肌球蛋白重链

摘要： 【目的】研究肌球蛋白重链和肌动蛋白磷酸化对其乙酰化水平、肌动球蛋白解离及ATP酶活性的影响,为通过调控磷酸化水平改善肉品嫩度提供理论依据。【方法】以羊背最长肌为材料制备肌肉匀浆液,采用碱性磷酸酶抑制剂(抑制去磷酸化)和蛋白激酶抑制剂(抑制磷酸化)调控其磷酸化水平,在4°C分别孵育0、0.5、4、12、24、48和72 h,利用SDS-PAGE电泳和荧光染色、蛋白质免疫印迹、ATP酶活性测定试剂盒分析蛋白质磷酸化水平、乙酰化水平、肌动球蛋白解离程度和ATP酶活性随孵育时间的变化;利用分子动力学模拟分析肌球蛋白重链和肌动蛋白磷酸化对肌动球蛋白结构的影响。【结果】碱性磷酸酶抑制剂处理组中肌球蛋白重链磷酸化水平在孵育4、12和72 h时显著高于对照组和蛋白激酶抑制处理组(P<0.05),肌动蛋白磷酸化水平在孵育4、12、24、48和72 h时显著高于对照组和蛋白激酶抑制处理组(P<0.05),表明肌球蛋白重链和肌动蛋白发生去磷酸化反应被碱性磷酸酶抑制剂所抑制。碱性磷酸酶抑制剂处理组中肌动蛋白乙酰化水平在孵育4、12、24、48和72 h时显著低于蛋白激酶抑制组(P<0.05),肌球蛋白重链乙酰化水平呈无规律变化,表明肌动蛋白磷酸化抑制其乙酰化,肌球蛋白重链磷酸化对其乙酰化影响无明显规律。分子动力学结果表明,肌球蛋白重链第2、3、54位丝氨酸等位点和肌动蛋白第54位丝氨酸、第55位酪氨酸等位点磷酸化增加了肌动球蛋白结构的总能量、势能和动能,降低了键能,导致肌动球蛋白结构变得不稳定。在0—72 h孵育过程中,碱性磷酸酶抑制剂处理组的肌动球蛋白解离程度始终高于蛋白激酶抑制处理组,ATP酶活性低于蛋白激酶抑制处理组(P<0.05),表明肌球蛋白重链和肌动蛋白磷酸化促进肌动球蛋白解离。【结论】肌球蛋白重链磷酸化直接促进肌动球蛋白解离,肌动蛋白磷酸化通过抑制其自身乙酰化促进肌动球蛋白解离。

摘要： 目的探讨不同浓度雌激素对骨骼肌成肌细胞增殖、分化及迁移的影响及机制。方法培养小鼠骨骼肌成肌细胞,分别给予17β-雌二醇(E2)10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6) mol/L及E210^(-8) mol/L+雌激素受体拮抗剂ICI182,780处理。Western印迹检测成肌细胞中ERα和ERβ表达情况;分别培养1、2、3、4、5 d,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况。培养48 h后,采用Transwell法检测细胞迁移。给予4%马血清(HS)诱导分化培养4 d,荧光显微镜下观察各组细胞肌管形成,通过免疫荧光化学法和Western印迹检测各组细胞中肌球蛋白重链(MYHC)及肌细胞生成蛋白(MyoG)基因的表达。结果随着E2浓度升高ERα表达也随之升高,当E2浓度为10-6 mol/L时,其表达量达最高值(P10-8 mol/L时,随着E2浓度升高,细胞迁移数逐渐下降,而给予E2受体拮抗剂ICI182,780处理后,迁移细胞数再次升高,但仍显著高于对照组且显著低于10-8 mol/L E2组(P10-8 mol/L时MYHC表达及肌管形成数目均随着E2浓度升高而增多,但当E2浓度>10-8 mol/L时,却呈现逐渐下降的趋势,给予E2受体拮抗剂ICI182,780处理后,肌管形成数目均显著低于10-9 mol/L E2组(P10-8 mol/L时,却均出现逐渐下降的趋势,10-8 mol/L组MYHC和MyoG的表达量与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。给予E2受体拮抗剂ICI182,780处理后,MyoG及MYHC水平均显著低于10-8 mol/L E2组(P<0.05)。结论E2能促进成肌细胞增值、分化及其肌管形成,其机制可能与ERα和ERβ表达变化及分化相关基因MyoG的表达有关。

