细胞膜片

摘要： 目的:评估人骨髓间充质干细胞/细胞外基质复合体(C-BMSC)的骨缺损再生修复能力。方法:体外构建C-BMSC,通过大体观察、HE染色、扫描电镜进行组织形态学检测;TUNEL染色法检测细胞凋亡水平;免疫荧光染色和PCR法检测成骨相关因子的表达水平;大鼠颅骨缺损模型评估C-BMSC体内骨缺损再生修复能力。结果:组织形态学显示5 d组C-BMSC的细胞外基质(ECM)最丰富,ECM将细胞完全包裹,ECM纤维粗壮,小分子物质附着;TUNEL染色结果提示3 d与5 d组细胞凋亡数量接近,而7 d时细胞凋亡显著增加(P<0.001);PCR结果表明C-BMSC对ALP、COL-1、Runx2和OCN表达均高于细胞膜片(P<0.05);免疫荧光结果显示C-BMSC中ECM对ALP、COL-1、BSP表达均呈阳性;大鼠颅骨移植实验结果表明C-BMSC组骨体积与软组织体积比显著高于空白组。结论:本研究证明C-BMSC具有良好的成骨分化能力,这为骨缺损再生修复提供了一种新的策略。

摘要： 临界尺寸骨缺损的修复具有极大的挑战性。骨组织工程作为骨缺损修复的一种新兴方法存在血管化不足的问题。传统组织工程骨移植物植入缺损后常由于缺乏快速充足的血液供应而坏死。因此,有必要预先在工程骨组织内部构建一个功能性微血管网,该血管网可以在骨移植物植入后通过与宿主血管系统快速吻合来实现工程骨组织快速血液供应。细胞共培养、球体、细胞膜片以及3D打印是体外构建预血管化组织工程骨的常用方法。这些预血管化方法促进了组织工程骨植入后的成活率,为临界尺寸骨缺损的修复带来了新的思路。

摘要： 细胞膜片技术是一种应用不同方式将细胞制备成片状的技术,该技术保留了大量的细胞外基质,在骨与软骨组织的修复与再生过程中起到了重要作用。本文将温度敏感培养法、表面修饰法、不需要任何表面修饰的制备细胞膜片的3种方式,以及细胞膜片技术在骨、软骨修复与再生领域中的研究进展及发展前景进行综述。

摘要： 目的:模拟牙周膜/牙骨质发育微环境,构建一种新型的赫特维希上皮根鞘(HERS)细胞-牙囊细胞(DFC)直接混合共培养细胞膜片,为上皮参与牙周膜/牙骨质再生的调控提供一种新策略。方法:将处于同一牙胚、同一牙根发育期的HERS细胞与DFC,直接混合共培养后制备成细胞膜片,观察其形态学的特点,免疫组化染色检测共培养细胞膜片与DFC膜片之间成牙周膜/牙骨质能力的差异。结果:成功构建出牙源性上皮-间充质共培养细胞膜片,共培养细胞膜片层数较多,能分泌较多的细胞外基质。免疫组化染色结果显示,共培养细胞膜片骨钙蛋白(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(COLI)表达阳性,而DFC膜片的OCN、COLI表达则为阴性,共培养细胞膜片碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)表达较DFC膜片更强。结论:共培养细胞膜片成牙周膜/牙骨质能力更强,HERS细胞在牙周膜/牙骨质发育过程中的调控作用不可忽视。

