用于治疗蠕形螨引起的眼部和面部疾病的多杀菌素制剂

摘要

本发明涉及用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨（Demodex mite）感染，或用于治疗与眼部蠕形螨感染有关的眼睛或皮肤状况的材料和方法，该方法包括将包含一种或多种多杀菌素化合物的组合物局部施用于眼表（结膜和/或角膜）或眼睛的其他解剖结构或与眼睛相邻的区域。

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年7月27日提交的美国临时申请号62/711,309的权益，在此通过引用整体并入本文，包括任何图形、表格、核酸序列、氨基酸序列或附图。

背景技术

蠕形螨(Demodex)是生活在哺乳动物毛发毛囊内或附近的蛛形纲中的外寄生螨的一个属。蠕形螨与人类有共生的关系，它们无症状地寄生于人类毛囊皮脂的毛囊。因此，这些螨虫是人类皮肤的皮脂腺区域中正常微生物组的一部分(Grice EA等,“The skinmicrobiome:potential for novel diagnostic and therapeutic approaches tocutaneous disease,”Semin Cutan Med Surg.,2014,33(2):98-103)。在健康的皮肤中，螨虫的密度通常较低，并且这种较低的密度不会引起皮肤疾病。当这些螨虫的密度增加时，它们会诱发面部皮肤状况。眼部蠕形螨感染患者经常抱怨瘙痒、灼热、发红、睫毛根部结痂、视力模糊和干眼。

在已鉴定的100多种蠕形螨中，毛囊蠕形螨(Demodex folliculorum)和皮脂蠕形螨(Demodex brevis)是在人类上常见的两种主要物种(Lacey N等,“Under the lash:Demodex mites in human diseases,”Biochem(Lond).,2009年8月1日，31(4):2-6)。大多数个体在童年时期就定居，并且在青春期随着分泌的皮脂水平的增加，其数量在毛囊皮脂单位中及周围扩增，并且随着年龄的增长而增加(Elston DM,“Demodex mites:facts andcontroversies”,Clin Dermatol,2010,28(5):502-504)。这可能是由于蠕形螨产生的脂肪酶，使螨虫利用皮脂作为食物来源(Jimenez-Acosta F等，“Demodex mites containimmunoreactive lipase”,Arch Dermatol,1989,125(10):1436-1437)。其他营养来源包括细胞碎片和存在于毛囊皮脂单位内和周围的细菌。

毛囊蠕形螨(D.folliculorum)的身体较长，并在睫毛根部(圆柱形头皮屑)增生，引起前睑炎。具体而言，毛囊蠕形螨(D.folliculorum)消耗毛发毛囊处的上皮细胞，引起睫毛扩张、发育不全和反应性角化过度，这通常被观察为倒睫和睫毛脱落。皮脂蠕形螨(D.brevis)尺寸较小，钻入皮脂腺和睑板腺，引起后睑炎。皮脂蠕形螨(D.brevis)阻塞睑板腺开口，导致泪脂分泌不足，这可能是干眼症的炎症触发因素。

蠕形螨还携带自己的细菌库，其可导致眼表发炎。螨虫表面的细菌已显示出与已知的葡萄球菌(staphylococcal)物种竞争，产生人类宿主免疫反应，导致眼睑和眶周表皮发炎至表皮下反应。如果疾病处于慢性和进行性阶段，炎症可能会扩散到结膜和角膜，可能导致浸润性角膜结膜炎，结节性瘢痕沉积和角膜新生血管形成。

发明内容

本发明涉及用于治疗人或动物的眼睛的眼部蠕形螨感染，或用于治疗与眼部蠕形螨(例如毛囊蠕形螨、皮脂蠕形螨或两者)感染相关的眼睛或皮肤疾病的材料和方法。

本发明的一个方面涉及一种用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染或用于治疗与眼部蠕形螨感染有关的眼睛或皮肤的疾病的方法，其包括局部施用包含一种或多种多杀菌素化合物的组合物至眼表(结膜和/或角膜)或眼睛的其他解剖结构或与眼睛相邻的区域。在一些实施方式中，所述疾病是选自蠕形螨引起的睑缘炎(也称为蠕形螨睑缘炎)、蠕形螨引起的眼部红斑痤疮、蠕形螨引起的面部红斑痤疮、干眼症、睑板腺功能障碍、睑板腺囊肿、睑腺炎、滤泡性炎症、非特异性面部皮炎、浸润性角膜结膜炎，结节性瘢痕沉积或角膜新血管形成中的一种或多种。该治疗可减轻选自以下受试者的一种或多种体征或症状：受试者的瘙痒、灼热、异物感、眼睑边缘结痂和发红、视力模糊、圆柱形皮屑、睫毛错位、睫毛倒睫、睫毛脱落、眼睑边缘炎症、睑板腺功能障碍，睑结膜炎和睑缘角膜炎(blepharokeratitis)。

在一些实施方式中，将组合物局部施用至与眼睛相邻的区域，其中所述区域包括眼睑、眼睑边缘、睫毛、睫毛毛囊、眉毛或眉毛毛囊中的一种或多种。在一些实施方式中，将所述组合物局部施用至与眼睛相邻的区域，其中所述区域包括眼睑的皮脂腺开口(例如，蔡氏腺(gland of Zeis)，莫尔腺(gland of Moll)或睑板腺中的一个或多个)。

本发明的另一方面涉及一种局部用组合物，包含0.1％至10％(w/v)的一种或多种多杀菌素化合物(本文也称为本发明的“局部用组合物”或“多杀菌素组合物”或“局部用多杀菌素组合物”)和制备局部用组合物的方法。在一些实施方式中，组合物是溶液、悬浮液、药膏、喷雾剂、洗剂、凝胶、糊剂、香脂、泡沫、摩丝、磨砂膏或清洁剂(例如洗发剂或肥皂)、乳膏或软膏。肥皂可以是固态的，例如条状，液态或半固态。

本发明的另一方面涉及一种包含所述局部用组合物的制品；以及其中装有局部用组合物的容器。在一些实施方式中，容器是可折叠或不可折叠的管、袋、小包、泡罩、条、安瓿瓶、药水瓶、瓶、罐或广口瓶。

本发明的另一方面涉及用局部用组合物预处理或包含局部用组合物的眼部或面部涂药器。在一些实施例中，涂药器是拭子、化妆垫、擦拭布、擦拭棒、小毛巾、海绵、纱布、粉扑、棒、刷子或梳子。

本发明的另一方面涉及一种试剂盒，该试剂盒可用于治疗人或动物受试者的眼部蠕形螨感染，或用于治疗与眼部蠕形螨(例如毛囊蠕形螨，皮脂蠕形螨或两者)感染有关的眼睛或皮肤的疾病。该试剂盒包含局部用组合物；和眼部或面部涂药器。任选地，涂药器可以用局部用组合物预处理或包含局部用组合物。该试剂盒可进一步包括容纳该组合物的容器。试剂盒可进一步包括用于通过将组合物施用于眼表(结膜和/或角膜)或眼睛的其他解剖结构，或施用于与眼睛相邻的区域治疗人或动物受试者的眼部蠕形螨感染，或用于治疗与眼部蠕形螨感染相关的眼睛或皮肤疾病的说明书(例如，印刷或数字说明书)。

附图说明

图1示出了可用于本发明的组合物和方法中的多杀菌素化合物的一些实施方式的化学结构(式(I))。

具体实施方式

本发明涉及用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染，或用于治疗与眼部蠕形螨(例如毛囊蠕形螨，皮脂蠕形螨或两者)感染相关的眼睛或皮肤疾病的材料和方法。

本发明的一个方面涉及一种用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染，或用于治疗与眼部蠕形螨感染有关的眼睛或皮肤疾病的局部用组合物，该组合物包含0.1％至10％(w/v)的一种或多种多杀菌素化合物。

