单宁酶水解处理。

摘要： 对黑曲霉B0201利用五倍子为诱导物固体发酵产胞外单宁酶的酶学性质进行了研究。结果表明：该酶的最适温度为40°C,最适pH为5.0,低于60°C时的热稳定性高,60°C以上迅速失活。Zn2+,Mg2+,吐温80,EDTA等对酶活无明显影响,Fe3+,Cu2+,Fe2+,Ba2+,Mn2+,Ca2+,A13+等对酶有抑制作用。以没食子酸丙酯(PG)为底物,单宁酶的米氏常数Km为0.514mmol／L,Vmax为71.8μmol／L·min。

摘要： 用纸层析和紫外分光光度法定性定量地测定了不同培养基中黑曲酶产单宁酶的变化.摸索了不同培养基中黑曲酶发酵生产没食子酸的含量.探明在分别以豆饼粉提取液和NaNO为氨源的A、C培养基中,发酵生产的没食子酸含量稳定.而在以硫酸铵和酵母浸膏为氨源的B培养基中没食子酸的含量变化显着,在120小时没食子酸已基本消失.

摘要： 本文研究了香蕉抗性淀粉含量和单宁含量与香蕉成熟度的关系,再通过单因素实验和正交实验方法,优化单宁酶酶解去除单宁的条件,以提取出纯度更高的香蕉抗性淀粉.研究结果表明:1.随着成熟度的增加,香蕉果肉的硬度越小,抗性淀粉含量越少,单宁含量也越少.2.单宁酶酶解四个因素对单宁脱除效果的影响大小依次为:单宁酶用量＞酶解温度＞酶解时间＞酶作用pH.最佳酶解条件为单宁酶用量0.12％,pH 6.5,50°C,酶解时间为100 min,该条件下单宁脱除率达56.70％.

摘要： 百药煎有悠久的使用历史,是由五倍子、茶叶与酒曲经发酵制成的表面布满“白霜”的块状物,具有清热化痰,生津止咳的功效。但其原料、制法等在不同文献中差异巨大,特别是影响发酵的关键性因素酒(酵)曲却没有明确的规定。学者普遍认为主要系因五倍子鞣质被单宁酶分解为没食子酸所致,高效单宁酶的酒(酵)曲对于发酵效果就极其重要。本文以发酵外观性状、TLC图谱和产生的没食子酸含量为指标筛选百药煎的发酵酒曲。

摘要： 黑曲霉单宁酶酶法转化五倍子单宁酸生产没食子酸新工艺已经通过中间试验成果鉴定.文中概述了酶法转化五倍子单宁酸生产没食子酸的原理和方法、酶源菌种的分离和选育、工艺技术的特点、产品质量规格及在国内食品、医药行业相关部门的应用等.结果表明该酶法生产没食子酸新工艺具有原辅料来源易得、菌种单宁酶活力高、生产性能较稳定、生产成本低廉、工艺操作方便、产品质量优等特点,己经达到国内领先地位。

摘要： 本发明涉及单宁降解技术，公开了一种产黄青霉及其在制备单宁酶和降解单宁中的应用。具体地，本发明提供一种产黄青霉，所述产黄青霉的保藏编号为GDMCC No.61268。本发明还提供一种菌剂，该菌剂含有上述的产黄青霉。本发明还提供一种降解单宁的方法，该方法包括：将上述产黄青霉和/或上述菌剂与含有单宁的样品接触。本发明提供的产黄青霉能够高效生产单宁酶，且降解条件具有广泛的pH适应性和温度耐受性，酶解效率高，为单宁酶的工业化生产及其下游产物的全线绿色生产、安全生产提供依据。

摘要： 本发明涉及单宁降解技术，公开了一种泡盛曲霉及其在制备单宁酶和降解单宁中的应用。具体地，本发明提供一种泡盛曲霉，所述泡盛曲霉的保藏编号为GDMCC No.61266。本发明还提供一种菌剂，该菌剂含有上述的泡盛曲霉。本发明还提供一种降解单宁的方法，该方法包括：将上述泡盛曲霉和/或上述菌剂与含有单宁的样品接触。本发明提供的泡盛曲霉能够高效生产单宁酶，且酶解反应的条件具有广泛的pH适应性，从而能够在短时间内高效催化单宁的降解，不易造成物质变性。

摘要： 本发明属于单宁降解技术领域，具体涉及一种黄柄曲霉及其在制备单宁酶和降解单宁中的应用。针对目前单宁酶产量低、降解单宁产鞣花酸无法工业化生产的问题，本发明提供了一种黄柄曲霉或其菌剂在制备单宁酶和降解单宁中的应用。本发明还同时给出了上述黄柄曲霉或其菌剂降解单宁的方法，步骤为：将上述黄柄曲霉和/或上述菌剂与含有单宁的样品进行发酵。另外，本发明还通过了一种黄柄曲霉，保藏编号为GDMCC No.61426。本发明提供的黄柄曲霉能够高效生产单宁酶，且酶解反应的条件具有广泛的pH适应性，从而能够在短时间内高效催化单宁的降解，能够有效提高经济效益。

