小肠结肠炎耶尔森菌

摘要： 目的了解东台市近年小肠结肠炎耶尔森菌的感染、宿主分布和毒力基因携带情况,为科学防控提供参考依据。方法 2010—2019年采集各乡镇监测点肠道门诊腹泻病人、家禽家畜、动物粪便及冷鲜肉、熟制肉食样本,经改良PBS冷增菌、MAC培养基、分离,挑取可疑菌落进行生化实验和血清凝集鉴定,并采用多聚酶联反应(PCR)法检测5种毒力基因(ail、virF、yadA、ystA、ystB)携带情况。结果 10年共检测样本7 288份,阳性107份,检出率1.47%。不同种类样本检出率由高到低依次为猪粪6.20%(50/806)、狗粪3.30%(27/818)、牛粪1.97%(8/407)、生肉0.70%(7/999)、羊粪0.49%(4/818)、鸡粪0.47%(2/428)、腹泻病人粪便0.35%(7/2 002)、熟肉0.20%(2/1 010),差异有统计学意义(χ^(2)=185.65,P<0.05)。除2016年外,其余年份均有检出,检出率2010年最高(4.07%)、2016年最低(0.40%),不同年份检出率差异有统计学意义(χ^(2)=74.04,P<0.05)。5种毒力基因检出率由高到低依次为ail(0.51%)、ystB(0.49%)、virF(0.47%)、yadA(0.47%)、ystA(0.45%)。结论东台市存在一定程度的小肠耶尔森菌流行风险。相关部门应加强宣传力度,增强公众防护意识,特别敦促养殖场所按要求进行粪便处理,以保护公众健康。

摘要： 目的了解北京市腹泻病人分离的小肠结肠炎耶尔森菌的病原学特征。方法对腹泻病人粪便样本中分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行血清分型、生物分型、毒力基因检测、核心基因组多位点序列分型(core genome multilocus sequence typing,cgMLST)、耐药分析以及脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分子分型试验。结果2016-2019年从腹泻病人中共检出8株小肠结肠炎耶尔森菌,其中生物血清型3/O∶3型5株,1A/血清未定型3株;毒力基因检测可分为三种类型,致病株毒力基因分布为ail+、ystA+、ystB-、yadA+、virF+、foxA+、rfbC+;cgMLST显示有4株致病性菌株为cgST2571型,1株致病性菌株为cgST2572型,另3株非致病性菌株分别为三种其他型别。药敏试验结果显示,8株菌对头孢唑林、氨苄西林和磺胺异噁唑耐药率较高,且有7株存在多重耐药现象;经NotⅠ酶切后,8株菌共分为6种PFGE带型。结论北京市腹泻病人分离的小肠结肠炎耶尔森菌主要为生物血清型3/O∶3型致病性菌株,多重耐药现象比较严重,PFGE带型呈多态性分布。

摘要： 目的 通过实验动物小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)检出能力验证,了解实验动物检测机构的检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法 按照中国合格评定国家认可委员会(China National Accreditation Service for Conformity, CNAS)批准的能力验证方案,低温冷冻干燥制备样品;稳定性和均匀性检验合格后,通过CNAS平台随机分组编号,发放给参加单位,并附作业指导书。要求在规定时限提交检验报告和原始记录,其结果与样品设置一致的判为满意结果,不一致或未按时提交的判为不满意结果。结果 共有24个实验室参加本项能力验证;其中获得满意结果的实验室为22个,占总参加机构的91.7%;得到不满意结果的实验室有2个,占8.3%。结论 实验动物质量检测机构对小肠结肠炎耶尔森菌的检测能力较高。

摘要： 目的 对2018-2020年我国牛羊主产区牛羊源小肠结肠炎耶尔森菌进行病原特征研究,为该菌的防控提供科学依据.方法 对来自于6个地区的2291份样本进行分离培养、PCR鉴定、玻片凝集以及药敏试验,以掌握其感染情况、毒力基因型和血清型的分布以及耐药情况.结果 在2291份样本中,共分离出该菌109株,总检出率为4.76％,其中辽宁地区检出率最高(20.42％),并且各地区检出率差异有统计学意义(x2=288.153,P＜0.01),而各种类样本检出率差异无统计学意义(x2=1.734,P＞0.05).在本次分离菌株中,ystB基因为优势毒力基因,O∶5,27为优势血清型,菌株对氨苄西林、红霉素、磺胺异恶唑和头孢噻吩耐药率为100％,对多粘菌素B和氟苯尼考敏感率为100％.结论 牛、羊源小肠结肠炎耶尔森菌在全国牛、羊主产区分布不广泛,但其多重耐药率较高,建议加强对该菌耐药性的监测与管理.