在美国专利号5,362,634中鉴定为A83543的发酵产物是由棘糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)产生的一系列相关化合物。这些化合物已被称为因子或组分A，B，C，D，E，F，G，H，J，K，L，M，N，O，P，Q，R，S，T，U，V，W，Y等(也请参见已公开的国际专利申请WO 93/09126和WO 94/20518)，并且称为多杀菌素A，B，C等。多杀菌素是一类对多种害虫具有杀虫活性的大环内酯。早期鉴定的多杀菌素被发现具有一个5,6,5-三环系统，一个12元大环内酯、一个中性糖(鼠李糖)和一个氨基糖(福乐糖胺(forosamine))融合(参见Kirst，HA等(1991)“A83543A-D，Unique Fermentation-Derived TetracyclicMacrolides”Tetrahedron Letters 32(37):4839-4842)。天然多杀菌素可通过发酵来自美国农业部农业研究服务部中西部地区北部区域研究中心(Midwest Area NorthernRegional Research Center,Agricultural Research Service,United StatesDepartment of Agriculture)的原种培养物收藏品的保藏号为NRRL 18719、18537、18538、18539、18743、18395和18823的培养物而产生，美国伊利诺伊州皮奥里亚市北大学街1815号，邮政编码61604。美国专利号5,496,931、5,670,364、5,591,606、5,571,901、5,202,242、5,767,253、5,840,861、5,670,486和5,631,155中也公开了多杀菌素。现已发现多杀菌素可用于控制蛛形纲动物、线虫和昆虫。

多杀菌素(spinosyns)和螺环多杀菌素(spinosoids)(半合成类似物)的实施例公开于Kirst HA“The spinosyn family of insecticides:realizing the potential ofnatural products research,”The Journal of Antibiotics,2010,63:101-111；LegockiJ等，“Contemporary trends in development of active substances possessing thepesticidal properties:spinosyn insecticides,”Pestycydy/Pesticides,2010,1-4:59-71；Sparks TC等，“Natural products as insecticides:the biology,biochemistryand quantitative structure-activity relationships of spinosyns andspinosoids”,Pest Manag Sci,2001,57:896-905；和Salgado VL等，“Studies on theMode of Action of Spinosad:The Internal Effective Concentration and theConcentration Dependence of Neural Excitation,”Pesticide Biochemistry andPhysiology,”1998,60:103-110，每个都通过引用整体并入本文)。

在本发明的各个方面和实施方式中有用的多杀菌素化合物是指对蠕形螨属的成员具有杀螨活性的多杀菌素和螺环多杀菌素。术语“杀螨(acaricidal)”和“杀螨(miticidal)”在本文中可互换使用，是指在任何生命阶段杀死蠕形螨属螨虫的能力，或以任何方式导致蠕形螨种群的总体减少的干扰其生长或生命周期的能力。在一些实施方式中，蠕形螨属物种是毛囊蠕形螨，皮脂蠕形螨或两者。例如，术语“杀螨”包括抑制或消除害虫的繁殖能力，以及抑制害虫从一种形式发展成更成熟的形式，例如，各种幼虫形式之间的过渡或从幼虫到第一若虫或从第一若虫到若虫，或从若虫到成虫的过渡。此外，术语“杀螨”旨在包括螨虫生命周期的所有阶段。因此，例如，该术语包括杀幼虫、杀卵和杀成虫作用(例如，参见Rather PA等Human Demodex Mite:The Versatile Mite of DermatologicalImportance”,Indian J Dermatol,2014,1月-2月,59(1):60-66)。用于评估体外和体内蠕形螨杀死活性的技术是本领域已知的并且可以被利用(参见，例如，美国专利号8,128,968(Gao等)；Gao Y-Y等，“In vitro and in vivo killing of ocular Demodex by tea treeoil,”Br J Ophthalmol,2005,89:1468-1473；和Tighe S等，“Terpinen-4-ol is the mostactive ingredient of tea tree oil to kill Demodex mites,”Trans Vis Sci Tech.,2013,2(7):2)。

在一些实施方式中，一种或多种多杀菌素化合物具有图1所示的式(I)的化学结构或其药学上可接受的盐，其中R

其中R

其中R

其中R

其中R

在一些实施方式中，组合物包含多杀菌素A，多杀菌素D或其组合。这些和许多其他多杀菌素化合物的化学结构已知有一段时间了。多杀菌素A在式(I)的结构中具有以下取代原子或基团：R

在一些实施方式中，多杀菌素A和多杀菌素D以多杀菌素A与多杀菌素D的比例约18：2至约16：4存在于该组合物中。在一些实施方式中，多杀菌素A和多杀菌素D以多杀菌素A与多杀菌素D(多杀霉素(spinosad))的比例约为17：3存在于该组合物中。

该组合物可以以任何剂型配制，该剂型可用于局部施用于眼表(结膜和/或角膜)，眼睛的其他解剖结构和/或邻近眼睛的区域，例如眼睑、眼睑边缘、睫毛、睫毛毛囊、眉毛或眉毛毛囊，或围绕眼睑皮脂腺开口的区域(例如，蔡氏腺，莫尔腺或睑板腺中的一个或多个)。在一些实施方式中，组合物是溶液、悬浮液、药膏、喷雾剂、洗剂、凝胶、糊剂、香脂、泡沫、摩丝、磨砂膏或清洁剂(例如洗发剂或肥皂)、乳膏或软膏。肥皂可以是固体，例如条状、液体或半固体。

可以采用用于制备皮肤病学上可接受的和/或眼科上可接受的组合物的方法来将一种或多种多杀菌素化合物与组合物中的一种或多种其他组分混合。可以对组合物的成分进行预灭菌，或者可以在生产期间或生产结束时对组合物进行灭菌。

在一些实施方式中，组合物可以形成为化妆品产品(例如化妆品)，例如粉底、睫毛膏、眼影或眼线膏。该组合物也可以是面膜或卸妆乳的形式。

在各种实施方式中，本文涵盖的组合物包含药学上可接受的赋形剂，例如列在《雷明顿：药物科学与实践》(Remington:the Science and Practice of Pharmacy)866-885中的(Alfonso R.Gennaro编辑第19版1995；Ghosh,T.K.等.Transdermal And Topical DrugDelivery Systems，其通过引用整体并入本文)，包括但不限于防护剂、吸附剂、缓和剂、润肤剂、防腐剂、抗氧化剂、保湿剂、缓冲剂、增溶剂，皮肤渗透剂和表面活性剂。

优选地，多杀菌素组合物包含皮肤病学上可接受的和/或眼科可接受的碱。如本文所用，“皮肤病学上可接受的碱”是指一种或多种非洗剂赋形剂，当以有效浓度施用于眼睛附近的皮肤时，它们不会对皮肤造成刺激、发炎、疼痛或其他伤害。如本文所用，“眼科可接受的碱”是指当以有效浓度局部施用于眼表时不刺激或以其他方式伤害眼表面的一种或多种非洗剂赋形剂。

