遗传转化体系

摘要： 为建立适宜MsDUF基因转化紫花苜蓿的遗传转化体系,本试验在已知的紫花苜蓿再生体系的基础上,采用农杆菌介导法,以保定紫花苜蓿(MedicagosativaL.cv.Baoding)下胚轴和子叶为转化受体,将MsDUF基因导入到紫花苜蓿中,通过对愈伤诱导、分化及生根培养阶段抗生素浓度的筛选建立了优化的遗传转化体系,同时对筛选获得的转基因紫花苜蓿进行PCR和RT-PCR检测。结果表明,农杆菌介导的MsDUF基因遗传转化的最佳条件为:将预培养2d的紫花苜蓿下胚轴用含pCAMBIA1301-MsDUF质粒的农杆菌菌液(OD_(600)为0.3~0.5)侵染10min,共培养暗处理2d后转入含30mg/LHyg和500mg/LCef的愈伤诱导培养基和分化培养基上诱导分化,待抗性芽长到2~3cm高时转入含30mg/LHyg和300mg/LCef的生根培养基上,得到6株经PCR检测为阳性的抗性植株;选取5株进行RT-PCR检测,均检测出大小与目的条带相吻合的清晰条带,证明MsDUF基因已成功转入保定紫花苜蓿中。本试验成功建立了农杆菌介导的高效MsDUF基因转化紫花苜蓿的遗传转化体系,为进一步研究MsDUF基因功能奠定了基础,同时为紫花苜蓿育种和种质创新提供了基础材料。

摘要： 微拟球藻是一类属于真眼点藻纲、球形或近似球形的单细胞真核生物。与其他真核微藻显著不同的是,该属的种类除叶绿素a外,并不含有其他类型的叶绿素。目前,该属有7个已定种。它们具有较高的光合作用效率、生物量和油脂(三酰甘油,TAG)含量,富含二十碳五烯酸(EPA),是工业化生产EPA的优质原料,也是鱼类幼体和轮形动物的饵料,已被批准作为人类新食品的原料。近年来,由于基因组序列的公布及遗传转化体系的建立,该属的种类已成为具有潜力的工业产油模式研究藻种。

摘要： 【目的】通过对生防菌淡紫灰链霉菌X33(Streptomyces lavendulae X33)建立稳定高效的遗传转化体系、评估启动子permE与内源性启动子启动活性,为菌株X33活性产物的生物合成机制研究、构建高产基因工程菌奠定基础。【方法】以携带整合型质粒pIB139的大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)为供体菌、菌株X33为受体菌进行接合转移;对影响接合转移效率的关键因素(接合转移培养基、热激温度、预萌发时间、供受体比例及抗生素覆盖时间等)进行优化;以质粒pIB139为骨架、β-葡萄糖苷酶(GUS)为报告基因构建启动子活性检测载体,分析4个内源性启动子及permE的启动活性。【结果】通过接合转移方法成功建立了菌株X33的遗传转化体系,其最佳接合转移条件为:孢子于55°C热激10 min,预萌发1 h,供、受体比例为10∶1,以高氏一号为接合转移培养基,混合培养12 h后覆盖抗生素,接合转移效率可达5.8×10^(-5);启动子活性分析表明:链霉菌常用启动子permE的启动活性远高于4个内源性启动子P116、P4565、P5092、P5500。【结论】建立及优化了菌株X33的遗传转化体系,确定了启动子permE在菌株X33中的启动活性。