摘要： 为探讨不同中性洗涤纤维(NDF)饲粮对青海黑藏羊体尺指数、肌纤维类型组成及肉品质的影响。选取40只体况良好、体重相近[(10.28±0.43)kg]的2月龄黑藏羊,随机分为2组,每组20只,分别饲喂NDF为26.33%(L组)和46.14%(H组)的饲粮。通过酶联免疫吸附法(ELISA)、ATP酶(ATPase)组织化学染色以及实时荧光定量PCR(real-time qPCR)对黑藏羊背最长肌的肌纤维特性、肌球蛋白重链(MyHCs)基因表达量及肉质特性进行了研究。结果显示:1)H组体躯指数显著小于L组(P<0.05)。2)H组Ⅱa型肌纤维数量比例显著大于L组(P<0.05),H组Ⅰ型和Ⅱa型肌纤维面积比例亦大于L组(P<0.05)。3)L组MyHC Ⅰ和MyHC Ⅱa基因的mRNA表达量显著小于H组(P<0.05),而MyHC Ⅱb和MyHC Ⅱx基因的mRNA表达量则相反(P<0.05)。4)相较于L组,H组超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)含量均提高,丙二醛(MDA)含量下降,其中二者总抗氧化能力差异显著(P<0.05)。5)L组剪切力显著大于H组(P<0.05),而红度(a*)则相反(P<0.05)。综上,与低水平NDF饲粮相比,高水平NDF饲粮条件下黑藏羊可有效减少酵解型肌纤维数量比例,并增强其抗氧化能力,在一定程度上能改善肉品质。

摘要： 背景:骨骼肌损伤后,骨骼肌成肌细胞分化融合形成多核肌管和肌纤维完成肌损伤修复,但该过程修复缓慢且不完全.血小板源生长因子BB可以刺激多种组织细胞增殖、分化及迁移,在各种损伤后组织修复过程中发挥了重要作用.目的:探讨不同浓度血小板源生长因子BB对骨骼肌成肌细胞增殖、分化及迁移的影响及作用机制.方法:培养小鼠骨骼肌成肌细胞(C2C12细胞),分别给予血小板源生长因子BB 0,5,10,20,40μg/L及血小板源生长因子受体抑制剂伊马替尼处理.采用免疫细胞化学法及Western-blot法检测C2C12细胞中血小板源生长因子受体表达情况;分别培养1,2,3,4,5 d后,采用CCK8法检测细胞增殖情况;给予诱导分化培养4 d,采用光学显微镜观察各组肌管的形成情况,通过免疫荧光化学法和Western-blot法观察各组肌管中肌球蛋白重链及MyoG基因的表达情况;培养48 h后,采用Transwell法检测细胞迁移情况.结果与结论:①免疫荧光化学及Western-blot均提示C2C12细胞中可检测到血小板源生长因子受体表达,半定量后统计学分析显示不同血小板源生长因子BB质量浓度组间血小板源生长因子受体表达量差异无显著性意义(P>0.05);②CCK8检测结果显示,与对照组(血小板源生长因子BB 0μg/L组)比较,不同质量浓度血小板源生长因子BB组C2C12细胞增殖无明显改变;③免疫荧光化学法检测结果显示,与对照组相比,血小板源生长因子BB处理组肌球蛋白重链阳性细胞数增多,计数平均每个显微镜视野下肌管形成数目提示血小板源生长因子BB质量浓度为40μg/L时成熟肌管形成数目最多,达(27.00±0.76)个/视野,且该组中MyoG表达数量增多最为明显,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05);④Transwell结果显示,与对照组相比较,不同质量浓度血小板源生长因子BB组C2C12细胞的迁移数量均增加,其中以40μg/L组迁移数目最高达144.00±13.03(P<0.05);⑤提示血小板源生长因子BB能够促进C2C12细胞迁移、分化及其肌管形成,且促分化机制与其增强与血小板源生长因子受体结合、从而提高分化相关基因MyoG的表达有关.