防护剂和吸附剂包括但不限于喷粉、硬脂酸锌、胶棉、二甲硅油、硅酮、碳酸锌、芦荟凝胶和其他芦荟产品、维生素E油、尿囊素、甘油、矿脂和氧化锌。缓和剂包括但不限于安息香、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯醇。润肤剂包括但不限于动植物油脂、肉豆蔻醇、明矾和醋酸铝。防腐剂包括但不限于二氧化氯，季铵化合物，例如苯扎氯铵，苄索氯铵，溴棕三甲铵，地喹氯铵和氯化十六烷基吡啶；汞剂，如硝酸苯汞，醋酸苯汞和硫柳汞；醇试剂，例如氯丁醇，苯乙醇和苯甲醇；抗菌酯，例如对羟基苯甲酸的酯；以及其他抗微生物剂，如洗必泰，氯甲酚，苯甲酸和多粘菌素。合适的抗氧化剂包括但不限于抗坏血酸及其酯，硫酸氢钠，丁基化羟基甲苯，丁基化羟基茴香醚，生育酚和螯合剂，如EDTA和柠檬酸。合适的保湿剂包括但不限于甘油、山梨糖醇、聚乙二醇、尿素和丙二醇。合适的增溶剂包括但不限于氯化季铵、环糊精、苯甲酸苄酯、卵磷脂和聚山梨酯。合适的皮肤渗透剂包括但不限于乙醇、异丙醇、辛基苯基聚乙二醇、油酸、聚乙二醇400、丙二醇、N-癸基甲基亚砜、脂肪酸酯(例如肉豆蔻酸异丙酯、月桂酸甲酯、单油酸甘油酯、以及丙二醇单油酸酯)；和N-甲基吡咯烷酮。

该组合物可以包含一种或多种赋形剂。在一些实施方式中，组合物包含一种或多种赋形剂，其选自矿脂、矿物油、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸甲酯、羊毛脂、氯丁醇、水、羊毛脂醇、硫代硫酸钠、磷酸二氢钠、醋酸苯汞、甘露醇、氯化锌、磷酸钠、乙酸钾、羟丙甲纤维素、硫酸庆大霉素、硼酸、氢氧化钠、羊毛脂油、卡波姆均聚物b型(烯丙基季戊四醇交联)或苯扎氯铵。在一些实施方式中，该组合物不包含对羟基苯甲酸酯。

该组合物可以包含胶凝剂。胶凝剂的实施例包括树胶，琼脂，角叉菜胶，矿脂或纤维素聚合物(例如羟乙基纤维素或羟甲基纤维素)。

该组合物可进一步包含一种或多种溶剂、助溶剂、缓和剂、润肤剂、防腐剂、抗微生物剂、抗氧化剂、保湿剂、稳定剂或增溶剂。

在一些实施方式中，该组合物包含一种或多种赋形剂选自水、氢氧化钠、聚山梨醇酯80、甘油、蓖麻油、乙酸钠、硼酸、山梨酸、乙二胺四乙酸二钠、卡波姆共聚物A或B型(烯丙基季戊四醇交联的)、或硅油或硅树脂聚合物凝胶(例如，二甲硅油或环甲硅油)。

可以包括将活性成分局部递送至解剖学目标部位的粘膜粘附聚合物，并且在凝胶中特别有用。这样的聚合物具有称为生物粘附的性质，其是指药物载体对特定生物组织例如粘膜的能力。这些聚合物可以延长活性剂与生物组织的接触时间，从而提高生物利用度。具有各种粘膜粘附性能质量的生物粘附聚合物的实施例包括羧甲基纤维素、卡波姆、聚卡波非和海藻酸钠。

多杀菌素组合物的pH应在皮肤病学和/或眼科可接受的范围内。正常的眼泪的pH值约为7.4，并具有一定的缓冲能力。将组合物施用于眼睛刺激了眼泪的流动以及眼泪的缓冲能力内的任何过量的氢离子或氢氧根离子的快速中和。如果只向眼睛添加1或2滴含有活性剂的液体组合物，那么眼泪的缓冲作用通常足以提高pH值并防止明显的不适感。

尽管期望眼科组合物具有与泪液相同的pH和等渗值，但这通常是不可能的。应该选择最接近7.4的生理pH并且不损害组合物的杀螨效力的缓冲系统。可以根据其化学性质，在制备方法的一个步骤中，进行混合物的pH值的验证以及用缓冲剂或中和剂的溶液进行调节，以及任选的添加剂的掺入。在一些实施方式中，多杀菌素组合物包含一种或多种皮肤病学和/或眼科可接受的pH调节剂或缓冲剂，包括但不限于酸，例如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱，例如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠和三羟甲基氨基甲烷；缓冲剂，例如柠檬酸盐/葡萄糖、碳酸氢钠和氯化铵。以使组合物的pH保持在皮肤病学和/或眼科可接受范围内所需的量包括这些酸、碱和缓冲剂。

在一些实施方式中，该组合物不包含具有抗蠕形螨的活性的其他试剂。在一些实施方式中，除了一种或多种多杀菌素化合物之外，该组合物不包含活性剂。

在一些实施方式中，在可能的情况下，组合物可以在组合物中包括化合物的药学上可接受的盐，例如多杀菌素化合物和其他存在的化合物。在一些实施方式中，组合物包含化合物的酸加成盐。在一些实施方式中，组合物包含化合物的碱加成盐。如本文所用，术语药学上可接受的盐或复合物是指保留母体化合物所需的生物学活性并且表现出最小的(如果有的话)不希望的毒理学作用的盐或复合物(例如溶剂化物，多晶型物)。

在一些实施方式中，所述组合物还包含对蠕形螨具有杀螨活性的其他试剂，例如选自以下物质的一种或多种试剂：伊维菌素，除虫菊酯，拟除虫菊酯(例如苄氯菊酯，苄呋菊脂或D-苯醚菊酯)，茶树油(TTO)，TTO组分(例如4-萜烯醇(T4O))，甲硝唑，次氯酸(HOCl)，精油(例如薄荷油或鼠尾草)，碱金属盐(例如锂盐)，硫代磷酸酯(例如，非挥发性，脂溶性硫代磷酸酯(例如，蝇毒磷)或甲脒(例如，双甲脒)。

在一些实施方式中，该组合物还包含一种或多种抗生素剂。在一些实施方式中，抗生素剂对在蠕形螨上或其内发现的一种或多种细菌(例如链球菌，葡萄球菌或蔬菜芽孢杆菌)(Streptococci,Staphylococci,或Bacillus oleronius)具有抗菌活性。在一些实施方式中，抗生素剂还具有杀螨活性，例如甲硝唑。

在一些实施方式中，该组合物还包含一种或多种抗炎剂。可以包括的抗炎剂的实施例是糖皮质激素或其他类固醇(例如，泼尼松，醋酸可的松，泼尼松龙，甲基泼尼松龙，地塞米松，倍他米松，曲安西龙，倍氯米松，醋酸氟可的松，醋酸脱氧皮质酮，醛固酮)，非甾体类抗炎药物(例如水杨酸酯，芳基脂肪酸，2-芳基丙酸，N-芳基邻氨基苯甲酸，昔康，昔布或磺酰苯胺)，Cox-2特异性抑制剂(例如伐地考昔，塞来昔布或罗非考昔)，来氟米特，硫代葡萄糖金，金硫代苹果酸酯，aurofin，柳氮磺胺吡啶，羟氯奎宁，米诺环素，TNF-α结合蛋白(例如英夫利昔单抗，依那西普或阿达木单抗)，阿巴西普，阿那白滞素，干扰素-β，干扰素-γ，白介素-2，过敏疫苗，抗组胺剂，抗白三烯，β-激动剂，茶碱或抗胆碱能药，抗生素，他克莫司或类维生素A。

在一些实施方式中，将抗炎剂配制成用于局部使用。在一些实施方式中，局部抗炎剂是局部类固醇。在美国，局部类固醇根据其收缩毛细血管和引起皮肤变白的能力进行分类(I-VII类/组)，组I是最强或最有效的，而组VII则是最弱和最轻的。可以使用的局部配制的类固醇的一些实施例包括氯倍他索，倍他米松，双氟拉松，氟轻松醋酸酯，氟氢缩松，卤代倍他索，安西奈德，去羟米松，哈西奈德，氟替卡松，曲安西龙，氟轻松，氢可的松，莫米松，曲安西龙，阿氯米松，地奈德(denoside)和泼尼卡松。

