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基于PRSS35通路检测肝癌或肝癌预后的产品及基于PRSS35通路的肝癌治疗药剂

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本发明公开了一种基于PRSS35通路检测肝癌或肝癌预后的产品及基于PRSS35通路的肝癌治疗药剂。该产品包括PRSS35基因或PRSS35蛋白的检测物质。所述检测物质为特异扩增PRSS35基因的引物对、特异识别PRSS35蛋白的试剂及特异结合PRSS35蛋白的试剂中的一种。本发明发现PRSS35在体内肝癌肿瘤中的表达较正常肝组织中明显下调；肝癌病人血清中PRSS35的蛋白水平相较于正常人也明显下调。在小鼠肝脏内外源过表达PRSS35可显著减慢小鼠诱导肝癌的进展。基于此，PRSS35通路分子可以是肿瘤辅助诊断标记物，可以是肿瘤治疗有效靶点，还可以是肝癌患者生存预后指标。

著录项

公开/公告号CN113862352A

专利类型发明专利
公开/公告日2021-12-31

原文格式PDF
申请/专利权人华南理工大学;
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申请/专利号CN202010630380.2
发明设计人高平;张华凤;王烃;
展开▼

申请日2020-06-30
分类号C12Q1/6886(20180101);G01N33/574(20060101);A61K45/00(20060101);A61K38/17(20060101);A61P35/00(20060101);
代理机构44102 广州粤高专利商标代理有限公司;
代理人何淑珍;冯振宁
地址 510640 广东省广州市天河区五山路381号
入库时间 2023-06-19 13:30:50

说明书

技术领域

本发明涉及肝癌检测领域，具体涉及一种基于PRSS35通路检测肝癌或肝癌预后的产品及基于PRSS35通路的肝癌治疗药剂。

背景技术

肝癌是最常见的严重危害人类健康的恶性肿瘤之一，根据2019年中国癌症报告，原发性肝癌是目前我国第 4 位常见恶性肿瘤及第 2 位肿瘤致死病因，严重威胁我国人民的生命和健康。原发性肝癌主要包括肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）、肝内胆管癌（Intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）和 HCC-ICC 混合型 3 种不同病理学类型，3 者在发病机制、生物学行为、组织学形态、治疗方法以及预后等方面差异较大，其中HCC 占 85%～90%（因此本专利以HCC作为主要研究对象，后续所提到的肝癌皆为HCC）。但目前对于肝癌的治疗方式主要是手术及TACE介入治疗，药物通常只作为辅助治疗手段；诊疗手段主要是各种影像学检查，而生物标志物检测如AFP，DFP检测，因为存在诸多阴性患者，通常只作为辅助手段。因此，进一步阐明肝癌发生发展过程中的关键分子机制，对于开发新的肝癌治疗药物和早期诊断标志物尤为关键。

现今已有众多报道表明，在肝癌发生发展过程中，肝脏细胞内有许多的蛋白及其所介导的分子通路发生了改变，以满足肿瘤细胞生存和大量增殖的需求。近年来，随着测序技术和质谱技术的发展及完善，对于肝癌分子机制的研究逐渐从小通量向大通量发生偏移，如2019年贺福初院士通过运用高通量非标记蛋白质组学技术，比较了110例肝癌病人的肝癌组织和癌旁组织的蛋白质组，系统性地分析了肝癌发生时蛋白水平发生了显著改变的细胞内的蛋白分子，并根据这些改变将110例肝癌病人做了更为细致的分子分型，对肝癌的治疗和诊断具有重要意义和价值。

同时，肝脏作为人体最主要的内分泌器官之一，肝癌发生发展过程中，其分泌蛋白质组也发生了显著的改变。分泌蛋白质组是细胞分泌到细胞外环境中的蛋白质的总称，分泌蛋白参与了多细胞生物细胞间信号传递等重要作用。因此，分泌蛋白对肝癌的诊断和治疗也具有重要意义，同时由于肝脏分泌蛋白会大量存在于血液中的特性，更适合也更容易作为靶标检测和靶向治疗的分子。但之前由于分泌蛋白收集及分析存在一系列技术难题，相较于细胞内分子及信号通路的研究则相对滞后。但随着质谱技术的发展，研究者们通过对细胞系水平的分泌蛋白质组和血清蛋白质组进行分析研究，取得了一系列的进展，已经陆续有21个分泌蛋白作为各类癌症的诊疗靶标进入了26个临床试验。但与细胞内分子的研究程度相比和从分泌蛋白总数来看，该领域还存在大量的空白与未知。