摘要： 目的:探究Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、骨膜蛋白(POSTN)在骨质疏松大鼠骨髓基质细胞(BMSC)膜片中的表达情况。方法:在体外分离培养骨质疏松大鼠BMSCs,鉴定其克隆形成能力、多向分化能力,采用富含L-抗坏血酸培养基连续诱导构建细胞膜片,诱导5、10 d形成的细胞膜片经HE染色及Masson染色后,观察细胞膜片结构,分别采用qRT-PCR及免疫组织化学染色检测细胞外基质(ECM)中Col-Ⅰ、POSTN在基因及蛋白水平的表达情况。结果:体外分离培养的骨质疏松大鼠BMSCs具有克隆形成能力及成骨、成脂分化能力,L-抗坏血酸连续诱导获取的细胞膜片富含ECM;qRT-PCR结果显示,诱导第10天细胞膜片的ECM相关基因Col-Ⅰ及POSTN的mRNA相对表达量高于第5天(P<0.05);免疫组织化学染色结果显示诱导时间延长,细胞膜片中的ECM相应增多,且高表达Col-Ⅰ及POSTN。结论:PMO大鼠BMSC膜片可保留自身分泌的ECM,细胞膜片富含Col-Ⅰ及POSTN,为后续自体移植细胞膜片实现骨质疏松状态下骨组织再生提供帮助。

摘要： 将N-异丙基丙烯酰胺(NIPA)与丙烯酸(AA)通过自由基聚合得到AA接枝改性的聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPA-AA)。然后将PNIPA-AA与聚己内酯(PCL)混合电纺制备PNIPAAA/PCL温敏纤维。采用核磁共振波谱与傅里叶红外光谱分析聚合物的化学结构,通过变温红外光谱与紫外-可见分光光谱检测聚合物的温敏性;通过扫描电镜与水接触角观察电纺纤维基底的形貌与温敏性;最后以小鼠成纤维细胞(C3H/10T1/2)为模型细胞,研究PNIPA-AA/PCL纤维基底对细胞膜片的形成与脱落的影响。结果表明,PNIPA-AA的低临界溶解温度(LCST)为33.6°C,可电纺性较好;PNIPA-AA/PCL温敏纤维在高温(37°C)下疏水程度更高,低温(20°C)下水浸润速率更快;该温敏纤维基底可促进小鼠胚胎成纤维细胞(C3H/10T1/2)增殖和细胞外基质(ECM)分泌,仅需10 min降温即可使形成的细胞膜片完全分离,且脱落后膜片完整性与功能性保持完好。

摘要： 背景:骨髓间充质干细胞具有良好的定向分化潜能,而釉基质衍生物对其成骨分化的作用及机制仍不清楚.目的:总结釉基质衍生物对骨髓间充质干细胞成骨诱导作用的最新研究进展.方法:通过检索中国知网、万方、维普、PubMed数据库2000至2020年相关文献,检索词为"釉基质衍生物/釉基质蛋白衍生物,骨髓间充质干细胞""Emdogain?or enamel matrix derivative,bone marrow mesenchymal stem cell",文献语种设定为中文和英文,部分经典文献延长检索时间限制,最终选取符合纳入标准的英文文献62篇,中文文献5篇.结果与结论:釉基质衍生物对骨髓间充质干细胞的成骨诱导效果报道不一,其可能增强骨髓间充质干细胞的成骨诱导能力,釉基质衍生物作用于骨髓间充质干细胞和细胞膜片,可能增强成骨效应,有关作用机制尚不清楚.

摘要： 背景:骨髓间充质干细胞具有良好的定向分化潜能,而釉基质衍生物对其成骨分化的作用及机制仍不清楚。目的:总结釉基质衍生物对骨髓间充质干细胞成骨诱导作用的最新研究进展。方法:通过检索中国知网、万方、维普、PubMed数据库2000至2020年相关文献,检索词为“釉基质衍生物/釉基质蛋白衍生物,骨髓间充质干细胞”“Emdogain®or enamel matrix derivative,bone marrow mesenchymal stem cell”,文献语种设定为中文和英文,部分经典文献延长检索时间限制,最终选取符合纳入标准的英文文献62篇,中文文献5篇。结果与结论:釉基质衍生物对骨髓间充质干细胞的成骨诱导效果报道不一,其可能增强骨髓间充质干细胞的成骨诱导能力,釉基质衍生物作用于骨髓间充质干细胞和细胞膜片,可能增强成骨效应,有关作用机制尚不清楚。