摘要： 背景:骨骼肌损伤后,骨骼肌成肌细胞分化融合形成多核肌管和肌纤维完成肌损伤修复,但该过程修复缓慢且不完全。血小板源生长因子BB可以刺激多种组织细胞增殖、分化及迁移,在各种损伤后组织修复过程中发挥了重要作用。目的:探讨不同浓度血小板源生长因子BB对骨骼肌成肌细胞增殖、分化及迁移的影响及作用机制。方法:培养小鼠骨骼肌成肌细胞(C2C12细胞),分别给予血小板源生长因子BB 0,5,10,20,40μg/L及血小板源生长因子受体抑制剂伊马替尼处理。采用免疫细胞化学法及Western-blot法检测C2C12细胞中血小板源生长因子受体表达情况;分别培养1,2,3,4,5 d后,采用CCK8法检测细胞增殖情况;给予诱导分化培养4 d,采用光学显微镜观察各组肌管的形成情况,通过免疫荧光化学法和Western-blot法观察各组肌管中肌球蛋白重链及MyoG基因的表达情况;培养48 h后,采用Transwell法检测细胞迁移情况。结果与结论:①免疫荧光化学及Western-blot均提示C2C12细胞中可检测到血小板源生长因子受体表达,半定量后统计学分析显示不同血小板源生长因子BB质量浓度组间血小板源生长因子受体表达量差异无显著性意义(P>0.05);②CCK8检测结果显示,与对照组(血小板源生长因子BB 0μg/L组)比较,不同质量浓度血小板源生长因子BB组C2C12细胞增殖无明显改变;③免疫荧光化学法检测结果显示,与对照组相比,血小板源生长因子BB处理组肌球蛋白重链阳性细胞数增多,计数平均每个显微镜视野下肌管形成数目提示血小板源生长因子BB质量浓度为40μg/L时成熟肌管形成数目最多,达(27.00±0.76)个/视野,且该组中MyoG表达数量增多最为明显,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05);④Transwell结果显示,与对照组相比较,不同质量浓度血小板源生长因子BB组C2C12细胞的迁移数量均增加,其中以40μg/L组迁移数目最高达144.00±13.03(P<0.05);⑤提示血小板源生长因子BB能够促进C2C12细胞迁移、分化及其肌管形成,且促分化机制与其增强与血小板源生长因子受体结合、从而提高分化相关基因MyoG的表达有关。

摘要： [目的]研究幼龄和成年牦牛肌肉抗氧化能力和肌纤维组织学特性.[方法]以自然放牧条件下3月龄幼龄和3岁龄成年牦牛(♂)背最长肌作为试验材料,利用双抗体夹心法、ATP酶染色法和PCR技术进行测定.[结果]①成年牛背最长肌Ⅰ型、ⅡA型和ⅡB型肌纤维直径、横切面积均高于犊牛,但ⅡB型肌纤维直径差异不显著(P>0.05),而犊牛背最长肌Ⅰ型、ⅡA型和ⅡB型肌纤维密度则显著高于成年牛(P0.05).[结论]3岁龄牦牛与3月龄牦牛相比,降低了氧化性肌纤维类型,影响其肉品质,同时抗氧化能力差异不显著.

摘要： 目的通过蛋白质组学技术分析携带MYH 7基因与MYBPC 3基因突变的肥厚型心肌病(HCM)患者心肌组织差异表达蛋白,探讨HCM患者临床表型差异的可能原因。方法选取于中国医学科学院阜外医院行改良扩大Morrow术治疗的HCM患者,其中携带MYH 7基因突变者33例(MYH7组),携带MYBPC 3基因突变者30例(MYBPC3组)。对手术中切除的心肌组织样本提取总蛋白,通过定量蛋白质组学技术筛选差异表达蛋白。随后对差异表达蛋白进行GO富集分析、KEGG通路富集分析和STRING蛋白相互作用分析。结果HCM患者心肌组织中共鉴定出3723种蛋白,其中39种蛋白在两组患者之间表达量存在显著差异。与MYH7组相比,MYBPC3组中ATP合酶F(0)复合体C1亚基(ATP5G1)等15种蛋白质表达量上调,24种蛋白质表达量下调。GO富集分析结果显示,两组患者之间差异表达蛋白主要富集的生物学过程为膜脂分布的调节过程、细胞免疫反应过程等。KEGG通路富集分析结果显示,仅Ⅺ型胶原α1链(COL11A1)等4种差异表达蛋白富集于蛋白质消化和吸收通路、糖尿病并发症AGE-RAGE信号通路。STRING分析结果显示,差异表达蛋白之间相互作用关系较弱。结论携带MYH 7和MYBPC 3基因突变的HCM患者间表达水平发生显著改变的蛋白数量较少,蛋白质表达谱差异较小;ATP5G1和COL11A1蛋白可能与两者不同临床表型有关。