在一些实施方式中，抗炎剂被配制成用于眼科用途。可以使用的眼科配制类固醇的一些实施例包括地塞米松，二氟泼尼酯，氟米龙，氯替泼诺(loteprednol etabonate)和利美索龙。

任选地，该组合物可以包含用于向与眼睛相邻的皮肤和头发的区域施用的研磨剂。包含磨料可用于机械搅动眼睛、眼睑、睫毛和毛囊附近的组织区域，以改善组合物中的一种或多种多杀菌素化合物接近蠕形螨的能力。该处理可用于搅动或移动不需要的材料，例如蠕形螨卵，幼虫或螨虫，并将其从睫毛毛囊或眼睛或眼睑的其他部位去除，或使它们接近多杀菌素组合物。磨料还可以通过直接杀死或破坏来消除生物体。磨料可包括任何磨料颗粒、粉末或晶体，包括但不限于以下一种或多种：氧化铝(例如氧化铝，三氧化铝，刚玉粉)、硫酸钡、氮化硼、碳酸钙、醋酸纤维素、陶瓷、钻石、硅藻土、绿宝石、乙烯/丙烯酸共聚物(ethylene/acric acid copolymer)、纤维、石榴石、玻璃、高岭土、月桂酰赖氨酸、熔岩、氧化镁、云母、改性淀粉、尼龙、其他金属，其他聚合物，其他二氧化硅或含硅材料、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯聚丙烯、聚苯乙烯、聚四氟乙烯(PTFE)、浮石、红宝石、沙、蓝宝石、贝壳、绢云母、硅土、二氧化硅、碳化硅、碳酸氢钠、氯化钠晶体、淀粉、蚕丝、滑石粉、黄玉、沸石或聚合物颗粒。

磨料颗粒可以是任何形状，并且可以具有任意数量的侧面。磨料颗粒可以是整体的菱形(三角形)、椭圆形、马奎斯(Marquise)形状、八角形、椭圆形、梨形、矩形、圆形、正方形、或者可以是这些形状的组合或变化(例如，圆角正方形)。磨料颗粒可以具有一个表面或可以具有一个以上的表面(例如，侧面或正面)。磨料颗粒可具有2、3、4、5、6-10、11至20、21至30，最多40，最多50，最多60或超过60个侧面。磨料颗粒的表面可以是基本上光滑的、规则的、有纹理的或不规则的。磨料颗粒可以具有一个或多个尖锐的边缘或尖端。磨料颗粒的最长尺寸可为约1至约600微米。

一组中的磨料颗粒都可以彼此相似地成形或可以彼此不同地成形。一组中的磨料颗粒可以全部具有相同的尺寸，或者可以在尺寸范围内。一组颗粒可以大于最小值或可以小于最大值。一组磨料颗粒可以包括跨度为约1至约15微米，约15微米至约25微米，约25微米至约100微米，约100至约300微米或约300至约600微米的颗粒。在一个实施例中，一组磨料颗粒可以包括从大于约25微米到小于约300微米跨度的颗粒。出于不同的原因，可以选择不同尺寸和不同形状的颗粒。可以针对不同的眼睛区域疾病，不同的皮肤类型或敏感性和/或不同的施用方法选择不同的尺寸和形状。具有粗糙表面的颗粒可以使用诸如棒子或小毛巾的涂药器来施用，而基本上圆形的颗粒可以在压力下被推向表面。

磨料可以包括一组单独的颗粒，或者可以包括具有磨料表面的基底，或者可以是任何组合或变体。基底可以具有与其连接(附着)以提供研磨表面的多个磨料颗粒，或者它可以是具有粗糙纹理表面的材料。粗糙的纹理表面在其表面上的孔径可以为约1至约15微米，约15微米至约25微米，约25微米至约100微米，约100至约300微米或约300至约600微米。

软膏

在一些实施方式中，皮肤病学和/或眼科可接受的基质包括药学上可接受的软膏基质。合适的软膏基质的实施例包括但不限于油质软膏基质，例如矿脂(例如液体矿脂或白矿脂)、液体石腊和聚乙烯的复合软膏基质(plastibase)、硬石蜡、白色软石蜡、黄色软石蜡、液体石蜡、乳化蜡、微晶蜡、白蜂蜡、黄蜂蜡、巴西棕榈蜡、羊毛蜡(羊毛脂肪)、矿物油、橄榄油、纯化的羊毛脂、无水羊毛脂和水溶性软膏基质，例如聚乙二醇(例如，聚乙二醇400或聚乙二醇3350)，丙二醇，聚氧乙烯，聚氧丙烯或其任何组合。

在一些实施方式中，该组合物是软膏并且包括一种或多种选自以下物质的赋形剂：矿脂、矿物油、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸甲酯、羊毛脂、氯丁醇、水、羊毛脂醇、硫代硫酸钠、磷酸二氢钠、乙酸苯汞、甘露醇、氯化锌、磷酸钠、乙酸钾、羟丙甲纤维素、硫酸庆大霉素、硼酸、氢氧化钠，羊毛脂油、卡波姆均聚物B型(烯丙基季戊四醇交联)或苯扎氯铵。

在一些实施方式中，多杀菌素组合物是具有矿脂基质的软膏。矿脂是烃的半固体混合物，为皮肤和眼科应用提供了某些优势。矿脂是一种假塑性体，可提供固态行为，从而增加稳定性并防止相分离和悬浮颗粒沉降。矿脂是触变的，对于将药物保持在悬浮液中同时保持涂抹性非常好。对于眼科用途，它可以散布在眼睛中，并且在施加剪切力(眨眼时)时，产品变得更易流动并保持流动性，从而有助于遮盖眼睛。因为矿脂是非水性的，所以它会扩展和软化，但不会被眼泪冲洗出眼睛(与水溶液不同)。作为非水性和非吸湿性赋形剂，可以避免组分水解和水解降解的问题。作为一种不溶性赋形剂，矿脂将治疗限制在局部给药，几乎没有系统吸收。用于医药产品的矿脂分类为矿脂USP和白矿脂USP。对于眼科用途而言，白矿脂通常是优选的。矿脂的颜色和透明度以及流变特性(稠度，流动性和屈服应力)各不相同。相对于其在制剂中的浓度，其他赋形剂(例如矿物油、表面活性剂和防腐剂)可以降低表观粘度和屈服应力。

乳液

本发明的组合物可以配制成乳液，例如水包油乳液。所述局部水包油乳液组合物可以呈液体、糊剂或固体形式，或呈软膏剂、霜剂、凝胶剂、喷雾剂、泡沫剂、混悬剂、洗剂、洗发剂或洗涤基质的形式。所述组合物还可以是微球或纳米球的悬浮液或脂质或聚合物囊泡或聚合物贴剂和用于可控释放水凝胶的形式。这些用于局部施用的组合物可以是无水形式、水性形式或乳剂形式。

在本发明的一些实施方式中，该组合物为乳膏或洗剂类型的乳液、凝胶或溶液的形式，并且更特别地为乳膏的形式。

在一些实施方式中，乳液包含选自水、氢氧化钠、聚山梨醇酯80，甘油、蓖麻油、卡波姆共聚物A型、乙酸钠、硼酸、山梨酸、乙二胺四乙酸二钠或硅油或硅酮聚合物凝胶(例如，二甲硅油或环甲硅油)中的一种或多种赋形剂。

常规乳液通常是两种不混溶液体的相对不稳定的、几乎均匀的体系，其中一种以细小液滴(胶束)的形式分散在另一种中。该分散体借助于表面活性剂-乳化剂的作用来稳定，所述表面活性剂-乳化剂改变了界面处的结构和力的比例，并因此通过降低界面张力能量而增加了分散体的稳定性。表面活性剂乳化剂是具有对油具有亲和力的疏水性成分和对水具有亲和力的亲水性成分的两亲化合物，因此在两相之间形成连接。因此，离子型或非离子型乳化剂通过吸附到界面上并形成液晶薄层来稳定油/水乳液。