摘要： 【目的】构建栾树遗传转化体系并通过转入东南景天HMA3基因对复羽叶栾树的基因进行定向改良,以提升其对镉(Cd)的富集能力与转运能力,为之后复羽叶栾树逆境抗性分子机制的研究提供基础。【方法】制备复羽叶栾树单细胞悬浮液,检测其基因组的大小;构建表达载体并转入农杆菌中,调节激素配比诱导复羽叶栾树形成愈伤组织,并通过农杆菌介导进行遗传转化;将筛选得到的阳性愈伤组织制备成原生质体,并用激光共聚焦观察;最后通过Cd胁迫试验检测栾树对Cd的富集能力与转运能力。【结果】通过与内参番茄的比较发现栾树的基因组大小约为335 Mb;在诱导复羽叶栾树愈伤组织时,加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)可以有效地防止愈伤组织发生褐化,加入10%椰汁后,复羽叶栾树愈伤组织的诱导成功率及生长速度均达到最佳;激光共聚焦观察复羽叶栾树阳性愈伤组织发现HMA3定位在细胞膜上;Cd胁迫试验显示,转入HMA3基因的复羽叶栾树,其Cd的富集系数提升了40.3%,转运系数提升了29.3%。【结论】复羽叶栾树较小的基因组决定了其在遗传过程中,有更大的可能保留外源基因,有效避免了外源基因的丢失;PVP及椰汁的加入大幅提升了复羽叶栾树愈伤组织诱导的成功率,并有效较少了愈伤组织的褐化;转入的HMA3成功在细胞膜上表达,对转基因复羽叶栾树的富集能力和转运能力都有显著提升。

摘要： 以吉林省马铃薯主栽品种"春薯4号"(Solanum tubberosum cv.Chunshu 4)无菌试管苗为材料,以茎段为外植体,采用L9(33)正交试验设计,研究植物激素对愈伤组织诱导和分化的影响;通过对遗传转化体系中的筛选剂浓度、抗生素种类及浓度等影响因素的优化,初步建立了马铃薯"春薯4号"的遗传转化体系.结果表明:最适合愈伤组织诱导的培养基配方为MS+2.0mg/L6苄氨基嘌呤(6-BA)+0.2 mg/L萘乙酸(NAA)+0.3 mg/L 2,4-二氯苯酚代乙酚(2,4-D),"春薯4号"茎段的愈伤组织诱导率最高,为98.57％,愈伤组织为淡绿色,呈致密的哑铃形;最适合愈伤组织分化的培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L吲哚乙酸(IAA)+1.0 mg/L玉米素(ZT),愈伤组织的分化出苗率最高,为54.1％,幼苗粗壮,畸形苗少;在遗传转化体系中,筛选剂双丙氨膦浓度为6.0 mg/L时,为愈伤组织最适筛选压,为4.5 mg/L时,为再生苗最适筛选压;农杆菌抑菌剂最适组合为500 mg/L头孢霉素+200 mg/L羧苄青霉素.

摘要： 以马铃薯品种'并薯6号'无菌试管苗茎段作为外植体,通过对遗传转化过程中预培养时间、植物激素的种类及配比、筛选剂浓度和抗生素的种类及浓度进行研究,初步建立了马铃薯品种'并薯6号'的愈伤再生转化体系.结果表明,预培养时间为2 d时,愈伤组织诱导率、出苗率及转化频率最高.最适外植体愈伤组织诱导的培养基配方为MS+2.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)+0.5 mg/L 2,4-二氯苯酚代乙酚(2,4-D)+0.4 mg/L激动素(KT),愈伤组织的诱导率为86.7％,愈伤组织形态较紧密,为深绿色,茎段两端膨大呈哑铃状,表面的白色须状物和毛状根较少.最适愈伤组织分化的培养基配方为MS+1 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)+1 mg/L赤霉素(GA3)+1 mg/L玉米素(ZT),幼苗比较粗壮,长势良好.最适的植株再生及生根筛选剂为10 mg/L的潮霉素(Hygromycin B,Hyg),转化频率较高,为20.3％.农杆菌抑制剂的最适浓度为200 mg/L的特美汀(Timentin,TMT),且在愈伤组织诱导、分化及生根阶段都需要加入TMT.综上所述,通过对农杆菌介导的愈伤再生转化过程中各个因素的研究,初步建立了'并薯6号'的遗传转化体系,为马铃薯分子育种发展提供一定的基础.