摘要： 目的 通过蛋白质组学技术分析携带MYH 7基因与MYBPC3基因突变的肥厚型心肌病(HCM)患者心肌组织差异表达蛋白,探讨HCM患者临床表型差异的可能原因.方法 选取于中国医学科学院阜外医院行改良扩大Morrow术治疗的HCM患者,其中携带MYH7基因突变者33例(MYH7组),携带MYBPC3基因突变者30例(MYBPC3组).对手术中切除的心肌组织样本提取总蛋白,通过定量蛋白质组学技术筛选差异表达蛋白.随后对差异表达蛋白进行GO富集分析、KEGG通路富集分析和STRING蛋白相互作用分析.结果 HCM患者心肌组织中共鉴定出3723种蛋白,其中39种蛋白在两组患者之间表达量存在显著差异.与MYH7组相比,MYBPC3组中ATP合酶F(0)复合体C1亚基(ATP5G1)等15种蛋白质表达量上调,24种蛋白质表达量下调.GO富集分析结果显示,两组患者之间差异表达蛋白主要富集的生物学过程为膜脂分布的调节过程、细胞免疫反应过程等.KEGG通路富集分析结果显示,仅Ⅺ型胶原α1链(COL11A1)等4种差异表达蛋白富集于蛋白质消化和吸收通路、糖尿病并发症AGE-RAGE信号通路.STRING分析结果显示,差异表达蛋白之间相互作用关系较弱.结论 携带MYH 7和MYBPC3基因突变的HCM患者间表达水平发生显著改变的蛋白数量较少,蛋白质表达谱差异较小;ATP5G1和COL11A1蛋白可能与两者不同临床表型有关.

摘要： 目的 研究偏颌大鼠与正常成年大鼠左右侧嚼肌浅层细胞肌球蛋白重链Ⅱ型蛋白及快肌肌钙蛋白T3表达量的差异.方法 青春期(35天)雄性SD大鼠20只,随机分为1个实验组和1个对照组,每组10只.实验组大鼠配戴引导下颌左偏的矫治器形成功能性偏颌,对照组不配戴.实验组大鼠左侧嚼肌浅层为实验A组,右侧为实验B组.大鼠成年时(120天)处死.取实验A、B组及对照组大鼠嚼肌浅层细胞,采用Western-Blot法检测肌球蛋白重链Ⅱ型蛋白和快肌肌钙蛋白T3表达量的差异.结果 实验A组肌球蛋白重链Ⅱ型蛋白和快肌肌钙蛋白T3的表达量显著高于对照组(P<0.01);实验B组肌球蛋白重链Ⅱ型蛋白和快肌肌钙蛋白T3的表达量高于对照组(P<0.05);实验A组肌球蛋白重链Ⅱ型蛋白的表达量高于实验B组(P<0.05);实验A组和B组的快肌肌钙蛋白T3的表达量无明显差异.结论 大鼠左右侧嚼肌浅层细胞的收缩力差异和偏颌相关.

摘要： 目的 探讨肌球蛋白重链基因(MYH6) p.Gly743Arg和p.Glu1389Lys双突变与心脏表型的关系.方法 从2015至2020年就诊于重庆医科大学附属第二医院的52例无血缘关系的左心室肥厚(LVH)患者中筛选出携带MYH6基因p.Gly743Arg和p.Glu1389Lys双突变患者.二代全外显子测序检测技术对患者外周血进行基因检测,并对其家系成员基因组DNA进行Sanger测序验证.通过心电图、冠状动脉CT血管成像(CTA)、超声心动图、心脏磁共振成像(MRI)辅助检查手段,对患者心脏表型进行临床评估.结果 52例无血缘关系的LVH患者进行了全外显子基因检测,其中1例(1.9％) MYH6基因p.Gly743Arg和p.Glu1389Lys双突变(先证者).先证者母系成员中2位携带p.Glu1389Lys突变,但无明显临床表型;其父系成员中2位携带p.Gly743Arg突变,且有明显心动过缓临床表型,但无LVH.先证者男性,发病年龄21岁,表现为LVH伴窦性心动过缓,治疗前CTA未见冠状动脉狭窄,MRI提示左室舒张期末内径为58 mm.经血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂(ARNI)治疗后,心电图提示心率明显增加(从43次/min增加到72次/min),超声心动图提示左室舒张期末内径明显缩小(从60 mm缩小到49 mm).结论 MYH6基因p.Glu1389Lys突变可以不表现为心脏疾病表型;MYH6基因p.Gly743Arg突变可以表现为无症状性窦性心动过缓,但无LVH表型;而MYH6基因p.Gly743Arg和p.Glu 1389Lys双突变致心脏疾病表型较明显,青少年时期可出现无症状性LVH和窦性心动过缓表现,但经ARNI治疗可短期内逆转LVH表型.