摘要： 本发明涉及单宁降解技术，公开了一种泡盛曲霉及其在制备单宁酶和降解单宁中的应用。具体地，本发明提供一种泡盛曲霉，所述泡盛曲霉的保藏编号为GDMCC No.61266。本发明还提供一种菌剂，该菌剂含有上述的泡盛曲霉。本发明还提供一种降解单宁的方法，该方法包括：将上述泡盛曲霉和/或上述菌剂与含有单宁的样品接触。本发明提供的泡盛曲霉能够高效生产单宁酶，且酶解反应的条件具有广泛的pH适应性，从而能够在短时间内高效催化单宁的降解，不易造成物质变性。

摘要： 本发明涉及单宁降解技术，公开了一种产黄青霉及其在制备单宁酶和降解单宁中的应用。具体地，本发明提供一种产黄青霉，所述产黄青霉的保藏编号为GDMCC No.61268。本发明还提供一种菌剂，该菌剂含有上述的产黄青霉。本发明还提供一种降解单宁的方法，该方法包括：将上述产黄青霉和/或上述菌剂与含有单宁的样品接触。本发明提供的产黄青霉能够高效生产单宁酶，且降解条件具有广泛的pH适应性和温度耐受性，酶解效率高，为单宁酶的工业化生产及其下游产物的全线绿色生产、安全生产提供依据。

摘要： 本发明属于单宁降解技术领域，具体涉及一种杂色曲霉在制备单宁酶和降解单宁中的应用。针对目前单宁酶产量低、降解单宁产鞣花酸无法工业化生产的问题，本发明提供了一种杂色曲霉或其菌剂在制备单宁酶和降解单宁中的应用。本发明还同时给出了上述杂色曲霉或其菌剂降解单宁的方法，步骤为：将上述杂色曲霉和/或上述菌剂与含有单宁的样品进行发酵。本发明提供的杂色曲霉能够高效生产单宁酶，且酶解反应的条件具有广泛的pH适应性，从而能够在短时间内高效催化单宁的降解，能够有效提高经济效益。

摘要： 本发明属菌株筛选鉴定技术领域，公开了一种产单宁酶假丝酵母菌的筛选及其酶活性测定方法，包括土样处理、菌株的分离纯化、摇瓶发酵并测其酶活性等，确定目的菌株；再通过打孔法和测量酶水解圈法进行菌种复筛。本发明通过摇瓶发酵、酶活性测定等一系列步骤，从土壤中分离纯化获得了1株酶活性较稳定的产单宁酶的菌株GL‑4；经分子生物学鉴定GL‑4菌属于假丝酵母菌，该菌株产酶酶活性为244.530U/mL。本发明的结果为产单宁酶微生物的分离筛选提供了实验依据，也为微生物源单宁酶生产奠定基础。通过正交试验，优化后其酶活性达到395.948U/mL，较优化前提高了61.9％。

摘要： 本发明公开了一种单宁酶恒温酶解技术制备蒸青抹茶的方法，该方法以初夏茶叶鲜叶为原料，在抹茶加工粗捻和中捻工序之间加入生物酶解工序，利用单宁酶降解夏茶中的茶多酚，并释放络合的氨基酸，降低酚氨比，克服夏茶在茶多酚含量高、游离氨基酸低的不足，以及简单添加单宁酶工艺酶解时间短、处理效果差的弱点，得到茶多酚降低、氨基酸含量升高，接近传统春茶抹茶原料的品质，扩大抹茶原料的范围，使夏茶的利用率提高。

摘要： 本发明属于固定化酶技术领域，公开了一种磁性氧化石墨烯/多层纳米复合材料固定化单宁酶及其制备方法。本发明制备磁性氧化石墨烯/多层聚合物纳米复合材料，并以该材料为载体共价连接单宁酶，获得了良好的稳定性和可重复使用性，能够应用在香榧提取物单宁的降解。得益于多层聚合物的柔性臂和众多锚定位点、京尼平活化和天然生物交联、共价固定的功能和独特的磁分离特性，所制备的纳米生物复合材料具有稳定的酶活性。本发明所得磁性氧化石墨烯/多层聚合物纳米复合材料的催化效率、热稳定性、可重复使用性、储存性和实际应用证实了固定化单宁酶的稳定性、适应性和实用性。

摘要： 一株产高活性单宁酶的植物乳杆菌YL399及其在制备发酵饲料中的应用，涉及发酵饲料加工领域，一株产高活性单宁酶的植物乳杆菌YL399，已于2021年9月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20211228。本发明通过分离鉴定和筛选获得了一株产高活性单宁酶的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)YL399，并将其应用于党参发酵饲料中，经实验证实经发酵的党参饲料中单宁含量降低率为83.92％。本发明扩展了单宁酶的来源，为微生物发酵饲料的制备提供了一条新途径。