本发明的组合物可以包含一种或多种非离子表面活性剂乳化剂。非离子表面活性剂的乳化剂能力与分子的极性紧密相关。该极性由HLB(亲水/亲脂平衡)定义。常规乳液通常通过表面活性剂的混合物来稳定，所述表面活性剂的HLB可以完全不同，但是其在混合物中的比例对应于待乳化的脂肪相所需的HLB。

合适的非离子表面活性剂乳化剂可以选自包括以下物质组成的组：鲸蜡硬脂醇，鲸蜡醇，椰油酰胺DEA，椰油酰胺MEA，异鲸蜡醇聚醚-20，油醇，山梨糖醇单硬脂酸酯，山梨糖醇三硬脂酸酯，硬脂醇，四丁酚醛，柔肌素，Solutol HS 15，泊洛沙姆如普朗尼克F-68LF

在一些实施方式中，乳液包括卡波姆均聚物(Carbopol)，其可以乳化水包油型悬浮液，从而允许用于不混浊/不粘的制剂。

在一些实施方式中，本发明的组合物是水包油乳液，其包含：(a)一种或多种多杀菌素化合物；(b)包含脂肪物质和/或润肤剂的油相；(c)水；和任选地(d)表面活性剂乳化剂。

脂肪物质的实施例包括植物油、矿物油、动物油或合成油、硅油、格尔伯特醇或其他物质，以及它们的混合物。

矿物油的实施例包括各种粘度的石蜡油，例如由Esso销售的Primol352、Marcol82或Marcol 152。植物油的实施例包括甜杏仁油、棕榈油、大豆油、芝麻油和向日葵油。动物油的实施例包括羊毛脂油、角鲨烯油、鱼油和貂油。合成油的实施例包括酯，例如由CognisFrance以商品名Cetiol SN出售的鲸蜡硬脂基异壬酸酯；己二酸二异丙酯，例如由ISF以商品名Ceraphyl230出售的产品；棕榈酸异丙酯，例如由Croda以商品名Crodamol IPP出售的产品；或辛酸癸酸甘油三酯，例如由Huls/Lambert Riviere销售的Miglyol812。硅油的实施例包括聚二甲基硅氧烷，例如以商品名Dow Corning 200流体销售的产品，和环甲硅油，例如由Dow Corning以商品名Dow Corning244流体销售的产品，以及由SACI-CFPA以商品名Mirasil CM5销售的产品。

其他脂肪物质可以包括脂肪酸，例如白矿脂、硬脂酸、脂肪醇例如硬脂醇、鲸蜡硬脂醇和鲸蜡醇或其衍生物，蜡例如蜂蜡、巴西棕榈蜡或小烛树蜡，以及树胶，特别是硅酮橡胶。

组合物中的一种或多种脂肪物质的存在量可以为组合物重量的约20％至约40％。在一些实施方式中，一种或多种脂肪物质的存在量为组合物重量的约20％至约35％。

组合物的油相可包括一种或多种润肤剂，例如植物油、矿物油、动物油或合成油、硅油、棕榈酸异丙酯、1-癸烯聚合物(氢化)、C

在一些实施方式中，组合物的油相包含脂肪物质和润肤剂的混合物，并且在一些实施方式中，至少两种润肤剂。在一些实施方式中，脂肪物质是白矿脂和矿物油，而润肤剂是羊毛脂醇和肉豆蔻酸异丙酯。

相对于组合物的总重量，乳液的油相可以按重量计15％至45％的含量存在，优选按重量计20％至40％。

该组合物可以包含按重量计高达15％的合适的表面活性剂乳化剂。在一些实施方式中，表面活性剂乳化剂在组合物中的存在量为组合物重量的约5％至约15％。

相对于组合物的总重量，组合物可以包含按重量计0.1％至10％的一种或多种多杀菌素。在一些实施方式中，相对于组合物的总重量，组合物包含按重量计0.5％至10％的一种或多种多杀菌素。

本发明的组合物还可包含50％至95％的水或缓冲剂。在一些实施方式中，相对于组合物的总重量，组合物包含按重量计55％至80％的水或缓冲剂。在根据本发明的组合物中使用的水优选是纯净水或蒸馏水。

该组合物还可以包含惰性添加剂或添加剂的组合，例如增味剂、防腐剂、稳定剂、湿度调节器、pH调节剂、渗透压调节剂、UV-A和UV-B屏蔽剂和抗氧化剂。在一些实施方式中，多杀菌素的水包油乳液组合物不含防腐剂。

相对于组合物的总重量，这些添加剂可以按重量计0.001％至20％的浓度存在于组合物中。

在一些实施方式中，组合物是水包油乳液，其包含：(a)一种或多种多杀菌素，其量为按重量计约0.01％至约10％；和(b)油相，其包含按重量计约20％至约40％的量的一种或多种脂肪物质和按重量计约10％至约20％的量的一种或多种润肤剂；(c)按重量计约5％至约15％的量的一种或多种表面活性剂乳化剂；和(d)水。

组合物的示例性配方

在一些实施方式中，该组合物是乳膏，其中除了一种或多种多杀菌素化合物(例如，多杀菌素(spinosad))之外，该组合物包括一种或多种以下成分：水或缓冲剂、矿物油、乙酰化羊毛脂醇、硬脂醇、鲸蜡硬脂醇和丙二醇。在一些实施方式中，乳膏包含每种前述成分。

在一些实施方式中，该组合物是乳膏，其中除了一种或多种多杀菌素化合物(例如，多杀菌素)之外，该组合物包括一种或多种以下成分：水或缓冲剂、丙二醇、矿物油、乙酰化羊毛脂醇、鲸蜡醇、硬脂醇、鲸蜡硬脂醇和聚氧乙烯35蓖麻油。在一些实施方式中，乳膏包含每种前述成分。

在一些实施方式中，该组合物是洗剂，其中除了一种或多种多杀菌素化合物(例如，多杀菌素)之外，该组合物还包含一种或多种以下成分：水或缓冲剂、肉豆蔻酸异丙酯、蓖麻油、聚氧乙烯40硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇和鲸蜡酯蜡。在一些实施方式中，洗剂包括前述成分中的每一种。

在一些实施方式中，该组合物是软膏，其中除了一种或多种多杀菌素化合物(例如，多杀菌素)之外，该组合物包括一种或多种以下成分：水或缓冲剂、丙二醇、蓖麻油、乙酰化羊毛脂醇、鲸蜡醇、硬脂醇、鲸蜡硬脂醇，鲸蜡酯蜡、聚维酮K 90和硬脂酸。在一些实施方式中，软膏包括每种前述成分。

在一些实施方式中，该组合物是软膏，其中除了一种或多种多杀菌素化合物(例如，多杀菌素)之外，该组合物包括一种或多种以下成分：丙二醇、矿物油、乙酰化羊毛脂醇、硬脂醇、甘油硬脂酸酯/PEG-100硬脂酸酯、聚羟基40硬脂酸酯和硬脂酸。在一些实施方式中，软膏包括每种前述成分。

在一些实施方式中，该组合物是表1-5之一所描述的。在一些实施方式中，对于给定的组合物，表中所列成分的每个％浓度的总和为100％。

在一些实施方式中，该组合物是表1-5之一所描述的，但是用一种或多种所列的赋形剂代替了具有相同所列功能的一种或多种不同的赋形剂。

在一些实施方式中，在表1-5中的每一个中，使用0.1％的多杀菌素作为参考点，对于多杀菌素浓度的每减少w：w％增量，对配方中占主导地位的成分(即具有最大最小百分比的成分)也相同增加w：w％增量。相反，多杀菌素每增加w：w％增量，配方中占主导地位的赋形剂就会减少相同的w：w％。例如，在表1中，对于0.1％的多杀菌素每增加0.1％的多杀菌素，蒸馏水或缓冲剂相应减少0.1％。作为进一步的实施例，在表5中，多杀菌素从0.1％每增加1.0％，矿物油将相应减少1％。