摘要： 为建立稳定的农杆菌介导的菠萝遗传转化体系,以台农17号菠萝幼嫩愈伤组织为试验材料,以GUS基因瞬时表达率为遗传转化效果评价指标,应用单因素试验法,研究了卡那霉素对台农17号菠萝愈伤组织不定芽分化的影响以及不同菌株、菌液浓度、共培养时间和乙酰丁香酮的添加等转化相关因素对菠萝遗传转化的影响.结果表明,80mg/L卡那霉素浓度可完全抑制不定芽分化,农杆菌菌株采用LBA4404,菌液浓度OD600为0.8,共培养4d时遗传转化效果最佳,GUS基因瞬时表达率达到39.44％,而菌液中添加乙酰丁香酮未明显提高GUS基因瞬时表达率.研究初步建立了农杆菌介导的台农17号菠萝遗传转化体系,为开展菠萝关键基因功能验证和品种改良搭建了遗传转化平台.

摘要： 利用农杆菌介导技术,以Bar基因为筛选标记,用高山离子芥的冷诱导基因Cbcor15a侵染水稻品种日本晴的愈伤组织,经分化诱导后获得了再生植株.经Cef和PPT筛选,共获得转化Cbcor15a基因的日本晴再生苗9株;经PCR检测和Basta涂抹实验,结果证明有6株再生苗呈阳性.本遗传转化体系的建立可为利用转Cbcor15a基因选育具有耐冷性的水稻新品种提供参考.

摘要： 杨凌链霉菌(Streptomyces yanglingensis)KM-1-2是从银杏种子中分离到的一株新菌,为对其次级代谢产物基因簇进行研究,需建立该菌株的遗传转化体系.通过接合转移的方法成功建立杨凌链霉菌KM-1-2的遗传转化体系,并确定最佳接合转移条件:以2CMY为接合转移培养基,孢子于50°C热激10 min,抗生素覆盖时间介于18～19 h,其中萘啶酮酸质量浓度为25 mg/L,安普霉素为3 mg/L,接合转移效率达1.052×10-5.同时,利用该转化体系,过表达KM-1-2基因组中的1个SARP转录调控因子km 790.与野生型链霉菌KM-1-2相比,过表达菌株Skm790生长速率加快,产孢时间提前,对部分病原真菌的拮抗性增强,而且代谢产物图谱发生明显变化.

摘要： [目的]建立农杆菌介导荸荠秆枯病菌(Cylindrosporium eleocharidis)的遗传转化体系,构建该病菌的突变体库并进行突变体筛选,为荸荠秆枯病病原菌的分子机理研究提供参考依据.[方法]运用农杆菌介导的真菌转化方法,将含有绿色荧光蛋白(GFP)的双元载体pEX4转化至荸荠秆枯病菌野生型菌株Ceh中,利用PCR、Southern blotting杂交和荧光显微镜检测等技术验证转化子.通过单因子变量[共培养基中的乙酰丁香酮(AS)、农杆菌诱导时间、病原菌孢子浓度、IM诱导培养基pH、共培养时间和共培养介质]试验,优化农杆菌遗传转化体系,并建立该病菌突变体库,分析突变体的形态变异和致病性.[结果]获得的最佳遗传转化条件为:共培养基中AS浓度为300 μmol/L,农杆菌诱导时间6h,真菌孢子浓度为107个/mL,诱导培养基pH5.6,共培养时间72 h,共培养介质为硝酸纤维素膜.在该优化条件下,农杆菌遗传转化体系转化效率达600 ～700个转化子/107个孢子.随机挑取转化子进行PCR检测均为阳性,T-DNA单拷贝插入率达77.8％,荧光显微镜均可检测到荧光信号.[结论]成功构建了农杆菌介导的荸荠秆枯病病原菌遗传转化体系和T-DNA插入突变体库,并筛选获得表型和致病性缺陷突变体,可用于指导荸荠秆枯病菌基因功能和病菌与寄主互作研究.