摘要： 背景:马鹿角粉是一种生物相容性及机械性能良好的组织工程骨材料。采用细胞膜片技术、3D打印技术构建组织工程骨,可实现极限骨缺损的个性化治疗。目的:探讨骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇骨支架修复羊下颌骨极限缺损的能力及成骨效果。方法:全骨髓法培养羊骨髓间充质干细胞,采用细胞膜片技术及3D打印技术构建骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架的组织工程骨。取12只新疆阿勒泰大尾羊,随机分为术后1,2,3个月组,每组4只,于双侧下颌骨制备20 mm×3 mm×5 mm骨缺损,每组2只羊一侧植入细胞膜片复合3D打印鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架,另一侧植入细胞膜片复合明胶海绵,每组另外2只羊,一侧植入细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇支架,另一侧植入细胞膜片复合明胶海绵。植入1,2,3个月末处死实验动物,取下颌骨标本进行大体观察、锥形束CT、组织学观察及RT-PCR检测相关成骨指标。结果与结论:①锥形束CT观察:第1,2个月末,细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组骨缺损区呈稀薄云雾状,支架吸收较多,细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇组吸收相对较少;第3个月末,细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组有大量的新骨形成,密度接近周围骨质,但细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇组骨缺损区未长满,骨密度较低。细胞膜片复合明胶海绵组3个月内变化均不明显,均没有新骨生成;②组织学观察:第3个月末,与其他两组相比,细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组支架材料吸收较多,可见骨小梁排列规则及成熟板状骨,细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇组也有少量新骨形成,细胞膜片复合明胶海绵组3个月内变化均不明显;③RT-PCR检测:细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组骨桥蛋白、骨钙蛋白、Ⅰ型胶原的mRNA表达水平均高于其他两组,在第3个月时成骨基因的表达量达到最高;④结果表明,骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架的组织工程骨能够修复羊下颌骨极限骨缺损,可满足羊颌骨实验性缺损的修复重建。

摘要： 肿瘤术后、外伤、牙周病、先天畸形等因素造成的口腔颌面部骨和牙等硬组织的缺损与缺失严重影响人的身心健康.如何有效保存和功能性修复口腔颌面部骨和牙等硬组织一直是临床治疗的重点和难题.基于组织工程技术的颌面部硬组织的再生治疗具有良好的临床应用前景.通过模拟生物的天然结构及成分对生物材料及干细胞投递方式进行仿生设计的策略,因其简洁、高效的优势逐渐成为研究热点.本文对目前仿生策略用于口腔颌面部骨再生与牙种植的研究进行综述,以期为口腔颌面部硬组织缺损和缺失的治疗提供新思路.

摘要： 以组织工程技术为基础的牙髓再生为年轻恒牙牙髓病或根尖周病的治疗提供了新的方向。富血小板纤维蛋白（platelet rich fibrin, PRF）是第二代血小板浓缩物，包含大量生长因子，为干细胞提供生物性的生长环境和支架。本研究拟在培养根尖牙乳头干细胞（stem cells from apical papilla, SCAP）细胞膜片并对其组织学形态和生物学性能进行研究的基础上，构建裸鼠背部牙根片段种植模型，联合应用SCAP细胞膜片和PRF观察牙髓再生，为优化年轻恒牙牙髓再生治疗提供实验基础。

摘要： 研究芦丁促进人类牙周膜干细胞(hPDLSCs)膜片的形成及增强牙周膜干细胞膜片生物学功能的作用.采用有限稀释法进行细胞克隆纯化培养获得牙周膜干细胞,体外诱导形成牙周膜干细胞膜片.

摘要： GMP条件下分离人牙髓干细胞,在体外进行培养,研究其生物学特性,并制备牙髓干细胞膜片,为进一步利用干细胞进行牙周修复治疗做准备.

摘要： 目的：探讨骨髓间充质干细胞膜片复合自体颅骨碎片对二期修复大鼠颅骨缺损的治疗效果.方法：目的制作大鼠颅骨极限缺损动物模型,培养自体大鼠的骨髓基质细胞,增殖分化聚合为细胞膜片,与自体颅骨碎片复合进行颅骨缺损区域的修复.结论：目的细胞膜片和自体颅骨碎片对颅骨修复缺损愈合明显加快,治疗效果较好.