表1.乳膏

表2乳膏

表3洗剂

表4软膏

表5软膏

治疗方法

本发明的一个方面是一种用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染或用于治疗与眼部蠕形螨感染有关的眼睛或皮肤疾病的方法，其包括局部施用包含一种或多种的多杀菌素化合物组合物至眼表(结膜和/或角膜)或眼睛的其他解剖结构或与眼睛相邻的区域。

不受有关潜在作用机理的理论的限制，对于现有的蠕形螨感染，作为一种治疗方法，治疗的目标通常是减少解剖部位如眼表(结膜和/或角膜)或眼睛的其他解剖结构或与眼睛相邻的区域中蠕形螨的数量，以使蠕形螨相关疾病的任何一个或多个体征得到缓解或消除。由于蠕形螨是正常皮肤微生物组的一部分，并且对蠕形螨的敏感性和与螨虫相关的免疫反应因子的水平在受试者之间可能会有所不同，因此治疗方法的目标可能是将存活的蠕形螨的数量减少到该个体的正常或健康水平(低于寄生虫过量的阈值)，或从目标的解剖部位或基因座(loci)根除所有蠕形螨。

所述组合物也可以预防性地局部施用于没有蠕形螨感染的受试者，以预防或延迟蠕形螨感染的发作。

通过一次或多次给药，与在不使用多杀菌素或其他杀螨剂的量或浓度的相应解剖部位相比，递送足以减少解剖部位中蠕形螨数量的多杀菌素化合物的量(杀螨有效量)。

将该组合物局部施用于眼表(结膜和/或角膜)或眼睛的其他解剖结构，或与眼睛相邻的区域，这可以由受试者(即自已施用)或通过另一个人进行。

在一些实施方式中，对于旨在施用于眼表的制剂，取决于其粘度，该组合物可以逐滴施用(例如用滴眼管)，或放置在眼或眼睑的角上或上下眼睑的内部。例如，可以施用一滴或多滴(例如每滴约30微升)。受试者可以眨眼以促进组合物在眼表上的分布。在一些实施方式中，将组合物局部施用于眼表。

在一些实施方式中，在即将入睡之前，将组合物局部施用于眼表或眼睛的其他解剖结构，或与眼睛相邻的区域。

在一些实施方式中，将所述组合物局部施用至与眼睛相邻的区域，其中所述区域包括眼睑的皮脂腺开口(例如，蔡氏腺，莫尔腺或睑板腺中的一种或多种)。

在一些实施方式中，将组合物局部施用至被称为毛囊皮脂单位(例如，头发、毛囊、皮脂腺)的一种或多种表皮内陷结构。

可以使用如本文所述的眼部或面部涂药器或使用如手指或指关节的身体的一部分(通过擦拭、摩擦、按摩等)局部施用组合物。

涂药器的实施例包括棉签、化妆垫、擦拭布、擦拭棒、小毛巾、海绵、纱布、粉扑、棒、刷子或梳子。在一些实施方式中，涂药器包括与目标解剖区域接触的至少一部分，并且可以由如棉花、聚酯或人造纤维的编织或非编织材料组成。涂药器可以是一次性的或可重复使用的。

可将多杀菌素组合物通过温和地应用局部施用于受试者的一个或多个解剖部位，包括受试者的眼表或眼睛的其他解剖结构，或与眼睛相邻的区域，例如眼睑、眼睑边缘、睫毛、睫毛毛囊、眉毛或眉毛毛囊，或眼睑的皮脂腺开口(例如，蔡氏腺，莫尔腺或睑板腺中的一个或多个)。可将多杀菌素组合物按摩到皮肤上。在一些实施方式中，将多杀菌素组合物留在该区域上直到下一次治疗。在其他实施方式中，施用后将多余的多杀菌素组合物被擦去或洗掉。

任选地，可以在施用多杀菌素组合物之前、期间或之后将一种或多种抗炎剂施用给受试者，这可以帮助抑制或减轻由多杀菌素组合物的一些实施方式或可能作为治疗的一部分的任何机械性刺激引起的炎症。抗炎剂也可以抑制或减少与腐烂的螨虫有关的潜在炎症。抗炎剂可以通过适合于制剂的途径施用于受试者。例如，抗炎剂可以局部施用，包括在多杀菌素组合物中或以单独的组合物局部施用。在其他实施方式中，可以将抗炎剂全身(例如，口服)施用于受试者。

可以施用的抗炎剂的实施例包括糖皮质激素或其他类固醇(例如，泼尼松，醋酸可的松，泼尼松龙，甲基泼尼松龙，地塞米松，倍他米松，曲安西龙，倍氯米松，醋酸氟可的松，醋酸脱氧皮质酮，醛固酮)，非甾体类抗炎药物(例如水杨酸酯，芳基脂肪酸，2-芳基丙酸，N-芳基邻氨基苯甲酸，昔康，昔布或磺酰苯胺)，Cox-2特异性抑制剂(例如伐地考昔，塞来昔布或罗非考昔)，来氟米特，硫代葡萄糖金，金硫代苹果酸酯，aurofin，柳氮磺胺吡啶，羟氯奎宁，米诺环素，TNF-α结合蛋白(例如英夫利昔单抗，依那西普或阿达木单抗)，阿巴西普，阿那白滞素，干扰素-β，干扰素-γ，白介素-2，过敏疫苗，抗组胺剂，抗白三烯，β-激动剂，茶碱或抗胆碱能药，抗生素，他克莫司或类维生素A。

任选地，在用多杀菌素组合物治疗之前，作为预处理或预备步骤，用诸如清洁物质之类的试剂擦洗解剖部位。可以将磨料施加到与眼睛相邻的区域，以去除皮肤、皮肤层、皮肤碎屑、微生物、睫毛、油和/或其他相关或不相关的物质。磨料可机械搅动眼睛、眼睑、睫毛和毛囊附近的组织区域，以改善组合物中的多杀菌素化合物接近蠕形螨的能力。该处理可用于搅动或移动不需要的材料，例如蠕形螨卵、幼虫或螨虫，并将其从睫毛毛囊或眼或眼睑的其他部位去除，或使它们接近多杀菌素组合物。磨料还可以通过直接杀死或破坏来消除生物体。磨料可包括任何磨料颗粒、粉末或晶体，包括但不限于以下一种或多种：氧化铝(例如氧化铝，三氧化铝，刚玉粉)、硫酸钡、氮化硼、碳酸钙、醋酸纤维素、陶瓷、钻石、硅藻土、绿宝石、乙烯/丙烯酸共聚物、纤维、石榴石、玻璃、高岭土、月桂酰赖氨酸、熔岩、氧化镁、云母、改性淀粉、尼龙、其他金属，其他聚合物，其他二氧化硅或含硅材料、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯聚丙烯、聚苯乙烯、聚四氟乙烯(PTFE)、浮石、红宝石、沙、蓝宝石、贝壳、绢云母、硅土、二氧化硅、碳化硅、碳酸氢钠、氯化钠晶体、淀粉、蚕丝、滑石粉、黄玉、沸石或聚合物颗粒。