摘要： 目的：探讨失神经支配对人喉内收肌和外展肌纤维表型转换及肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MHC)转型的影响以及变化规律.方法：按病程将人喉内收肌和外展肌标本分为失神经6～12月组、1～2年组、2～3年组、3～6年组、＞6年组和正常对照组.采用HE和Masson染色观测喉肌的形态学转变,采用免疫荧光、荧光定量PCR和Western blot分别检测喉肌MHC各亚型的转录和蛋白水平.结果：随着失神经时限的延长,所有肌纤维的平均直径逐渐减小,截面积逐渐减小,而胶原纤维截面积逐渐增加,以环杓侧肌为代表的喉内收肌肌萎缩速率和幅度均小于以环杓后肌为代表的喉外展肌.环杓后肌失神经支配后MHC-Ⅰ表达下降,而MHC-Ⅱ表达升高,以失神经1～2年为关键期;环杓侧肌失神经支配后总体MHC-Ⅰ表达变化不显著,仅表现为MHC-Ⅱ各亚型之间的调节,以失神经3～6年为关键期.内收肌MHC各型表达变化相对滞后;相同失神经时限的喉外展肌环杓后肌MHC表型表达变化的程度要大于内收肌环构侧肌。结论：由于不同收缩性质肌纤维类型的比例组成导致肌肉组织类型和功能特性的差异，失神经支配对喉内收肌和外展肌的肌纤维形态和肌纤维转型的影响是有差异的，外展肌MHC表达变化的程度和幅度大于内收肌。需恢复环杓后肌声带外展功能的延期喉返神经修复手术宜在损伤1年内进行，而恢复环杓侧肌声带内收功能的延期喉返神经修复手术可以选择在损伤3年内进行。为临床喉返神经修复手术的可行性和时机选择提供理论依据。

摘要： 目的：探讨间歇低氧训练对心肌细胞功能影响的分子机制。方法：以SD大鼠为研究对象，通过SDS-PAGE方法，观察4周的间歇低氧训练及训练后一周心肌细胞肌球蛋白两种异构型(α-MHC,β-MHC)表达的变化.结论:通过对大鼠心肌肌球蛋白重链(MHC)两种异构型α-MHC,β-MHC在蛋白水平表达的测定，I组、S组和IS组α-MHC含量总的趋势是逐渐增加的，C组在4周的时间内无显著变化。而β-MHC含量则逐渐降低。说明心肌肌球蛋白重链表达的调整可能是心肌对运动训练和间歇低氧适应的重要途径之一。

摘要： 肌纤维根据肌球蛋白重链(MyHC)的多态性可分为1，2a，2b和2x4种类型，在代谢上分别与慢速氧化型、快速氧化型、快速酵解型和中间类型相对应。肌纤维的生成在分子水平上受到肌细胞生成素基因的精确调控，肌纤维的类型在生长过程中不断发生转化，并受营养和非营养等因素的影响。在小鼠快肌纤维基因5′序列上有一个对肌球蛋白重链基因转录效率影响较大的AT2元件，在本研究中，我们在大白和通城两个品种中扩增了三个快肌纤维基因（MYH1、MYH2、MYH4）的5′侧翼序列的AT2元件，分析发现，其序列没有品种特异性，但在三个快肌纤维基因之间存在序列变异。

摘要： 为建立一准确、定量检测莱芜猪背最长肌肌球蛋白(MyHC)亚型mRNA表达的方法,客观评价肉质,本试验根据Ⅰ、Ⅱa、Ⅱx、Ⅱb型MyHC mRNA基因序列,设计合成引物,再将其RT-PCR扩增的目的片段克隆到pMD20-T载体,转化感受态大肠杆菌,重组质粒经筛选、鉴定,进行体外转录得到RNA标准品,梯度稀释,制作标准曲线。

