14个功能性杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIRs基因同步测序分型的方法

摘要

本发明基于KIR基因组全长序列的结构特点、SNPs多态性分布以及外显子两翼的内含子的长度，制定了科学的PCR扩增策略，设计具有相近退火温度的KIR基因特异性PCR引物56对。每个功能性KIR基因的全部编码区序列分别采用3～5对特异性PCR引物进行扩增；纯化后的PCR扩增产物，采用特异性正向、反向测序引物对每一外显子进行双向测序反应。设计使用的测序引物共计230条。本发明首次建立了适合于高通量化KIR测序分型的方法，全部的14个功能性KIR基因可在同一PCR扩d增条件下进行同步扩增，并且所需时间短；测序分型涵盖了每个功能性KIR基因的全部编码区；所获得的序列无背景信号和杂峰，易于识别和结果判读。在群体遗传学、疾病关联、骨髓移植等领域具有良好的应用前景。