摘要： [背景]小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)是重要的人畜共患食源性病原菌.由于其生存环境与传染性生活方式,小肠结肠炎耶尔森菌暴露在各种生存压力中,而胞膜压力应答能力对维持其环境耐受性和毒力发挥着重要作用.[目的]探究小肠结肠炎耶尔森菌在胞膜压力应答中的调节机制.[方法]通过使用多粘菌素B破坏小肠结肠炎耶尔森菌细胞膜的稳定性,并从生长能力、运动能力、生物被膜形成能力以及相关基因表达的变化探讨Rcs (Regulator of Capsule Synthesis)系统对多粘菌素B产生的胞膜压力的应答.[结果]多粘菌素B引起的细胞胞膜压力抑制了小肠结肠炎耶尔森菌的运动和生物被膜形成能力;而阻断Rcs信号途径后,小肠结肠炎耶尔森菌的运动和生物被膜形成能力有所恢复.对flhC、hmsS、hmsT等关键下游表型基因的表达水平的分析结果表明Rcs双组分系统对由多粘菌素B诱导的胞膜压力作出响应,通过感知胞膜胁迫向胞内传递信号,积极地调控细菌增强对抗菌肽的抗性.[结论]明确了Rcs双组分系统在响应多粘菌素B压力胁迫中的特异性调控作用,加深了对小肠结肠炎耶尔森菌环境应答机制的认识.

摘要： 目的 通过中国1980-2019年不同地区小肠结肠炎耶尔森菌的病原学与PFGE分子型别特征分析,为小肠结肠炎耶尔森菌病的防控提供依据.方法 对中国不同区域,不同来源标本分离到的6847株小肠结肠炎耶尔森菌,进行血清型别、生化表型、毒力基因分布研究,对致病性菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析.结果 小肠结肠炎耶尔森菌中致病性菌株2047株、非致病菌4800株.致病性菌株仅存在两种血清型,O∶3占比88.96％(1821/2047)、O∶9占比11.04％(226/2047).18个省市自治区的致病株以O∶3血清型为主,宁夏回族自治区以O∶9血清型为主.非致病菌血清型众多,普遍比致病株具有更多的阳性生化反应.1821株O∶3致病株分为93个PFGE型别,分布于19个省市自治区,其中K6GN11C30021、K6GN11C30012为优势带型(分别占比46.35％、22.5％),75.38％的人源菌株与分离自当地的动物、食品菌株带型一致;226株O∶9致病株共分为14个PFGE型别,分布于8个省市自治区,77.78％人源菌株与分离自当地的动物、食品菌株带型一致.结论 我国小肠结肠炎耶尔森菌分布广泛、宿主众多,致病株仅有两个血清型,非致病株血清型众多、可能比致病株具有更强的生化代谢能力与环境适应力.致病性菌株PFGE优势带型相对集中,地域分布广泛,多数人源菌株与分离自当地的动物、食品菌株带型一致,应警惕通过家畜家禽、食品及外环境等多种来源感染人的风险.

摘要： 目的 了解江苏省高邮市小肠结肠炎耶尔森菌流行病学及病原学特征,为本地区该菌的防控提供科学依据.方法 2018-2020年在高邮市采集腹泻患者粪便、家畜家禽粪便、苍蝇及生猪屠宰场组织样本等各类样本共计2682份.采用冷增菌方法进行小肠结肠炎耶尔森菌的分离培养,对分离菌株进行生化鉴定、血清分型、生物分型和毒力基因的荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测.结果 2682份样本中共检出小肠结肠炎耶尔森菌120株,检出率为4.47％,包括猪粪源菌株99株,鸭粪源菌株2株,苍蝇源菌株4株,生猪屠宰场源菌株15株.分离菌株血清型以O∶3型为主,生物型主要为3型,毒力基因检测结果显示:具有致病性的分离菌株共73株,其中O∶3血清型69株、O∶9血清型1株和血清未定型3株,且以猪粪源菌株为主.结论 小肠结肠炎耶尔森菌在高邮市畜禽动物、苍蝇媒介及生猪屠宰场中存在流行分布,猪的检出率最高,且致病性菌株携带率最高,主要致病型别为生物3型/O∶3血清型(3/O∶3型),为本地区制定相应的防控策略提供理论依据.