摘要： 本实验分别以玫瑰的未展开小叶和体细胞胚为转化受体材料,以GUS基因作为报告基因,对玫瑰的转化体系进行了研究.结果表明,以未展开小叶诱导不定芽再生作为转化受体系统并不适用于玫瑰的遗传转化,无法获得转基因的植株;而以次生胚增殖萌发再生为转化受体系统进行遗传转化的效果较好,可以获得转基因植株,并且通过不同大小的体细胞胚转化效果的比较发现,0.02～0.04g的体细胞胚团作为转化受体的转化效率最高,这些转基因株系通过了GUS的染色检测和PCR、southern杂交分子检测,证明了以体细胞胚为转化受体材料的可行性,也表明玫瑰遗传转化体系的成功建立.以此转化体系为基础,又将梅花的FT基因(PmgFT)转入到了玫瑰中,获得了转化株系23株,其中在培养瓶中持续开花的早花玫瑰株系11株,这些转基因株系也通过了PCR和RT-PCR分子水平上的检测,证明FT基因的确整合到了玫瑰的基因组中.

摘要： 随着白菜全基因组测序的完成,白菜开始成为植物功能基因组研究的模式植物,白菜基因的功能研究需要有一个高效的白菜遗传转化体系为基础.然而,白菜遗传转化困难,已成为影响白菜基因挖掘和功能研究的一大障碍.围绕白菜的遗传转化技术,从遗传因素和外界因素两个方面着重介绍了农杆菌介导的白菜遗传转化体系中不同因素对再生频率和转化效果的影响,为进一步研究高效的白菜遗传转化技术和开展白菜的功能基因研究提供参考.同时,也对转基因白菜品种培育的研究进展进行了介绍.

摘要： 本研究以加2、M1(dmy2母本)、加23、加24等8份优良玉米早熟和极早熟自交系为试材,对农杆菌介导玉米胚性愈伤组织离体培养体系进行了优化,旨在建立高效稳定的农杆菌介导玉米遗传转化体系.结果表明该体系为：适合基因型为加2和M1,诱导培养基2,4-D浓度为2mg·L-1,浸染液与共培养培养基AS浓度为150mg·L-1,菌液浓度(OD600=0.4)浸染15min,农杆菌菌株为LBA4404,恢复培养基头孢霉素和羧苄青霉素的浓度分别为350mg·L-1.

摘要： 本试验通过调节不同激素及其不同浓度配比来寻找茄子的高效遗传转化体系，通过农杆菌介导的方法得到30株PCR阳性转基因茄子植株，GUS染色结果显示DR5启动子能在转基因茄子植株的幼嫩叶片中表达，表明转入基因己经整合到植物基因组中，并能稳定表达。

摘要： 本研究以枇杷花药胚状体为试材,研究了预培养、共培时间、侵染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度等因素对遗传转化效率的影响,并就卡那霉素选择压做了进一步的筛选,优化了枇杷花药胚遗传转化体系。结果表明,预培养、侵染时问、共培养时间和共培养基中AS的浓度对枇杷花药胚转化都有一定的影响,其中以预培养2d,侵染20min,共培养2d,AS浓度为10～20mg·L-1对转化最有利,卡那霉素选择压最适浓度为110mg·L-1。

摘要： 本试验以玉米自交系昌7-2、郑58、黑糯为试材,建立和优化了农杆菌介导玉米自交系的遗传转化体系,并探讨了影响其遗传转化效率的主要因素.结果如下:侵染培养基加入60mg/L乙酰丁香酮(AS)或者在伤口处滴加2μl浓度为150μ mol/L的AS能显著提高转化效率;菌液浓度0D600值为0.7,侵染培养基的pH值为5.2,浸染时间为11-12min,共培养时间为3d,共培养温度为27°C时有利于抗性植株的产生.将获得的转基因植株进行PCR检测,结果表明,外源基因已经整合进玉米基因组中.这一转化体系的优化,为进一步高效地将有用基因导入玉米优良自交系奠定了基础.