发明内容

为了克服现有技术存在的不足或缺陷，本发明提供了一种基于PRSS35通路检测肝癌或肝癌预后的产品及基于PRSS35通路的肝癌治疗药剂。

本发明的目的至少通过如下技术方案之一实现。

本发明基于PRSS35通路在抑制肝癌发生发展过程中发挥的作用及其机制，提供了PRSS35通路中的分子作为潜在的肝癌发生发展抑制分子在肝癌诊断、治疗以及预后关系中的应用。

本发明为肝癌治疗提供新的理论依据和全新分子通路，本发明还为肝癌提供了新的辅助诊断和预后诊断的产品。

本发明提供的一种基于PRSS35通路检测肝癌或肝癌预后的产品，包括PRSS35基因或PRSS35蛋白的检测物质。本发明发现的可以显著抑制肝癌的分子通路是PRSS35基因/蛋白所介导的分子通路。

进一步地，所述基于PRSS35通路检测肝癌或肝癌预后的产品，包括检测PRSS35基因的试剂盒及检测PRSS35蛋白的试剂盒。这两个试剂盒分别使用PRSS35基因/蛋白及其所介导的通路分子作为检测靶标。

进一步地，所述检测物质为特异扩增PRSS35基因的引物对、特异识别PRSS35蛋白的试剂及特异结合PRSS35蛋白的试剂中的一种。特异识别PRSS35蛋白的试剂及特异结合PRSS35蛋白的试剂优选为抗体。

进一步地，所述特异扩增PRSS35基因的引物对包括如SEQIDN0:1和SEQIDN0:2所示的序列。

进一步地，所述检测PRSS35基因方法包括荧光实时定量PCR；所述检测PRSS35蛋白包括蛋白质印迹、免疫组化、免疫荧光及酶联免疫吸附测定（ELISA）中的一种。

进一步地，当检测样本体内肝脏组织的PRSS35基因表达水平大于对照肝细胞癌样品的基因表达水平2倍以上时，则该样本检测为阳性。

进一步地，当检测样本体内血清的PRSS35基因表达水平大于20ng/ml，则该样本检测为阳性。

本发明提供的基于PRSS35通路治疗肝癌或增加肝癌被免疫细胞杀伤的药物，包括提高PRSS35蛋白表达水平的物质或PRSS35的人源重组蛋白。该药物以提高PRSS35蛋白表达水平或调控其所介导通路分子为手段。

进一步地，所述提高PRSS35蛋白表达水平的物质为PRSS35的同源重组表达蛋白或者雌激素。

本发明通过蛋白质组学实验，分子生物学和细胞生物学实验发现PRSS35在肝癌中显著下调。本发明在肝癌细胞系和正常肝细胞系中筛选有显著差异的分泌蛋白，发现肝癌细胞系中PRSS35显著下调；之后又在肝癌临床病人与正常人血清中检测PRSS35的表达水平，发现肝癌病人的血清中PRSS35同样也是显著下调；进一步的，比较肝癌临床病人的肝癌组织和对应的癌旁组织中PRSS35的表达水平，发现PRSS35在肝癌组织中仍然是显著下调；综上本发明推断PRSS35在肝癌中显著下调，这提示本发明PRSS35分子具有成为肝癌辅助诊断分子的潜能。因此基于PRSS35通路可以检测肝癌或肝癌预后，也可以基于PRSS35通路治疗肝癌。

本发明发现PRSS35通路中的分子具有成为肝癌治疗和诊断的靶标的潜力。通过制备靶向药物（如中和抗体）特异性抑制肝癌细胞的PRSS35抑制分子和PRSS35下游底物的水平；或者通过制备提升PRSS35在肝癌细胞内的蛋白量的药物等方式和手段，在治疗肝癌上极具临床应用价值，为肝癌的有效治疗提供了新的策略和切入点。这也提示PRSS35通路上的分子具有成为肝癌患者生存预后指标的潜能。