摘要： 目的 获得北京市顺义区零售市场生猪肉中小肠结肠炎耶尔森菌的分布及病原特征.方法 采集样本,应用细菌增菌培养并同时对增菌液进行荧光PCR预筛查的方法检测小肠结肠炎耶尔森菌.对于鉴定阳性菌株应用传统PCR及多重荧光PCR方法分析5种毒力基因的分布特征.应用肉汤稀释法获得分离菌株的耐药特征并应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行菌株分子分型.结果 70份样本中19份增菌液foxA基因实时荧光PCR筛查阳性,阳性率为27.14％(19/70).19份foxA筛查阳性标本培养获得小肠结肠炎耶尔森菌.19株菌对头孢唑啉、氨苄西林、头孢西丁、氨苄西林/舒巴坦耐药率分别为97.74％、84.21％、47.39％和42.11％,其携带毒力基因特征均为 ail-/ystA-/ystB+/yadA-/virF-.17株菌完成 PFGE 检测并被分为15种带型.结论 针对增菌液进行荧光PCR预筛查,可提高食品样本中小肠结肠炎耶尔森菌分离培养的检出率.菌株毒力基因的荧光PCR组合检测可快速获得分离菌株的毒力特征.本次研究中分离自本地区零售生猪肉中的小肠结肠炎耶尔森菌未发现显著遗传聚集性特征.

摘要： 目的:对腹泻患者的粪便中的小肠结肠炎耶尔森菌通过不同方法进行检验,对其检验价值进行研究分析。方法:以我院于 2019 年 6 月到 2020 年 1 月期间的收治的腹泻患者 30 例作为研究对象,采集患者的粪便样品,培养组通过培养法进行检测,PCR组通过 RT-PCR 技术进行检测,对两组患者的检测阳性率以及检测阴性率进行比较分析。结果:观察组患者的检测阴性率为 76.7%(23/30),检测阳性率为 23.3%(7/30),对照组患者的检测阴性率为 96.7%(29/30),检测阳性率为 3.3%(1/30),P < 0.05,差异具有统计学意义。结论:对于腹泻患者,通过 RT-PCR 技术对其粪便中的小肠结肠炎耶尔森菌进行检验,可以有效提高其检出率,便于患者及时通过有效治疗,可以改善患者的预后效果,检验价值较高。

摘要： 为了解扬州地区小肠结肠炎耶尔森菌病原学特征和分布规律,2018—2019年采集腹泻患者粪便、家畜家禽粪便、苍蝇标本及生猪屠宰场组织标本等,共计1786份,并进行小肠结肠炎耶尔森菌分离培养,对分离得到的菌株进行生化鉴定、血清分型、生物分型和毒力基因检测。结果表明:监测的1786份标本中共检出74株小肠结肠炎耶尔森菌,总检出率为4.14%(74/1786),其中猪粪的检出率最高,为10.63%(54/508),其次是生猪屠宰场标本、苍蝇和鸭粪,检出率依次为5.00%(15/300)、3.09%(3/97)和1.41%(2/142),不同类型标本的阳性检出率差异有统计学意义(χ^(2)=98.83,P<0.05)。在致病性检出株中,猪粪检出株占总致病性菌株的88.46%(23/26),血清型/生物型主要为O:3/3型,毒力基因以ail^(+)、ystA^(+)、ystB^(-)、yadA^(+)和virF^(+)型为主,占总致病性基因型菌株的88.46%(23/26)。这一研究提示,扬州地区存在致病性小肠结肠炎耶尔森菌,猪是主要带菌宿主,应重点关注生猪饲养、运输及屠宰加工环节该菌的防控。

摘要： 为了诊断扬州某散养水牛群出现连续病死原因,对死亡牛进行了病理解剖,采集肝、肺等组织进行细菌分离,采用染色镜检试验,生化试验和MALDI biotyper(全自动快速生物质谱检测系统,MBT)分析对分离菌进行鉴定,小鼠攻毒试验确定分离菌的毒性,药敏试验分析其药物敏感特性.结果表明:分离菌为革兰氏阴性杆菌,生化试验结果表明本菌可以发酵蔗糖、蕈糖等糖,硝酸盐还原阳性,MALDI biotyper的分析结果为小肠结肠炎耶尔森菌.小鼠攻毒试验的结果表明本菌具有强毒性,可致小鼠死亡.药敏试验结果表明本菌对复方新诺明耐药,对环丙沙星、美洛西林等多种药物敏感.说明水牛病死原因可能为小肠结肠炎耶尔森菌感染致死,选用敏感药物及时控制牛群继续发生该病.