任选地，在施用多杀菌素组合物之前、期间或之后，可以施用对蠕形螨具有活性的其他试剂。在一些实施方式中，该试剂具有抗蠕形螨的活性，例如伊维菌素，除虫菊酯，拟除虫菊酯(例如苄氯菊酯，苄呋菊脂或D-苯醚菊酯)，茶树油(TTO)，TTO组分(例如4-萜烯醇(T4O))，甲硝唑，次氯酸(HOCl)，精油(例如薄荷油或鼠尾草)，碱金属盐(例如锂盐)，硫代磷酸酯(例如，非挥发性，脂溶性硫代磷酸酯(例如，蝇毒磷)也鉴定为O，O-二乙基-O-(3-氯-4-甲基香豆素-7)硫逐磷酸酯(O,O-Diethyl O-3-chloro-4-methyl-2-oxo-2H-chromen-7-ylphosphorothioate))或甲脒(例如双甲脒，也鉴定为N，N'-[(甲基亚氨基)二甲基二炔)]二-2,4-二甲苯胺)。所述其他试剂可以作为多杀菌素组合物的一个组分施用，或以单独的组合物局部或通过另一途径施用。

可以根据多种因素来改变治疗、预防或改善寻求缓解的疾病的剂量方案。这些因素包括受试者遭受的疾病以及受试者的年龄、体重、性别、饮食和医疗状况。因此，实际采用的剂量方案可以在很大范围内变化，因此可以偏离本文阐述的剂量方案。

检测蠕形螨

本发明的方法可以进一步包括在将多杀菌素组合物施用于受试者之前确认受试者上蠕形螨的存在。几种临床体征可以使人警惕睫毛中存在蠕形螨。对这些线索的鉴别可以使人执行两种简单的检查技术之一，这些技术将确认螨虫的存在。

1.圆柱形皮屑(CD)。这是螨虫感染的最明显的临床体征和极好的指标。在裂隙灯处可以看到圆柱形皮屑，它不同于传统的前睑缘炎所见的鳞状，头屑样碎片。

2.睫毛毛囊周围皮肤的改变。靠近毛囊开口的皮肤变得膨大和隆起，可能使毛囊周围的皮肤呈现油腻、油性的外观。

3.睫毛外观的改变。在长期的感染中，睫毛变薄变脆，或者它们可能开始失去其颜色。睫毛的错误方向和减少也可能发生。

4.眼睑充血/毛细血管扩张。因为螨虫的存在与白介素和不同类型的促炎细胞因子的增加有关，所以眼睑炎症水平的增加可能是明显的，这可能导致沿眼睑边缘的血管形成增加。

5.患者病史/与其他疾病的关联。蠕形螨的患病率随年龄增长而增加，已发现患有红斑痤疮，脂溢性皮炎和其他形式的炎症性皮肤病(包括过敏性症状，如瘙痒)患者之间的关联性很强。

这些临床症状可以提醒蠕形螨过剩种群的存在。但是，除了圆柱形皮屑外，所有这些项目本身都不具有诊断性。可以通过以下两个简单步骤之一来确定螨虫的存在以及对螨虫感染程度进行分类的方法：睫毛脱毛(例如，眼睑上的两到四个不同的睫毛以及相关的碎片/圆柱形皮屑，在光学显微镜下观察复合物)和睫毛旋转(将碎片从毛囊转移到载玻片上，在光学显微镜下检查或在裂隙灯下以高放大倍率观察(25-40x)。

因此，可以通过一种或多种技术来确认蠕形螨的存在，例如直接螨虫鉴定和螨虫密度的测量，例如，睫毛根部存在圆柱形皮屑，睫毛毛囊周围的皮肤改变，睫毛的变化和睫毛采样(用光学显微镜采样脱发或用裂隙灯旋转睫毛)。除了离体脱毛和显微镜检查外，还可以使用体内共聚焦显微镜检查(Randon M等，“In vivo confocal microscopy as anovel and reliable tool for the diagnosis of Demodex eyelid infestation,”Br JOphthalmol,2015,99(3):336-341，其通过引用整体并入本文)。

分子诊断技术可用于在可能发现螨虫的区域(例如，睫毛、皮肤表面活检组织)从受试者获取的生物样品中，在遗传水平和/或蛋白质水平上检测与蠕形螨相关的分子。例如，聚合酶链反应(PCR)或免疫测定法(例如，酶联免疫吸附测定法(ELISA))可用于检测和定量来自受试者的皮肤和/或头发样品中的目标蠕形螨核酸或蛋白质分子，例如骨骼外几丁质，几丁质合酶，蔬菜芽孢杆菌的62-kDa和83-kDa抗原(例如，参见Zhao Ya-e等,“Cloning and sequence analysis of chitin synthase gene fragments of Demodexmites,”J Zheijang Univ Sci B,2012,13(10):763-768；Zhao Ya-e等,“Discriminationbetween Demodex folliculorum(Acari:Demodicidae)isolates from China and Spainbased on mitochondrial cox1 sequences,”J Zheijang Univ Sci B,2013,14(9):829-836；Hu L等“Molecular identification of four phenotypes of human Demodex inChina,”Exp Parisitol,2014,142:38-42；Li J等,“Correlation between ocularDemodex infestation and serum immunoreactivity to Bacillus proteins inpatients with facial rosacea,”Ophthalmology,2010,117(5):870-877；Szkaradkiewicz A等,“Bacillus oleronius and Demodex mite infestation inpatients with chronic blepharitis,”Clinical Microbiology and Infection,2012,18(10):1020-1025；Kasetsuwan N等,“Prevalence of ocular demodicosis amongpatients at Tertiary Care Center,Bangkok,Thailand,”Int J Ophthalmol,2017,10(1):122-127；Liu D等,“Demodex(Hair Follicle Mite)”,Molecular Detection ofHuman Parasitic Pathogens中第72章，CRC出版社，2012，第741-750页，其全部内容通过引用并入本文。

因此，在本发明方法的一些实施方式中，确认蠕形螨的存在包括在体内或离体的生物样品(例如，头发或皮肤样品)中鉴定蠕形螨，或检测与蠕形螨相关的分子(例如，几丁质、几丁质合酶、脂肪酶、与蠕形螨相关的细菌抗原(例如，芽孢杆菌抗原，如蔬菜芽孢杆菌抗原)、蠕形螨16S rDNA、蠕形螨18S rDNA)。例如，蠕形螨已被证明可以产生免疫反应性脂肪酶，可以用作检测螨虫的靶标(Jimenez-Acosta F.等，“Demodex mites contain immunoreactive lipase,”Arch Dermatol.,1989,125:1436–7)。可以提取和扩增靶DNA和RNA，并定性地用作分子条形码以用于鉴定和种间和种内分化，并定量地用于评估感染的程度。也可以使用基于基因或蛋白质微阵列的分析。来自受试者的生物样品，例如皮肤表面，头发，眼泪和外周血可以用来分析与蠕形螨感染一致的炎症标记物的存在和水平。

为了监测治疗的进展或确认其功效，可以在经过一段时间的治疗后，对源自受试者的样品进行对受试者是否存在蠕形螨或阈值量的蠕形螨的研究，以确定蠕形螨通过治疗是否已降低至正常水平或已被根除。

该检测步骤可以用于需要检测蠕形螨(例如，毛囊蠕形螨和/或皮脂蠕形螨)的任何目的，包括诊断和预后应用，例如在实验室和临床环境中。合适的样品包括可在其中发现蠕形螨的任何生物样品，包括从医学受试者(人类)或兽医受试者(非人类动物)获得的临床样品。

当样本中与蠕形螨相关的靶分子是抗体所靶向的分子时，例如蛋白质或碳水化合物(例如，几丁质，几丁质合酶，脂肪酶，蠕形螨相关的细菌抗原(例如，芽孢杆菌抗原，如蔬菜芽孢杆菌抗原)，使用利用抗体(多克隆或单克隆)或此类抗体的抗原结合片段的免疫化学技术。这些免疫化学技术可涉及放射免疫测定或其他公认的测定技术，例如酶联免疫吸附测定(ELISA)。靶分子也可以通过标准的非免疫化学技术(例如气相色谱法)进行测定。