摘要： 目的:研究参附注射液(SFI)改善大鼠心肌肥大的microRNA调控机制.rn 方法:健康SD大鼠行腹主动脉缩窄(AAC)术建立心肌肥大模型,动物分成3组:SFI组(6.0raL·kg-1·d-1)、model组(6.0mL·kg-1·d-1)和Sham组(6.0mL·kg-1·d-1),腹腔注射,连续12周.造模成功大鼠心肌作microRNA(miR)基因芯片筛选有显著差异表达的miRs,Real-time RT-PCR方法检测确认候选miR.利用生物信息学方法分析候选miR的候选靶基因,并用RT-PCR与Western blot方法检测靶基因mRNA及其靶蛋白表达水平.在苯肾上腺素(PE)刺激建立的培养乳鼠心肌细胞肥大模型,分别给予SFI,候选miR模拟物miR-mimic和抑制剂miR-inhibitor后,检测心肌细胞表面积,候选靶基因和靶蛋白表达的变化.rn 结果:model组大鼠HW/BW及LVW/BW显著高于Sham组和SFI组(P＜0.01);而SFI组HW/BW及LVW/BW与Sham组相比无显著差异;基因芯片筛选结果显示,model组与SFI组相比共有23种miRs差异表达显著,其中下调的有miR-181d-5p等13种;MHC mRNA及MHC蛋白在model组大鼠心肌中过表达,而在SFI组中的表达与Sham组接近.SFI上调PE刺激的心肌细胞miR-181d-5p水平,抑制PE刺激所致心肌细胞表面积增大;miR-181d-5p-mimic能抑制心肌细胞MHC蛋白表达,抑制细胞表面积增大,而miR-181 d-5p-inhibitor的作用结果相反.rn 结论:microRNA-181d-5p具有抑制心肌肥大的作用,SFI可能通过上调或维持miR-181d-5p的表达从而降低MHCmRNA与MHC蛋白的表达,抑制腹主动脉缩窄大鼠心肌肥大,从而改善大鼠心功能,对心肌肥大产生治疗作用.

摘要： 目的:研究参附注射液(SFI)改善大鼠心肌肥大的microRNA调控机制.rn 方法:健康SD大鼠行腹主动脉缩窄(AAC)术建立心肌肥大模型,动物分成3组:SFI组(6.0raL·kg-1·d-1)、model组(6.0mL·kg-1·d-1)和Sham组(6.0mL·kg-1·d-1),腹腔注射,连续12周.造模成功大鼠心肌作microRNA(miR)基因芯片筛选有显著差异表达的miRs,Real-time RT-PCR方法检测确认候选miR.利用生物信息学方法分析候选miR的候选靶基因,并用RT-PCR与Western blot方法检测靶基因mRNA及其靶蛋白表达水平.在苯肾上腺素(PE)刺激建立的培养乳鼠心肌细胞肥大模型,分别给予SFI,候选miR模拟物miR-mimic和抑制剂miR-inhibitor后,检测心肌细胞表面积,候选靶基因和靶蛋白表达的变化.rn 结果:model组大鼠HW/BW及LVW/BW显著高于Sham组和SFI组(P＜0.01);而SFI组HW/BW及LVW/BW与Sham组相比无显著差异;基因芯片筛选结果显示,model组与SFI组相比共有23种miRs差异表达显著,其中下调的有miR-181d-5p等13种;MHC mRNA及MHC蛋白在model组大鼠心肌中过表达,而在SFI组中的表达与Sham组接近.SFI上调PE刺激的心肌细胞miR-181d-5p水平,抑制PE刺激所致心肌细胞表面积增大;miR-181d-5p-mimic能抑制心肌细胞MHC蛋白表达,抑制细胞表面积增大,而miR-181 d-5p-inhibitor的作用结果相反.rn 结论:microRNA-181d-5p具有抑制心肌肥大的作用,SFI可能通过上调或维持miR-181d-5p的表达从而降低MHCmRNA与MHC蛋白的表达,抑制腹主动脉缩窄大鼠心肌肥大,从而改善大鼠心功能,对心肌肥大产生治疗作用.