与现有技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：

（1）本发明通过生物信息学预测、分子生物学和细胞生物学实验发现PRSS35受到ERa通路的转录水平调控；本发明首先通过生物信息学预测PRSS35启动子区潜在的转录因子结合位点，发现ERa可能与PRSS35的启动子相结合；之后，在肝癌细胞系中通过组合实验-在有/无过表达ERa的情况下，外源有/无添加雌激素，再检测各状态下肝癌细胞的PRSS35的水平，发现雌激素和过表达ERa均可以显著上调PRSS35的水平，这提示本发明ERa通路在转录水平调控PRSS35的表达，为日后通过干预PRSS35通路治疗肝癌提供了更多的切入靶点和理论基础；

（2）本发明通过体内、体外实验发现PRSS35通路抑制肝癌需要依赖于免疫微环境；发明者首先在肝癌细胞系中过表达PRSS35的蛋白，发现PRSS35对于肝癌细胞的增殖基本没有影响；之后，在免疫缺陷的Balb/c-nude小鼠体内进行实验，向小鼠皮下注射过表达了PRSS35的肝癌细胞HepG2（标记为HepG2-PRSS35）和没有进行处理的肝癌细胞HepG2（记为HepG2-PRSS35）两组细胞建立皮下移植瘤模型，发现两组肿瘤增殖没有显著的差异；进一步的，在免疫健全的ICR小鼠体内，通过高压尾静脉注射YAP5SA过表达质粒诱导小鼠原位肝癌模型，在有/无共注射PRSS35过表达质粒的情况下，检测小鼠原位肝癌的发生发展情况，结果发现PRSS35可以显著抑制肝癌在小鼠体内的发生发展。同时，通过蛋白质组学联合转录组学实验，筛选得到了PRSS35的蛋白切割底物，并发现PRSS35所切割底物大部分都是已知报道过与免疫相关的分子；以上实验数据证明PRSS35可以抑制肝癌的发生发展，但是需要依赖体内的肿瘤微环境或者说是体内的免疫微环境，让本发明进一步的理解了PRSS35通路发挥功能的可能的机制，为日后通过干预PRSS35通路治疗肝癌提供了更多的切入靶点和理论基础。

附图说明

图1为通过SILAC标记分泌蛋白质组学筛选肝癌细胞系与正常肝细胞系有显著差异的分泌蛋白的结果图；

图2A为通过蛋白质印迹方法检测PRSS35在肝癌临床样本癌组织和癌旁组织中的表达的结果图；

图2B为通过ELISA方法检测PRSS35在肝癌病人和正常人血清中的表达的结果图；

图3A为在各种肝癌细胞系中，过表达PRSS35的情况下检测肝癌细胞的增殖情况结果图；

图3B为在免疫缺陷的Balb/c-nude小鼠体内，向小鼠皮下注射HepG2-EV和HepG2-PRSS35两组细胞建立皮下移植瘤模型，检测细胞增殖情况的结果图；

图3C为通过尾静脉高压注射YAP5SA诱导小鼠原位肝癌模型，检测PRSS35是否可以影响免疫健全的ICR小鼠原位肝癌发生发展的实验结果图；

图4A为在蛋白水平上验证PRSS35受到ERa通路的转录水平调控的研究结果图；

图4B为在mRNA水平上验证PRSS35受到ERa通路的转录水平调控的研究结果图；

图5A为通过蛋白质组学和转录组学联合实验验证得分最高的底物分子为PRSS35的底物的结果图；

图5B为免疫印迹实验验证IGFBP1是PRSS35的底物分子的结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明内容。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆实验指南》 (第三版)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1：PRSS35在临床肝癌中样品中表达下调

1. SILAC标记蛋白质组学检测肝癌细胞系和正常肝细胞系的分泌蛋白表达水平，并分析差异蛋白

方法：

（1）同位素标记细胞培养与蛋白样品收集：

分别建立稳定转染PCDH-EV和PCDH-PRSS35质粒的PLC细胞系，EV组加入轻标的赖氨酸与精氨酸，PRSS35组加入重标的赖氨酸与精氨酸，如此培养24h后，1：2传代1皿，加入puromycin(嘌呤霉素,1.0mg/ml)，培养24h，记录此为同位素标记掺入第1天；重复上述步骤，直到同位素标记掺入培养到第8天；将第8天的EV和PRSS35组细胞分别PBS清洗3遍，加入5ml的无血清对应的培养基，处理24h；24h的处理后，用0.22微米的滤器过滤培养基,将两组细胞的培养基分别收集到离心管中；向过滤好的培养基中加入蛋白酶抑制剂溶液，再将过滤好的培养基分别用3kd-5ml的超滤管进行超滤，4000g离心30min到最小体积，吸取蛋白液转移到2ml的蛋白低吸附EP管中。

