一种针对离体肺获取的支气管肺泡灌洗液及其获取方法

摘要

本发明涉及支气管肺泡灌洗技术领域，目的是提供一种离体肺支气管肺泡灌洗液及其获取方法。本发明针对离体肺获取的支气管肺泡灌洗液包含有丰富的生物信息，且获取方法对患者无伤害、无危险性，符合伦理要求。

说明书

技术领域

本发明涉及支气管肺泡灌洗液技术领域，更具体地说，它涉及一种针对离体肺的支气管肺泡灌洗液及其获取方法。

背景技术

支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)获取的传统方法是通过应用纤维支气管镜进行操作。其主要步骤为：将室温生理盐水经支气管镜直视下注入叶段支气管，停留数秒钟，待灌注液流至肺泡后再进行回抽，该回抽液经由支气管以下肺段和亚肺段到达肺泡，理论上能够收集支气管以下肺段、亚肺段及肺泡表面衬液，即为BALF。通过对BALF进行实验室检测可为临床诊断、鉴别诊断、治疗效果评价和判断预后提供重要的参考价值。另外，BALF中含有大量的人体细胞、多种微生物、细胞因子、炎症介质等，携带大量的生物学信息，因此，BALF是用来进行肺部疾病研究的重要标本，其携带的生物信息在肺疾病的临床诊治及基础研究中均发挥极为重要的作用。普通的口吐痰、深部痰基本不包含细支气管表面及肺泡表面衬液携带的生物学信息，因此，均无法替代BALF。而且，间质性肺病、肺动脉高压等肺疾病患者一般无痰，无法通过痰液获取肺部生物信息。

但是，目前BALF的获取方法为经支气管镜灌洗回收获取，该方法存在以下弊端：1)该操作属于有创检查，存在一定危险性，可能引起麻醉药物过敏、发热、咳嗽、声门水肿、气管痉挛、心动过速、血压升高、气管粘膜出血、气胸等相关并发症；对终末期肺疾病患者而言，这些并发症都可能导致呼吸衰竭进一步加重，甚至有可能死亡；2)作为有创检查，终末期肺病患者均存在呼吸衰竭情况，氧储备极差，一般难以耐受气管镜以及镜下灌洗操作；3)该检查方法有一定的禁忌症，例如剧烈咳嗽、严重呼吸衰竭、中重度肺动脉高压、出凝血功能紊乱、严重血小板减少、严重心功能不全等患者均不能接受该检查。

另外，经气管镜获取BLAF存在以下不足：1)灌洗液量小、每次灌洗液仅为10ml；2)回收率低，获取BALF 5ml左右，回收率仅在40～60％；3)灌洗部位不够精准，无法通过镜下血尿对靶部位进行选择性灌洗；4)包含深部肺泡表面液的比率低、携带的生物信息无法完全反应深部肺泡组织；5)灌洗次数必须依照患者情况调整，获取量不稳定等。因此，传统手段获取的BALF难以满足临床及科研需要。

肺移植是终末期肺病患者的唯一有效治疗手段，肺移植受者较其他肺病患者的特殊性在于：肺脏离体后，终末气道塌陷，无法再通过传统的经支气管镜灌洗的方法获取BALF。因此，传统的BALF及其获取方法均无法满足临床以及科研需要，一种新的支气管肺泡灌洗液及其获取方法亟待发明。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述的不足，从而发明一种针对离体肺获取的支气管肺泡灌洗液。

本发明的另一目的在于提供本发明所述的针对离体肺获取的支气管肺泡灌洗液的获取方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种针对离体肺获取的支气管肺泡灌洗液，为包含有生物信息的生理盐水。