摘要： 目的：了解达乌尔黄鼠鼠疫疫源地内小肠结肠炎耶尔森菌在动物中的分布情况,为疾病防治工作和科学研究提供科学依据.rn 方法：在疫源地内选择牧区、半农半牧区和农区三个不同生态环境,分别采集鼠类、家畜家禽粪便、舌根、咽拭子及肠道内容物等样品,进行小肠结肠炎耶尔森菌的分离、鉴定,并用PCR方法进行毒力基因测定.统计学分析采用X2检验.rn 结果：共检测各类样品3260份,检出小肠结肠炎耶尔森菌65株,总检出率为1.99％;绝大多数菌株检自猪体中,包括了0∶3/3、0∶5/1A、0∶4/4血清生物型;其中0∶3/3型致病性菌株携带ail、ystA、yadA、VirF.rfbc毒力基因,并在牧区、半农半牧区、农区都有分布,以农区检出率最高为9.95％.rn 结论：内蒙古达乌尔黄鼠鼠疫疫源地的猪、鼠体内携带小肠结肠炎耶尔森菌,猪是致病性小肠结肠炎耶尔森菌的主要携带者;感染情况以农区为重,半农半牧区次之,最轻为牧区.

摘要： 目的：探讨宁夏地区不同宿主动物对小肠结肠炎耶尔森菌易感情况及不同来源分离菌遗传进化特征,为该菌防控提供依据.rn 方法：从采集的腹泻病例、猪、鼠类、羊和犬标本中分离小肠结肠炎耶尔森菌,并进行血清分型、生物分型及毒力基因检测,同时对0:3和0:9血清型菌株进行脉冲场凝胶电泳分析.rn 结果：猪的易感性最高,依然是宁夏地区小肠结肠炎耶尔森菌的主要宿主和传染源,其他宿主动物对非致病性菌株较为易感;2874份猪标本检出147株菌,检出率5.11％;462份牛标本,检出5株菌,检出率为1.08％;2105份羊标本共检出20株菌;检出率为0.95％;腹泻病人及其他动物标本检出率较低.猪主要感染致病性0:3血清型为主,生物型为2型;其他宿主动物检出均为非致病性0:5和0:8,生物型为1A.PFGE分为12种带型,K6GN11C30021、K6GN11C30012为主要型别,占所有分型菌株的(58/98)59.18％.rn 结论：人和猪对致病性菌株最为易感,其他宿主动物对非致病性菌株较为易感,且随着猪感染致病性血清型向多元化转变,其他宿主动物感染率呈现上升趋势.

摘要： 目的:分析南京市售鲜肉中小肠结肠炎耶尔森菌的风险程度.方法:将国内外文献报道及市场调查数据的统计分析相结合,运用经典的半定量风险评估软件"Risk Ranger"进行风险分级.结果:南京市售猪肉和牛肉中小肠结肠炎耶尔森菌的风险评分分别为31和24,每人每天因食用污染该菌的鲜肉造成食物中毒的概率分别为3.62×10-9,3.12×10-10,前者为后者风险的11.6倍.通过进一步研究发现,加工后采取有效的控制体系,均使两者的风险均降低到10％.结论:南京市售牛肉中小肠结肠炎耶尔森菌的风险程度较低,而市售猪肉中已接近中等程度,需做好预防措施,加强监管.

摘要： 目的 建立食品中小肠结肠炎耶尔森菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法 本文对小肠结肠炎耶尔森菌16S-23S rDNA间区(ITS)序列进行了克隆测序，在比较小肠结肠炎耶尔森菌与其近源株ITS序列的基础上，设计了3对小肠结肠炎耶尔森菌LAMP检测特异性引物，用27株小肠结肠炎耶尔森菌，40株近源菌验证方法的特异性；用加菌实验验证方法的灵敏度；将方法用于食品样品检测并与PCR方法和国标方法进行比较。结果 本文所建立的LAMP 方法特异性好，灵敏度达到0.8CFU/100g。结论 建立的食品中小肠结肠炎耶尔森菌LAMP检测方法特异性好，灵敏度高，对准确快速的检测小肠结肠炎耶尔森菌具有重要意义。