（2）蛋白样品的还原，烷基化，酶解和浓缩：

将EV组与PRSS35组分别各取50µg蛋白，再分别加入与之等体积的100mM的HEPES（羟乙基哌嗪乙硫磺酸）和8M GuHCL溶液（盐酸胍）（PH 7.0-8.0），混匀使GuHCL浓度为4M，室温静置10min；之后，将两组蛋白混匀，加入到3kd-0.5ml超滤管中，14000g离心15min，弃去滤出液；再加入400µl的50mM的HEPES和4M GuHCL溶液（PH 7.0-8.0），14000g离心15min，弃去滤出液，重复5次，最后离心到最小体积应该在20-30微升之间；加入425µl的50mM的HEPES和4MGuHCL溶液（PH 7.0-8.0），1000g，倒置离心2min，收集到新的收集管中，加入0.1M的DTT溶液25µl，使DTT（DL-二硫苏糖醇）终浓度在5mM左右，56度水浴30min；冷却样品到室温，加入0.3M的IAM（碘代乙酰胺）溶液25µl，使IAM终浓度在15mM左右，暗处室温反应30min；之后，加入100µl的0.1M的DTT溶液，使终浓度在20mM左右，终止IAM的反应；将混合样品加入到3kd-0.5ml超滤管中，14000g，离心15min，弃去滤液；加入400微升的50mM的HEPES溶液（PH 7-8），14000g，离心15min，弃去滤液，重复3次；最后加入100微升的50mM的HEPES溶液（PH 7-8），1000g，倒置离心2min到新的收集管中，1:50的比例，加入2微克的胰酶，消化18h后，再加入2微克胰酶，消化4h。之后将酶解好的样品0.5ml-10kd的超滤管，14000g，离心15min，收集滤液，之后再加入400微升超纯水，14000g，离心15min，收集滤液，反复3次，将滤液都转移到一个EP管中，加入TFA（三氟乙酸）溶液1.3微升，至终浓度大概在0.1%（体积百分比），然后用分级试剂盒将样品分成8个馏分，真空旋转蒸干样品，之后，加入15微升0.1%（体积百分比）的甲酸溶解样品，12000g离心5min，将样品全部转移到上样管中，准备上机。

（3）上机

将制备好的样品用赛默飞公司的QE-plus质谱仪进行样品分析；

（4）数据分析

用赛默飞公司的蛋白质组学分析软件PD2.2对（3）中得到的数据进行数据分析。

结果：如图1所示，发现相较于正常肝细胞系THLE3,PRSS35在肝癌细胞系PLC中（下降）变化最显著。

结果分析：PRSS35在肝癌细胞系的分泌蛋白质组中显著表达。因此，用质谱的方式检测临床样本中PRSS35的蛋白水平，可以为肝癌的临床诊断提供证据。

2. 免疫印迹实验（Western blot）检测基因PRSS35在临床肝癌组织样品中的表达水平

方法：将各组分临床肝癌肿瘤组织及相对应的正常肝组织，用组织破碎仪破碎为组织匀浆，进而通过细胞裂解液使各组分细胞破碎，细胞内容物（包括蛋白质）融入细胞裂解液中，在相同条件下进行细胞溶解液蛋白质定量调整，最终将统一蛋白含量的各组分样品通过Western bolt检测分析，具体步骤为：应用SDS-PAGE电泳分离蛋白后，将蛋白转到硝酸纤维素膜上，立春红染色存图，脱脂牛奶封闭蛋白；用分别与PRSS35和ACTIN这两种蛋白特异性结合的抗体（PRSS35针对3个功能结构域设计了3种抗体,抗体设计由发明者本人完成，制备交由武汉Abcloanl公司完成）与其充分结合后，再用与一抗特异性结合的二抗与其结合后，进行荧光显影，定影；将图片扫描后进行分析。

结果：如图2A所示，Western blot分析显示7例肝癌病人临床组织样品中癌组织的PRSS35的蛋白表达水平显著低于其对应的癌旁组织样品。图2A为组织样本检测，结果发现PRSS35在肝癌组织样本中显著下调。