可选的，一种所述的针对离体肺获取的支气管肺泡灌洗液的获取方法，包括以下步骤：

S1：取离体的肺部组织置于无菌袋覆盖的湿冰上；

S2：向肺部组织的肺叶支气管注射生理盐水，然后钳夹肺叶支气管口；

S3：将肺叶支气管静置，切开，回收经肺泡灌洗的生理盐水，得到所述的针对离体肺获取的支气管肺泡灌洗液。

可选的，将S2中的肺叶支气管修剪至与50ml注射器外径相近的段。

可选的，将S3中的肺叶支气管的终末细支气管所在区域置于低位，静置3～10秒。

可选的，S3中的肺叶支气管切开位置为肺叶最低点。

本发明的针对离体肺获取的支气管肺泡灌洗液的取材原理为：肺脏已完整离体，由支气管注入的灌洗液可在重力作用下流经细支气管-终末细支气管-肺泡，在准确判断支气管走形后可将所选肺叶的终末细支气管-肺泡置于低位，灌洗液充分流经肺泡后在肺叶最低点剪一小口，充分流经肺泡的BALF由此缺口流出。

本发明的有益效果在于：对患者无伤害，符合伦理需求，获取的BALF包含有丰富的生物信息，并且可根据临床以及科研需要留取充足的BALF，对患者疾病诊断非常有利。

附图说明

图1是传统培养法报告单I；

图2是传统培养法报告单II；

图3是传统培养法报告单III；

图4是传统培养法报告单IV；

图5是传统培养法报告单V；

图6是传统培养法报告单VI；

图7是本申请的离体肺BALF检测报告I；

图8是本申请的离体肺BALF检测报告II；

图9是本申请的制备方法的流程图。

具体实施方式

下面结合实施例和对比例对本发明作进一步的描述，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。

实施例1

一种针对离体肺获取的支气管肺泡灌洗液，为包含有生物信息的生理盐水，其获取方法包括以下步骤：

S1：为方便后期将移植肺与患者主支气管吻合，选择在叶段切除离体肺；将离体肺放置在装有无菌湿冰的无菌盆状容器中以减少组织细胞水解，防止低温破坏离体肺生物信息，并在湿冰上需覆盖无菌敷料；

S2：游离离体肺切面的叶段支气管使之更加清晰易于辨认，判断各支气管所属肺叶；选择需要灌洗肺叶的支气管，并将其修剪至与50ml注射器外径相近的段，避免注射灌洗液时外溢；将去针头的注射器插入已选择的支气管，并注入生理盐水，注射完毕后用组织钳夹闭支气管口；

S3：将该支气管的终末细支气管区域置于低位，静置3～10秒，此时生理盐水受重力作用流至肺泡，在此位置的肺叶最低点剪开一小口，充分流经肺泡的生理盐水由此缺口流出，在切口正下方放置无菌容器杯，收集到的生理盐水即为针对离体肺获取的BALF。

将上述获取得到的针对离体肺获取的BALF进行分类处理，以完成后续对针对科研及临床的检测工作。

对比例1

对实施例1患者的离体肺组织按照传统方法进行培养，并进行生物信息检测。

实施例1患者，72岁，右肺移植受者，既往有曲霉感染病史，右肺CT提示有曲菌球病灶，临床高度怀疑患者肺曲霉病。常规方法检查：针对受体原来的自体肺组织、支气管残端进行组织培养，未检测到曲霉等真菌，附图1-6为对比例1按传统方法受体培养的检验结果，尤其附图1和附图6未见真菌，该阴性检测结果与临床及影像学资料不符；而采用本申请的获取方法获取的离体肺BALF在进行生物测序后，可得到对临床有指导意义的生物信息，详见附图7-8。

综上，以BALF作为标本对肺疾病进行研究是研究肺部疾病的主要手段之一，因此，成功获取BALF是基本条件。然而，针对需要进行肺移植的终末期肺疾病患者，无论是在移植术前还是移植术后，BALF的获取都非常困难。一方面，在移植术前，由于患者无法耐受气管镜操作，因此无法得到BALF；而另一方面，在移植术后，由于肺脏离体、终末气道塌陷，无法再通过传统的经支气管镜灌洗的方法获取BALF。而本申请发明专利能够成功获取到离体肺的BALF，该BALF包含有丰富的、对临床及科研均有指导意义的生物信息，且其获取方法更为安全、符合伦理要求，解决了迫切的社会需要，意义重大。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。