一种利用高效分泌表达的双酶融合酶耦合发酵生产海藻糖的方法

摘要

本发明涉及一种利用高效分泌表达的双酶融合酶耦合发酵生产海藻糖的方法，本发明首次通过采用向枯草芽孢杆菌中插入启动子P₄₃、信号肽PhoD、麦芽寡糖基海藻糖合成酶MTSase和麦芽寡糖基海藻糖水解酶MTHase，同时敲除裂解基因Xpf、SkfA、LytC和SdpC后，构建获得重组工程菌pHT01‑P₄₃‑PhoD‑MTSase‑MTHase(LM1234)，并采用了特殊序列的刚性连接，从而实现了目标酶的功能表达；通过实际发酵生产海藻糖后，惊奇的发现，由于改造后的重组菌胞外酶活能够占到总酶活的70％，实现了胞外产酶与转化的同步进行，从而省去了传统发酵液中需要先进行酶分离然后再进行海藻糖生产的过程，实现了重组菌的发酵与海藻糖的生产同于耦合化。