摘要： 目的:研究参附注射液(SFI)改善大鼠心肌肥大的microRNA调控机制.rn 方法:健康SD大鼠行腹主动脉缩窄(AAC)术建立心肌肥大模型,动物分成3组:SFI组(6.0raL·kg-1·d-1)、model组(6.0mL·kg-1·d-1)和Sham组(6.0mL·kg-1·d-1),腹腔注射,连续12周.造模成功大鼠心肌作microRNA(miR)基因芯片筛选有显著差异表达的miRs,Real-time RT-PCR方法检测确认候选miR.利用生物信息学方法分析候选miR的候选靶基因,并用RT-PCR与Western blot方法检测靶基因mRNA及其靶蛋白表达水平.在苯肾上腺素(PE)刺激建立的培养乳鼠心肌细胞肥大模型,分别给予SFI,候选miR模拟物miR-mimic和抑制剂miR-inhibitor后,检测心肌细胞表面积,候选靶基因和靶蛋白表达的变化.rn 结果:model组大鼠HW/BW及LVW/BW显著高于Sham组和SFI组(P＜0.01);而SFI组HW/BW及LVW/BW与Sham组相比无显著差异;基因芯片筛选结果显示,model组与SFI组相比共有23种miRs差异表达显著,其中下调的有miR-181d-5p等13种;MHC mRNA及MHC蛋白在model组大鼠心肌中过表达,而在SFI组中的表达与Sham组接近.SFI上调PE刺激的心肌细胞miR-181d-5p水平,抑制PE刺激所致心肌细胞表面积增大;miR-181d-5p-mimic能抑制心肌细胞MHC蛋白表达,抑制细胞表面积增大,而miR-181 d-5p-inhibitor的作用结果相反.rn 结论:microRNA-181d-5p具有抑制心肌肥大的作用,SFI可能通过上调或维持miR-181d-5p的表达从而降低MHCmRNA与MHC蛋白的表达,抑制腹主动脉缩窄大鼠心肌肥大,从而改善大鼠心功能,对心肌肥大产生治疗作用.

摘要： 目的:研究参附注射液(SFI)改善大鼠心肌肥大的microRNA调控机制.rn 方法:健康SD大鼠行腹主动脉缩窄(AAC)术建立心肌肥大模型,动物分成3组:SFI组(6.0raL·kg-1·d-1)、model组(6.0mL·kg-1·d-1)和Sham组(6.0mL·kg-1·d-1),腹腔注射,连续12周.造模成功大鼠心肌作microRNA(miR)基因芯片筛选有显著差异表达的miRs,Real-time RT-PCR方法检测确认候选miR.利用生物信息学方法分析候选miR的候选靶基因,并用RT-PCR与Western blot方法检测靶基因mRNA及其靶蛋白表达水平.在苯肾上腺素(PE)刺激建立的培养乳鼠心肌细胞肥大模型,分别给予SFI,候选miR模拟物miR-mimic和抑制剂miR-inhibitor后,检测心肌细胞表面积,候选靶基因和靶蛋白表达的变化.rn 结果:model组大鼠HW/BW及LVW/BW显著高于Sham组和SFI组(P＜0.01);而SFI组HW/BW及LVW/BW与Sham组相比无显著差异;基因芯片筛选结果显示,model组与SFI组相比共有23种miRs差异表达显著,其中下调的有miR-181d-5p等13种;MHC mRNA及MHC蛋白在model组大鼠心肌中过表达,而在SFI组中的表达与Sham组接近.SFI上调PE刺激的心肌细胞miR-181d-5p水平,抑制PE刺激所致心肌细胞表面积增大;miR-181d-5p-mimic能抑制心肌细胞MHC蛋白表达,抑制细胞表面积增大,而miR-181 d-5p-inhibitor的作用结果相反.rn 结论:microRNA-181d-5p具有抑制心肌肥大的作用,SFI可能通过上调或维持miR-181d-5p的表达从而降低MHCmRNA与MHC蛋白的表达,抑制腹主动脉缩窄大鼠心肌肥大,从而改善大鼠心功能,对心肌肥大产生治疗作用.

摘要： 本发明公开了一种大黄鱼肌球蛋白重链抗菌肽LCMHC，其氨基酸序列为GAQLQKKIKELQARI，抗菌肽的分子量为1724道尔顿。本发明抗菌肽，可有效抑制金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌等致病性微生物生长，可作为制备预防或抑制金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌感染的药物。本发明为后续进一步研究大黄鱼肌球蛋白重链抗菌肽作为食品防腐剂和防止鱼病的饲料添加剂开发奠定了基础。

摘要： 本发明提供了一种构建基因替代小鼠研究野生型和突变体非肌性肌球蛋白重链II功能的方法。本发明改造的mpNTKV‑LoxP载体更适合于构建基因打靶载体特别是基因替代目的，新加入的Pac I和Swa I都是识别八个碱基的限制性内切酶，有利于较大DNA片段的插入。构建的MYH9基因替代(即内源MYH9基因被外源编码非肌性肌球蛋白重链II基因所替代)打靶载体通过电转导入小鼠ES细胞中，经过药物筛选，ES细胞单克隆挑选，Southern Blot或PCR鉴定，发生同源重组的阳性单克隆细胞率高达90％以上，易于获得所需细胞系。使用阳性ES细胞显微注射至小鼠囊胚获得MYH9基因替代嵌合体小鼠，并且该嵌合体小鼠可以交配传代，从而获得MYH9基因替代杂合子及纯合子后代。