摘要： CRISPR/Cas9基因编辑技术是近几年新发现的第三代基因组定点编辑技术,已经广泛应用在基因治疗、基因功能研究、农作物品种改良等领域的研究中.由于载体构建方法简单,突变效率高等特点,CRISPR/Cas9己逐渐替代其他基因组靶向修饰方法,成为基因改造和功能基因研究中不可或缺的技术手段.本研究中通过多靶点CRISPR/Cas9载体构建与优化、大豆快速遗传转化体系建立、高效突变检测体方法筛选，对CRISPR/Cas9系统在大豆功能基因组学中的应用进行研究。目前，利用该系统成功实现了多个基因的靶向敲除，获得稳定的目标基因大片段靶向敲除体系，并对靶点选择与突变类型之间的关系进行了分析：借助靶向敲入系统，已成功实现了外源报告基因(AsRed)在植物基因组的靶向敲入和表达。最后，对CRISPR/Cas9基因组靶向修饰技术在大豆功能基因组学中的应用进行了讨论。

摘要： 为构建高效的转化体系,本文选用野生种Solanum etuberosum无菌苗的叶片和茎段为外植体,以红色荧光蛋白RFP为报告基因,通过农杆菌介导方法进行S.etuberosum遗传转化.结果表明,同时具有卡那霉素抗性和红色荧光蛋白基因标记的转基因马铃薯S.etuberosum,荧光蛋白基因可以在活体细胞中提供可视化检测体系.建立的基于不结薯材料S.etuberosum建立的马铃薯遗传转化体系,为马铃薯结薯相关的基因功能研究奠定基础。

摘要： 本研究以结实桂花(Osmanthus fragrans Lour.)早期子叶期的未成熟合子胚为外植体材料,在MS+0.5mg·L-12,4-D+1.0mg·L-16-BA初始培养基上暗培养30天后诱导得到的胚性愈伤组织作为遗传转化的受体,利用根癌农杆菌介导的方法,通过对不同的侵染及培养条件的摸索,初步探索了桂花的遗传转化体系的条件.结果表明,桂花胚性愈伤组织的卡那霉素的选择敏感性浓度为200mg·L-1,头孢霉素浓度为300mg·L-1.GUS瞬时表达表明最优的转化条件为:农杆菌菌株为EHA105时,侵染菌液浓度为0.6,侵染时间为20min,共培养天数为2d,共培养时培养基中添加100μM AS时效率最高.选择培养基为MS+0.5ag·L-1NAA+1.0mg·L-1BA+200mg·L-1Km+300mg·L-1Cef.下一步将继续优化选择培养基抗生素的种类和浓度,解决反菌问题,以获得完整转化植株.

摘要： 目的：探讨根癌农杆菌介导须癣毛癣菌的遗传转化条件及其影响因素.方法：构建双元载体pDHt/hph,通过根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)方法对须癣毛癣菌进行非定点的遗传转化,并设定不同的共培养温度(24°C,25°C,26°C,27°C,28°C,29°C)、共培养时间(12h，24h，36h,48h，72h)及共培养媒介(尼龙膜、硝酸纤维素膜、滤纸),观察在不同条件下的遗传转化效率.结果：共培养温度、共培养时间、共培养媒介均对根癌农杆菌介导须癣毛癣菌转化效率产生影响.结论：使用尼龙膜做媒介,28°C,共培养48小时为根癌农杆菌介导的须癣毛癣菌遗传转化体系的最优条件。

摘要： 本发明提供了一种小球藻硝酸还原酶基因缺陷型稳定表达的转化体系的构建方法，包括将小球藻硝酸还原酶基因和外源基因表达盒进行连接，使该外源基因表达盒的两端分别连有小球藻硝酸还原酶基因的5′端和3’端的序列，从而构建一种可以转化小球藻的同源重组表达载体的步骤；本发明还提供了一种小球藻硝酸还原酶基因缺陷型稳定表达的转化体系和一种用于构建小球藻硝酸还原酶基因缺陷型稳定表达的转化体系的同源重组表达载体。