摘要： 本文对1980年至2008年,分别在江苏、河南、宁夏等11个省市分离自腹泻病人,猪、犬、牛、鼠等13种宿主动物、生熟食品、媒介昆虫及环境中分离的1295株小肠结肠炎耶尔森菌,进行了流行病学分布,生化代谢、毒力基因、PFGE分型特征等分析,了解掌握中国小肠结肠炎耶尔森菌的病原学特征.并分析了在徐州、宁夏等地分离菌株的分布特征的专项研究。

摘要： 本研究在环介导恒温扩增体系引入分子信标建立双重荧光环介导扩增方法,利用该方法检测实验猴空肠弯曲杆菌和小肠结肠炎耶尔森菌,结果敏感性分别达到10-2cfu/mL和10-3cfu/mL,与常见肠道菌无交叉反应.

摘要： 小肠结肠炎耶尔森菌(YE菌)和空肠弯曲杆菌(空弯菌)是一种在世界范围内广泛流行的人畜共患病的病原菌,主要引起人类的急性肠炎.YE菌能在冷藏温度下(0—4°C)生长繁殖,俗称"冰箱菌".韩国和加拿大对我国出口的实验猴提出了YE菌检疫要求.空弯菌已经取代沙门氏菌成为发达国家最常见的腹泻病病原菌之一,将来某些国家很可能提出该菌的检疫要求.猴YE菌GB标准检验耗时过长,仅增菌步骤需要3周时间.空弯菌是微需氧菌,培养条件苛刻,难以培养成功.以上两种细菌的检验方法存在着较大的技术上的缺陷和操作上的困难,难以适应实验动物检疫准确快捷的要求.

摘要： 本发明公开了一种检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，包括以下步骤：（1）无菌条件下取待测样品，加入含Al(OH)3的PBS缓冲液中，均质，获得样品菌液；（2）对样品菌液进行水浴热处理，离心，弃上清，收集菌体；（3）向菌体中加入小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠，振荡后于磁力架上静置分层，弃上层，得到吸附有菌体的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠；用洗脱液对吸附有菌体的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠进行洗脱，然后向洗脱后的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠中加入PBS缓冲液，混合均匀，得到样品待测液；（4）将待测样品液进行培养、观察、检测。本发明提供的检测方法特异性强，灵敏度高，而且能有效缩短检测时间，降低检测成本。

摘要： 本发明提供了三株可以作为小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)相关实验的对照的标准菌株，所述标准菌株具有典型的小肠结肠炎耶尔森氏菌菌落形态和生理生化特征，可用于检验小肠结肠炎耶尔森氏菌选择性培养基的准确性，同时可以作为小肠结肠炎耶尔森氏菌常见生理生化表型及分子特征的检测中的对照样品；所述标准菌株含有相应的特异性分子靶标(如SEQ ID NO:1～11所示的核苷酸序列)，还提供了含有所述分子靶标特异性的特异性PCR扩增引物。本发明还提供了一种小肠结肠炎耶尔森氏菌的冻干保护剂，所述保护剂其冻干存活率能达到85％以上；在‑20°C条件下保存可以保证其数量级至少一年以上不发生变化，因此可用于长期储存质控菌株。

摘要： 本发明公开了一种针对小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速恒温检测方法、引物组及试剂盒。所述方法为：从待测样品中提取基因组DNA；以所述基因组DNA为模板，以能扩增小肠结肠炎耶尔森氏菌特异性序列的引物组为引物，在酶反应体系下进行恒温扩增反应；通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在小肠结肠炎耶尔森氏菌。本发明检测方法具有高灵敏度和高特异性，检测时间短，结果判定简单，操作便捷，成本低，具广泛应用前景。

摘要： 本发明公开了两个小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测靶标3283/3316及其检测引物，检测靶标的序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。本发明公开的小肠结肠炎耶尔森氏菌检测靶标可以用于食品等样品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速检测。本发明公开专用检测引物具体包括：3283标签正向引物3283‑F、3283标签反向引物3283‑R；3316标签正向引物3316‑F、3316标签反向引物3316‑R。经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测，通过电泳产物结果即可获得检测结果。本发明能有效检测出食品等样品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌，具有快速、高效操作简单等优点，可应用于食品、检验检疫等领域。