摘要： 本发明涉及诱导β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达且遏制快速骨骼肌收缩蛋白质基因的微RNA，miR-208的鉴定。对此功能的抑制被建议作为心脏纤维化、肥大和/或心力衰竭的治疗方法，而且对此功能的提升可用于在肌肉骨骼病症的治疗中遏制慢速纤维基因和激活快速纤维基因。

摘要： 本发明为淡水鱼类肌球蛋白重链mRNA表达量快速检测试剂盒及其检测方法。试剂盒包括PCR扩增反应液A、对照cDNA；PCR扩增反应液A含有10×PCR反应缓冲液、氯化镁、dNTP、Taq酶、重链基因和内参基因特异性上、下游引物各一对、SYBR Green I染料，鱼类淡水鱼类肌球蛋白重链mRNA表达量的快速检测方法包括鱼的总RNA提取、鱼类淡水鱼类肌球蛋白重链mRNA的实时荧光PCR扩增和结果判定。本发明的优点是需要量少、快速、特异性强、灵敏度高、操作简便、重复性好。

摘要： 本发明公开了一种大黄鱼肌球蛋白重链抗菌肽LCMHC，其氨基酸序列为GAQLQKKIKELQARI，抗菌肽的分子量为1724道尔顿。本发明抗菌肽，可有效抑制金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌等致病性微生物生长，可作为制备预防或抑制金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌感染的药物。本发明为后续进一步研究大黄鱼肌球蛋白重链抗菌肽作为食品防腐剂和防止鱼病的饲料添加剂开发奠定了基础。

摘要： 本发明提供了一种构建基因替代小鼠研究野生型和突变体非肌性肌球蛋白重链II功能的方法。本发明改造的mpNTKV‑LoxP载体更适合于构建基因打靶载体特别是基因替代目的，新加入的Pac I和Swa I都是识别八个碱基的限制性内切酶，有利于较大DNA片段的插入。构建的MYH9基因替代(即内源MYH9基因被外源编码非肌性肌球蛋白重链II基因所替代)打靶载体通过电转导入小鼠ES细胞中，经过药物筛选，ES细胞单克隆挑选，Southern Blot或PCR鉴定，发生同源重组的阳性单克隆细胞率高达90％以上，易于获得所需细胞系。使用阳性ES细胞显微注射至小鼠囊胚获得MYH9基因替代嵌合体小鼠，并且该嵌合体小鼠可以交配传代，从而获得MYH9基因替代杂合子及纯合子后代。

摘要： 本发明为淡水鱼类肌球蛋白重链mRNA表达量快速检测试剂盒及其检测方法。试剂盒包括PCR扩增反应液A、对照cDNA；PCR扩增反应液A含有10×PCR反应缓冲液、氯化镁、dNTP、Taq酶、重链基因和内参基因特异性上、下游引物各一对、SYBR Green I染料，鱼类淡水鱼类肌球蛋白重链mRNA表达量的快速检测方法包括鱼的总RNA提取、鱼类淡水鱼类肌球蛋白重链mRNA的实时荧光PCR扩增和结果判定。本发明的优点是需要量少、快速、特异性强、灵敏度高、操作简便、重复性好。

摘要： 本发明涉及诱导β－肌球蛋白重链(β－MHC)表达且遏制快速骨骼肌收缩蛋白质基因的微RNA，miR－208的鉴定。对此功能的抑制被建议作为心脏纤维化、肥大和/或心力衰竭的治疗方法，而且对此功能的提升可用于在肌肉骨骼病症的治疗中遏制慢速纤维基因和激活快速纤维基因。

摘要： 本发明公开了一种新的多肽——人肌球蛋白重链B22.22,编码此多肽的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法,如恶性肿瘤,血液病,发育紊乱症,HIV感染,免疫性疾病和各类炎症等。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这种新的人肌球蛋白重链B22.22的多核苷酸的用途。

摘要： 本发明公开了一种新的多肽——人肌球蛋白重链12－14,编码此多肽的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法,如普－威综合症(PWS)、快乐木偶综合症(AS)、克罗斯综合症、格里塞利综合症、以及某些运动系统疾病、炎症等。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这种新的人肌球蛋白重链12－14的多核苷酸的用途。