摘要： 本发明公开了一种检测橡胶树白粉菌遗传转化效率的方法，所述方法包括如下步骤：将重组丝状真菌接种至橡胶树古铜期叶片上进行培养后喷施潮霉素B进行筛选，取发病叶片连同菌丝用GUS染色液进行染色，被染成蓝色的菌丝所对应的重组丝状真菌即为转化成功的转化子。本发明提供了一种可用于转化橡胶树白粉菌等丝状真菌且可用于评估橡胶树白粉菌转化体系转化效率的重组质粒，此重组质粒携带由橡胶树白粉菌核糖体蛋白编码基因RP60启动子序列融合GUS基因序列的重组报告基因。使用此重组质粒转化橡胶树白粉菌时，可对转化后获得的转化子菌丝进行简单的GUS染色来判断报告基因是否转化成功，相比以往传统检测转化子的方法检测效率更高。

摘要： 本发明提供了一种小球藻硝酸还原酶基因缺陷型稳定表达的转化体系的构建方法，包括将小球藻硝酸还原酶基因和外源基因表达盒进行连接，使该外源基因表达盒的两端分别连有小球藻硝酸还原酶基因的5′端和3’端的序列，从而构建一种可以转化小球藻的同源重组表达载体的步骤；本发明还提供了一种小球藻硝酸还原酶基因缺陷型稳定表达的转化体系和一种用于构建小球藻硝酸还原酶基因缺陷型稳定表达的转化体系的同源重组表达载体。

摘要： 本发明公开了一种老芒麦遗传转化体系的建立方法及遗传转化方法，属于植物生物工程技术领域。所述老芒麦遗传转化体系的建立方法对五种外植体愈伤诱导能力进行测试和统计，确定幼穗诱导的愈伤为最佳转化受体；用基因枪法进行介导转化老芒麦幼穗以及幼穗愈伤，分别挑选老芒麦幼穗诱导25d、35d的胚性愈伤组织作为靶愈伤，轰击前对靶愈伤进行两种方法预处理：高渗处理和滤纸干燥，轰击后的愈伤组织上继代培养基于暗培养条件进行恢复培养。最终确定了以25d的幼穗愈伤为转化受体，滤纸干燥预处理2h的基因枪介导川草2号老芒麦的遗传转化方法。所述方法能够获得再生效率为63％的老芒麦幼苗以及转化效率约40％的老芒麦阳性愈伤。

摘要： 本发明涉及遗传转化领域，具体地，涉及一种构建野生番茄里基茄再生体系及遗传转化体系的方法。所述包括步骤：（1）里基茄无菌苗的培养；（2）在愈伤诱导培养基CIM中诱导里基茄的根、茎和叶三种不同外植体产生愈伤组织与丛生芽点；（3）将诱导出的丛生芽进行单株分离，转入无菌苗培养基中诱导生根成苗。本发明选取野生番茄材料里基茄为再生和遗传转化研究的对象，而不是基因型专性很强的现代栽培番茄，更利于开展番茄基因工程方面的研究和番茄分子育种的进程；建立的里基茄的相应体系，适于三种外植体，并且转化介质和培养条件完全一致，大大节约了相关研究的费用支出；更重要的是，再生和转化效率高、体系稳定、试验时长短。

摘要： 本发明提供了一种芸香科植物的遗传转化体系、遗传转化方法和应用，涉及遗传转化技术领域。本发明提供一种以发根农杆菌K599介导的，直接对芸香科植物的枝条进行遗传转化的遗传转化体系。利用本发明所述遗传转化体系可进行遗传转化和基因编辑，能够有效克服农杆菌转化法的诸多缺陷；遗传转化体系周期为14～28天，节省时间，有效缩短柑橘基因功能研究周期；遗传稳定性高，可以避免嵌合体的形成。利用本发明所述遗传转化体系进行遗传转化或基因编辑，获得的转化再生植株或基因编辑植株可以实现基因功能的验证，且所述遗传转化或基因编辑方法，无需无菌环境培育无菌苗，并且免除愈伤组织的诱导及组织培养的过程，简化实验操作，降低实验成本。