结果分析：PRSS35在临床肝癌样品中低表达。因此，用含有特异性识别PRSS35的IHC抗体的辅助诊断试剂盒检测到临床切片样本中PRSS35的异常低表达，更能确诊为该组织样本为肿瘤样本。临床样本的分析进一步提示PRSS35可作为辅助诊断的靶点。

3.ELISA检测基因PRSS35在临床肝癌血清样品中的表达水平

方法：取50例正常人和50例临床肝癌病人相同蛋白量的血清，在相同条件下定量调整，最终将统一蛋白含量的正常人和临床肝癌病人的血清样品通过ELISA检测分析。具体步骤为血清与试剂板孵育，清洗，加入配对抗体孵育，清洗，加入显影试剂，清洗，检测特定OD值的吸光度。

结果：如图2B所示，ELISA分析显示50例肝癌病人临床血清样本中的PRSS35的蛋白表达水平显著低于正常人血清样品。图2B为血清样本检测，发现PRSS35在肝癌病人血清中也显著下调。

结果分析：PRSS35在临床肝癌样品中低表达。因此，用含有特异性识别PRSS35的抗体对的ELISA辅助诊断试剂盒检测到临床病人血清中的PRSS35的异常低表达，更能确诊为该病人为肝癌病人。临床样本的分析进一步提示PRSS35可作为辅助诊断的靶点。

实施例2：构建稳定高表达PRSS35的细胞系。

1. 构建稳定的PRSS35高表达的细胞株

（1）构建PRSS35的表达质粒

用PCR扩增PRSS35的 CDs区域的cDNA序列，将纯化的PRSS35的CDs序列构建到pCDH-lenti-puro表达载体（购自Addgene），获得PRSS35过表达质粒pCDH-lenti-puro-PRSS35。

（2）转染人肝癌细胞

分别利用Lipofectamine2000(Invitrogen,#11668)，将获得的pCDH-lenti-puro-PRSS35和作为对照的pCDH-lenti-puro空载体转入HEK293T细胞。并于6小时后更换DMEM培养基 (DMEM；Gibco) 辅以10％的胎牛血清 (Gibco)。48小时后收集慢病毒上清，并感染人肝癌细胞HepG2细胞。用puromycin(1μg/mL;Sigma-aldrich)筛选10天左右可得到稳定的PRSS35高表达的细胞株HepG2-PRSS35，对照细胞株为HepG2-EV control。

（3）培养稳定的高表达PRSS35的细胞株

使用DMEM培养基（DMEM；Gibco）辅以10%的胎牛血清（Gibco）和半抑制浓度puromycin的培养基培养肝癌细胞HepG2，并在37℃的含5%浓度二氧化碳的无菌细胞培养箱中进行培养。

实施例3：PRSS35在肝癌细胞中的功能研究

1. 检测肿瘤细胞增殖

（1）体外实验：细胞生长实验

通过溴酚蓝染色的方法对不同组分的细胞进行细胞数目统计，检测外源高表达PRSS35的肝癌细胞生长速率的变化。简述如下：将实验组细胞（HepG2-PRSS35）或对照组细胞（HepG2-EV Control）按2×10

结果：如图3A所示较对照组细胞HepG2-EV Control（图中EV曲线），高表达外源PRSS35的肝癌细胞增殖没有显著变化（图中PRSS35曲线）。

结果分析：细胞计数实验结果显示在细胞水平，过表达PRSS35对于肝癌细胞的增殖没有明显的影响，PRSS35对于肝癌的影响很可能依赖于体内的微环境。

（2）体内实验：小鼠异质皮下移植瘤实验

方法：准备足量的HepG2-EV和HepG2-PRSS35细胞；准备免疫缺陷型小鼠Balb/c-nude小鼠，注射前一天称重并记录，随机分笼；用针头直接吸取细胞到1ml注射器中，注射细胞到小鼠背部皮下；注射9天后开始测量小鼠皮下移植瘤大小，直到第30天，杀小鼠取瘤子进行后续试验。

