一种牛PDHB基因腺病毒干扰载体构建及其鉴定方法

摘要

本发明公开了一种牛PDHB基因腺病毒干扰载体构建及其鉴定方法，序列为：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3。构建方法包括：载体用BamH I，EcoR I双酶切；酶切完成后胶回收；目的片断利用3’和5’的单链退火获得：目的片段与载体连接反应；转化感受态细胞:DH5a；转化后挑菌，摇菌14小时，测序；将重组腺病毒载体质粒PDHB shRNA与pHBAd‑BHG骨架载体共转染HEK293A细胞，获得重组腺病毒Ad‑PDHB shRNA。本发明的shRNA1、shRNA2和shRNA3对PDHB基因的干扰效率分别为：95.12％、12.69％和97.76％。