摘要： 本发明公开了一种老芒麦遗传转化体系的建立方法及遗传转化方法，属于植物生物工程技术领域。所述老芒麦遗传转化体系的建立方法对五种外植体愈伤诱导能力进行测试和统计，确定幼穗诱导的愈伤为最佳转化受体；用基因枪法进行介导转化老芒麦幼穗以及幼穗愈伤，分别挑选老芒麦幼穗诱导25d、35d的胚性愈伤组织作为靶愈伤，轰击前对靶愈伤进行两种方法预处理：高渗处理和滤纸干燥，轰击后的愈伤组织上继代培养基于暗培养条件进行恢复培养。最终确定了以25d的幼穗愈伤为转化受体，滤纸干燥预处理2h的基因枪介导川草2号老芒麦的遗传转化方法。所述方法能够获得再生效率为63％的老芒麦幼苗以及转化效率约40％的老芒麦阳性愈伤。

摘要： 本发明公开了一种高效稳定广谱紫花苜蓿遗传转化方法及其获得的转化体系，包括以下步骤：(1)灭菌材料的准备；(2)农杆菌的准备；(3)侵染；(4)组织培养。本发明建立了农杆菌介导的紫花苜蓿高效遗传转化体系，为通过转基因技术深入研究并发掘紫花苜蓿的基因功能奠定了基础，也为紫花苜蓿的分子改良创造了条件。本发明将7个品种在相同的背景下(相同的转化载体、相同的插入基因、相同的外植体数)进行比较，较为科学、准确的进行了紫花苜蓿代表性品种(中国东北、华北、西北和国外引进的代表品种)的分子遗传转化研究，能够代表中国大多数紫花苜蓿品种的情况，建立了一个高效、稳定、广谱的紫花苜蓿遗传转化体系。

摘要： 本发明公开了一种二倍体马铃薯CI P149高效离体再生体系及茎段遗传转化体系的构建，步骤如下：1)马铃薯材料CI P149的茎尖在MS30基础培养基上培养；取无生长点的茎段为外植体平铺在P‑MS20平板培养基上预培养；2)活化根癌农杆菌GV3101阳性转化菌株，摇菌至OD约0.5，用液体MS20悬浮菌体后，加入AS，弃菌液，放置于灭菌滤纸上吸干菌液，然后平铺在C‑MS20平板培养基上培养；3)经两天共培养的外植体均匀更换至培养基上进行诱导愈伤处理；4)外植体均匀更换至愈伤诱导培养基CI M上进行诱芽处理2周，之后每2周更换一次新的芽诱导培养基SI M直至出芽。本发明构建的二倍体马铃薯CI P149的遗传转化体系，得到的愈伤组织致密，颜色深绿，分化出芽仅需2个月至2个半月，且转化效率高。

摘要： 本发明涉及遗传转化领域，具体地，涉及一种构建野生番茄里基茄再生体系及遗传转化体系的方法。所述包括步骤：（1）里基茄无菌苗的培养；（2）在愈伤诱导培养基CIM中诱导里基茄的根、茎和叶三种不同外植体产生愈伤组织与丛生芽点；（3）将诱导出的丛生芽进行单株分离，转入无菌苗培养基中诱导生根成苗。本发明选取野生番茄材料里基茄为再生和遗传转化研究的对象，而不是基因型专性很强的现代栽培番茄，更利于开展番茄基因工程方面的研究和番茄分子育种的进程；建立的里基茄的相应体系，适于三种外植体，并且转化介质和培养条件完全一致，大大节约了相关研究的费用支出；更重要的是，再生和转化效率高、体系稳定、试验时长短。