摘要： 本发明公开了一种快速区分小肠结肠炎耶尔森氏菌与中间型耶尔森氏菌的检测方法，利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测小肠结肠炎耶尔森氏菌与中间型耶尔森氏菌的肽指纹图谱，根据两种耶尔森氏菌特征峰的不同，鉴定其特征蛋白，区分小肠结肠炎耶尔森氏菌与中间型耶尔森氏菌。本发明采用的方法比现有的传统生化实验鉴定时间缩短1‑2天，可以快速区分小肠结肠炎耶尔森氏菌与中间型耶尔森氏菌，实现快速检测。该方法自动化程度高，检测时间短，有效降低一线检测人员接触食源致病菌的几率，减少食源致病菌对人和环境污染的风险。

摘要： 本发明涉及一种小肠结肠炎耶尔森氏菌选择性增菌培养基，包括组合营养剂和组合抑菌剂，组合营养剂包括胰酪胨、山梨醇、蔗糖、鸟氨酸、氯化钠，组合抑菌剂包括牛胆盐、十二烷基磺酸钠、头孢菌素和新生霉素。本发明的小肠结肠炎耶尔森氏菌选择性增菌培养基及其制备方法，含有组合营养剂，能有效促进小肠结肠炎耶尔森氏菌的生长；含有组合抑菌剂，能有效抑制革兰氏阳性菌的生长，抑制大肠杆菌等革兰氏阴性菌的生长，同时对小肠结肠炎耶尔森氏菌的生长无影响。本发明的培养基可实现对样品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的选择性富集增菌培养，优化传统培养法的检测步骤，缩短检测时间，提高检出率，使样品中小肠结肠炎耶尔森氏菌更易检测和鉴别。

摘要： 本发明涉及一种致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌检测用引物对和基于CRISPR/Cas12a检测致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的现场可视化试剂盒及应用，属于分子生物学检测技术领域。本发明提供了一种用于检测致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的引物对，所述引物对包括ail‑F和ail‑R，所述ail‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述ail‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明所述引物对能够基于CRISPR/Cas12a实现致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的现场可视化检测，快速且准确，灵敏度高，特异性强。

摘要： 本发明公开了耶尔森氏菌调查鉴定方法及对小肠结肠炎预防控制的应用，尤其是致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌；主要步骤包括：标本采集、分离培养、细菌初筛、LAMP法鉴定、生化鉴定验证；通过本发明的LAMP检测方法可以鉴定出致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌，与生化鉴定结果相互印证；与PCR鉴定结果相同的情况下，通过LAMP方法对致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌进行鉴定出结果时间快；通过本发明对地区致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌调查鉴定方法，可以为临床耶尔森氏菌导致的小肠结肠炎预防控制提供重要依据。

摘要： 本发明公开了鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的特异性引物对、检测试剂盒及其应用。所述特异性引物对为Fe和Re，Fe的序列如SEQ ID NO.1所示，Re的序列如SEQ ID NO.2所示。所述检测试剂盒包括特异性引物对、RPA核酸扩增试剂、量子点荧光微球与地高辛抗体的偶联物QDNBs‑McAb、核酸检测试纸条、上样缓冲液。特异性引物对的5’端分别修饰有地高辛和生物素，经过RPA核酸扩增后，阳性产物带有地高辛和生物素标记。本发明成功设计筛选了适用于RPA的特异性引物对，建立了能够鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速检测方法，其最低检测限为9.6×103CFU/mL。所建立的方法无需使用大型仪器，适合于现场检测，并且该方法从基因组提取到肉眼观察结果的过程仅需要10min左右。

摘要： 本发明公开了一种检测小肠结肠炎耶尔森菌的系统、方法及其应用。所述方法包括：识别小肠结肠炎耶尔森菌基因组序列中富含AT碱基的序列作为目标序列；针对目标序列自动化、高通量地设计特异性引物；设计特定的Tm值计算公式计算反应变性及退火温度，并据此设置核酸扩增反应条件；在模板局部解链的条件下进行核酸扩增反应。本发明靶向传统核酸扩增方法通常需要规避的富含AT碱基的序列，极大地拓宽候选靶标区域；通过基于海量基因组数据的特异性排查，以及针对富含AT区域的Tm值的精确计算，实现双链DNA的局部解链，大大降低了核酸扩增技术中非特异性扩增的可能性。该方法有效地拓展了传统核酸扩增技术的应用范围，显著提升了反应性能。