结果：如图3B所示，PRSS35不影响免疫缺陷型小鼠皮下移植瘤的增殖。

结果分析：PRSS35并不影响免疫缺陷型小鼠皮下移植瘤的增殖，这提示本发明PRSS35对于肝癌的影响很可能依赖于体内的免疫微环境。

（3）体内实验：小鼠自发性肝癌诱导实验

方法：将pBL-CMV-lenti-puro-EV(如SEQ ID N0:3所示)，pBL-lenti-puro-RFP（如SEQID N0:4所示）和pBL-CMV-lenti-puro-YAP5SA（如SEQ ID N0:5所示）质粒（尾静脉高压注射pBL-CMV-lenti-puro-YAP5SA质粒可以诱导小鼠自发肝癌）；用PCR扩增PRSS35 CDs区域的cDNA序列，将纯化的PRSS35的CDs序列构建到pBL-CMV-lenti-puro-EV表达载体，获得PRSS35过表达质粒pBL-CMV-lenti-puro-PRSS35；将pBL-CMV-lenti-puro-RFP作为一组，pBL-CMV-lenti-puro-RFP和pBL-CMV-lenti-puro-YAP5SA共注射作为一组；将pBL-CMV-lenti-puro-PRSS35和pBL-CMV-lenti-puro-YAP5SA共注射作为一组，分别通过尾静脉高压注射，注射等量的质粒到5只4周龄的ICR小鼠体内。注射后3个月解剖小鼠，观察肝内肿瘤的形成情况和肿瘤的大小。

结果：如图3C所示，RFP组没有形成肿瘤，而YAP5SA+PRSS35组的肿瘤显著小于YAP5SA+RFP组。

结果分析：实验结果显示通过在肝内高表达PRSS35可以显著的抑制YAP5SA导致的自发肝癌。通过图3A、图3B及图3C，发现PRSS35在细胞系水平上不影响肝癌细胞的增殖，在免疫缺陷小鼠体内不影响肿瘤增殖，在免疫健全的小鼠中可以显著抑制肝癌的发生发展。

2. 研究PRSS35的上游调控机制

方法：在肝癌细胞系中，在有/无过表达ERa的情况下，外源有/无添加雌激素，通过WB和qPCR检测PRSS35的mRNA和蛋白水平变化。qPCR检测的引物对包括如SEQ ID N0:1和SEQ IDN0:2所示的序列。

结果：如图4A和图4B 所示，图4A为蛋白水平上的结果图，图4B为mRNA水平上的结果图，雌激素和ERa都可以上调PRSS35的mRNA和蛋白水平。

结果分析：证明PRSS35受到ERa通路的转录调控，提示本发明干预PRSS35来治疗肝癌可以通过ERa通路来实行。

3.筛选PRSS35的底物分子

方法：准备实验组细胞（PLC-PRSS35）和对照组细胞（PLC-EV Control）各5×10

另一半则提取蛋白做蛋白质组学检测。选择在过表达PRSS35情况下，蛋白水平显著下调，而mRNA水平没有显著变化的分子列出列表，作为PRSS35的候选底物分子，挑选mRNA水平/蛋白水平值最高的分子做免疫印迹实验（Western blot）验证。

结果：转录组学和蛋白组学联合分析结果如图5A所示，挑取mRNA水平/蛋白水平值最高的分子IGFBP1做免疫印迹实验，发现确实被PRSS35所下调，如图5B所示。

结果分析：证实IGFBP1是PRSS35的下游底物，提示本发明干预PRSS35来治疗肝癌可以通过直接调控IGFBP1及其下游来实行；也暗示本发明IGFBP1及其下游分子有成为肝癌诊断的靶标的潜力。同时，本发明从筛选到的底物列表中发现，其底物含有众多与免疫相关的分子，暗示本发明PRSS35抑制肝癌可能通过免疫相关的分子机制。

以上实施例仅为本发明较优的实施方式，仅用于解释本发明，而非限制本发明，本领域技术人员在未脱离本发明精神实质下所作的改变、替换、修饰等均应属于本发明的保护范围。

序列表

<110> 华南理工大学

<120> 基于PRSS35通路检测肝癌或肝癌预后的产品及基于PRSS35通路的肝癌治疗药剂

<160> 5

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成(人工序列)

<400> 1

ggtggaccct cattgatgga t 21

<210> 2

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工合成(人工序列)

<400> 2

cattcgatgc cacacactgt at 22

<210> 3

<211> 6674

<212> DNA

<213> 人工合成(人工序列)

<400> 3

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