摘要： 目的:探讨软骨细胞膜片技术在大型哺乳动物模型体内构建软骨的优越性.rn 方法:以山羊耳廓软骨细胞为种子细胞,分别利用细胞膜片技术(实验组)和细胞复合PGA/PLA支架材料的方法(对照组)构建软骨组织.体外培养4周后同植到动物腹部皮下,分别于回植前,回植皮下4周及体内8周时收取标本,观察比较两组标本软骨形成情况.rn 结果:体外培养4周后,两组均形成一定量的软骨样组织,但对照组仍可见未降解的材料纤维.体内构建4周后,实验组形成成熟软骨样组织,对照组为纤维结缔组织替代,伴有大量炎性细胞浸润.体内培养8周时,实验组较4周前无明显变化,对照组体积明显缩小,仍为纤维结缔组织.rn 结论:软骨细胞膜片技术与细胞混合PGA/PLA支架材料构建组织工程软骨方法相比，具有原代细胞用量少、体外培养时间短、在大动物体内能形成成熟软骨等优点，有更广泛的临床应用前景。

摘要： 一种细胞培养基体，其包括一柱状基底及形成于所述柱状基底的外壁上的光致断裂层，所述光致断裂层包括多个化学结构式为

摘要： 一种用于细胞膜片钳的微流控细胞吸附芯片，属于微流控相关领域。该芯片包括主通道和膜片钳通道；主通道主要由流体入口、入口主通道、“蛇形”通道、出口主通道和流体出口依次连接构成；“蛇形”通道由多组弯道依次连接构成，每个弯道包括两个弧度通道和一个平直通道，平直通道设置于两个相互对称的弧度通道之间；每个平直通道的左右两端各连通一条膜片钳通道；每条膜片钳通道由内侧的尖端通道与外侧的非尖端通道构成；尖端通道设置在平直通道和非尖端通道的底部，相对称的两条膜片钳尖端通道与平直通道构成“十”字型。本发明不仅可消除已有膜片钳微流控细胞吸附芯片的缺陷，并且可以提升细胞捕获效率，减少需施加的负压值，且制作工艺简单。

摘要： 本发明确保在培养基内细胞膜片的位置稳定的状态下容易地对细胞膜片两面进行观察。细胞膜片制造装置(100)具备容器(20)以及可接触/分离地收纳于容器(20)中的支撑体单元(10)，所述支撑体单元(10)具有网状膜片(2)以及将网状膜片(2)保持为从容器(20)的底面浮起的基座(3)；支撑体单元(10)是以在培养基中垂直方向及水平方向的位置均固定的方式收纳于容器(20)中。

摘要： 本发明提供了一种硬腭来源间充质干细胞膜片和细胞膜片种植体复合物及其制备方法，涉及牙齿种植修复技术领域。本发明以动物硬腭来源的间充质干细胞为原料，采用特殊的光控二氧化钛纳米点表面培养形成细胞膜片，并包裹于种植体周围形成细胞膜片种植体复合物。本发明利用具有生物活性表面的种植体，提升了种植体的生物相容性，可拓宽口腔种植适应证、提高骨愈合能力、缩短种植周期；并且将细胞膜片包裹于种植体表面，动物实验证实其与未包裹膜片的种植体相比，能促进成骨，加快骨结合。

摘要： 本说明书涉及一种多层细胞膜片的制备方法，包括：(a)在0°C至30°C中任一点位的温度具有熔点或从疏水性变换为亲水性的第一基材上形成第一细胞层的步骤；(b)在由酶所分解的第二基材上形成第二细胞层的步骤；(c)使所述第一细胞层与所述第二细胞层接触的步骤；(d)提供所述第一基材的熔点以下温度或所述第一基材变换成亲水性的温度而选择性地去除所述第一基材的步骤；及(e)使所述第二基材接触于包含酶的溶液而选择性地去除所述第二基材的步骤。本说明书还涉及利用所述制备方法制备的多层细胞膜片。

摘要： 本发明公开了PD‑1细胞膜纳米囊泡联合干细胞膜片在恶性黑色素瘤术后治疗中的应用。所述细胞膜纳米囊泡过表达有免疫检查点对应受体且带有DBCO标记；所述干细胞膜片为叠氮化物修饰的干细胞膜片。通过将叠氮化物修饰的干细胞膜片敷在恶性黑色素瘤伤口处，促进伤口愈合，同时注射表达免疫检查点对应的受体且标记有DBCO的细胞膜纳米囊泡，囊泡经过血液循环到达伤口处时，能够通过点击化学反应跟干细胞膜片结合，实现在伤口处的富集，进而起到靶向作用，实现对黑色素瘤术后精准靶向免疫治疗的目的，从而实现促进伤口愈合和靶向抗黑色素瘤的双重功能。

摘要： 本发明公开了一种TGFβ1诱导角质形成细胞制备细胞膜片的方法，步骤如下：体外培养角质形成细胞，待细胞融合80‑85%时消化细胞；离心收集细胞并重悬，按每孔2×105‑5×105个细胞的接种量接种细胞，添加完全培养基后进行培养，隔天换液；继续培养2‑3天后更换培养基并添加TGF‑β1，TGF‑β1工作浓度为50‑60μg/mL；每隔2‑3天完全换液，连续培养3‑4周即可得到细胞膜片。本申请利用角质形成细胞系通过向培养基中添加TGF‑β1诱导3周即可制备细胞膜片，无需每次耗费时间培养原代细胞，细胞数量多且获取容易，添加的TGF‑β1可作为促进皮肤创面修复的有效成分，无需去除，促创面修复效果更好。

摘要： 本发明公开了一种脱细胞牙髓干细胞膜片及其制备方法和应用。所述制备方法包含以下步骤：S1.利用膜片培养基培养牙髓干细胞12～16天，得到牙髓干细胞膜片；S2.将牙髓干细胞膜片置于细胞裂解液中，36～38°C下处理5～30min；然后利用脱氧核糖核酸酶处理后即得脱细胞牙髓干细胞膜片；所述膜片培养基为含有胎牛血清和抗坏血酸的α‑MEM培养基。本发明所提供的脱细胞牙髓干细胞膜片作为治疗脊髓损伤的支架材料，具有良好的治疗效果，不仅可以促进损伤脊髓的愈合以及神经的再生，还能恢复机体的运动功能；同时具有制备简单、可塑性强、细胞外基质丰富、无需人工合成材料搭载等优点。

摘要： 一种脐带间充质干细胞的制备方法，其能够显著提高细胞得率。一种脐带间充质干细胞膜片及其制备方法。所述脐带间充质干细胞膜片含有脐带间充质干细胞及其在增殖过程中分泌的全部细胞外基质和生长因子，该制备方法在不使用酶及类似物消化且不通过物理剥离的情况下，将脐带间充质干细胞及其在增殖过程中分泌的细胞外基质和生长因子完全保留并从培养皿表面分离，得到片层状的细胞膜片。

摘要： 本发明涉及一种负载细胞生长支架的皮肤外用干细胞膜片敷料快速制备仪，包括箱体和支撑部，所述的箱体的顶部为弧形，箱体的一个侧面设置有门，该侧面还设置有四个手袖，其中二个手袖位于门上，二个手袖位于门的两边；箱体内的顶部设置有紫外杀菌灯、照明灯，箱体内设置有制备系统；所述的制备系统包括料液瓶、循环泵、微型粗滤器、膜池、废液瓶和分装部件，所述的分装部件包括蠕动泵、分液管、温敏凝胶定型孵化器和若干模具，所述的温敏凝胶定型孵化器包括恒温水浴振荡器、支架、盖子。本发明结构简单、能快速完成负载细胞生长支架的无菌外用干细胞膜片的制备。