使用基于基因的分子诊断技术检测样品中的靶核酸(例如，毛囊蠕形螨和/或皮脂蠕形螨，或蠕形螨相关的细菌核酸，或受试者免疫分子)通常涉及使样品与至少一种能够在非常严格的条件下与靶核酸，例如毛囊蠕形螨和/或皮脂蠕形螨核酸杂交的探针，并且能够检测靶核酸和探针之间的杂交。探针和靶核酸之间的杂交的检测表明样品中靶核酸的存在(并且因此存在生物体，例如毛囊蠕形螨和/或皮脂蠕形螨)。

在一些实施方式中，在使用杂交探针进行检测之前，扩增样品中存在的毛囊蠕形螨和/或皮脂蠕形螨核酸。例如，可能有利的是扩增一部分毛囊蠕形螨和/或皮脂蠕形螨核酸，然后检测扩增的毛囊蠕形螨和/或皮脂蠕形螨核酸的存在。

检测扩增产物通常包括使用标记探针，所述探针足够互补并与扩增的靶核酸序列杂交。因此，可以通过使与扩增产物互补的标记探针杂交，例如荧光标记探针，来检测扩增产物的存在、数量和/或特性。在一个实施方式中，对感兴趣的靶核酸序列，例如毛囊蠕形螨和/或皮脂蠕形螨核酸的检测包括PCR扩增和标记探针的组合使用，从而使用实时PCR测量产物。在另一个实施方式中，对感兴趣的扩增的靶核酸序列的检测包括将扩增的靶核酸转移至固相支持物，例如印迹，例如Northern印迹，以及用探针探测该印迹，例如标记探针，其与扩增的靶核酸序列互补。在又一个实施方式中，对感兴趣的扩增的靶核酸序列的检测包括标记的扩增的靶核酸与本文公开的探针的杂交，所述探针以可寻址的位置以预定阵列排列并且与扩增的靶核酸互补。

任何核酸扩增方法都可用于检测样品中蠕形螨的存在。在一个特定的非限制性实施例中，聚合酶链反应(PCR)用于扩增靶核酸序列。在其他具体的非限制性实施例中，实时PCR，逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)，实时逆转录酶-聚合酶链反应(rt RT-PCR)，连接酶链反应或转录介导扩增(TMA)用于扩增靶核酸。在一个具体的实施例中，通过实时PCR，例如实时

通常，在扩增反应中使用至少两个引物。蠕形螨核酸的扩增包括使蠕形螨核酸与一种或多种能够与蠕形螨核酸杂交并指导其扩增的引物(例如能够在非常严格的条件下与毛囊蠕形螨和/或皮脂蠕形螨杂交的引物)接触。

可以例如通过实时PCR实时检测扩增的蠕形螨核酸，以便确定生物样品中蠕形螨特异性核酸(例如，毛囊蠕形螨和/或皮脂蠕形螨)的存在和/或数量。以这种方式，可以使用对从感兴趣的蠕形螨的序列扩增的产物具有特异性的探针来检测扩增的核酸序列，例如扩增的毛囊蠕形螨和/或皮脂蠕形螨核酸序列。

荧光团是一种化学化合物，当通过暴露于特定刺激(例如限定波长的光)而激发时，发出例如不同波长(例如光的更长波长)的光(荧光)。荧光团是一大类发光化合物的一部分。发光化合物包括化学发光分子，其不需要特定波长的光来发光，而是使用化学能源。因此，化学发光分子(例如水母发光蛋白)的使用消除了对外部电磁辐射源(例如激光器)的需求。

探针包含能够与靶核酸(例如蠕形螨核酸，例如毛囊蠕形螨和/或皮脂蠕形螨核糖体核酸分子)杂交的分离的核酸。可检测的标记或报告分子可以连接到探针上。典型的标记包括放射性同位素、酶底物、辅助因子、配体、化学发光或荧光剂、半抗原和酶。

例如，在Sambrook等Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold SpringHarbor Laboratory Press(1989)和Ausubel等,Current Protocols in MolecularBiology,Greene Publishing Associates and Wiley-Intersciences(1987)中讨论了选择适合各种目的的标记的指南和用于标记的方法。

本领域普通技术人员将知道从样品中提取核酸例如RNA和/或DNA的合适方法。这样的方法将取决于例如发现蠕形螨核酸的样品的类型。例如，可以使用异硫氰酸胍提取核酸，例如通过Chomczynski等(Anal.Biochem.，1997，162：156-59)的酸性异硫氰酸胍-苯酚-氯仿提取进行一步分离。样品可以直接使用，也可以进行处理，例如添加溶剂、防腐剂、缓冲剂或其他化合物或物质。可以使用标准方法提取核酸。例如，可以使用市售试剂盒(例如

阵列可用于快速检测样品中的蠕形螨核酸。阵列是基板上可寻址位置的排列，每个地址包含核酸，例如探针(例如蠕形螨探针)。在一些实施方式中，每个地址对应于单一类型或类别的核酸，例如单个探针，尽管特定的核酸可以冗余地包含在多个地址中。“微阵列”是需要显微镜检查以检测杂交的小型化阵列。较大的“宏阵列”允许人的肉眼识别每个地址，并且在一些实施方式中，无需另外放大就可以检测到杂交信号。这些地址可能会被标记，键入单独的指南或以其他方式通过位置进行标识。

术语“阵列”的使用包括在DNA微芯片技术中发现的阵列。作为一个非限制性实施例，探针可以包含在DNA微芯片上，该DNA微芯片类似于可从Affymetrix，Inc.(SantaClara，CA)商购的

联合治疗

可以将其他试剂与多杀菌素组合物同时或连续地施用于受试者。可以在多杀菌素组合物的局部施用之前、期间或之后施用其他试剂。可以在与一种或多种多杀菌素化合物相同的组合物中施用另外的试剂，或以单独的组合物向受试者施用。如果以单独的组合物施用，则所述其他试剂可以局部施用或通过适合于所述其他试剂对受试者具有所需作用的任何局部或全身性途径施用。在一些实施方式中，所述其他试剂是局部施用的。在其他实施方式中，所述其他试剂是口服施用的。

在一些实施方式中，所述其他试剂是对蠕形螨具有杀螨活性的试剂，例如选自以下物质的一种或多种试剂：伊维菌素，除虫菊酯，拟除虫菊酯(例如苄氯菊酯，苄呋菊脂或D-苯醚菊酯)，茶树油(TTO)，TTO组分(例如4-萜烯醇(T4O))，甲硝唑，次氯酸(HOCl)，精油(例如薄荷油或鼠尾草)，碱金属盐(例如锂盐)，硫代磷酸酯(例如，非挥发性，脂溶性硫代磷酸酯(例如，蝇毒磷)或甲脒(例如双甲脒，也鉴定为N，N'-[(甲基亚氨基)二甲基二炔)]二-2,4-二甲苯胺)。

苄氯菊酯是拟除虫菊酯的成员，后者是一类合成衍生的杀虫剂。拟除虫菊酯在结构上与天然存在的除虫菊酯、除虫菊酯I和除虫菊酯II有关。合成的拟除虫菊酯包括苄氯菊酯(美国专利号4,113,968；美国专利公开号20160361297)，苄呋菊脂和醚菊酯(美国专利号3,934,023和2,348,930)，它们各自通过引用整体并入本文。拟除虫菊酯的其他实施例包括联苯菊酯，氯氟氰菊酯，氯氰菊酯，苯氰菊酯，D-苯乙菊酯(D-phenethrin)，溴氰菊酯，高氰戊菊酯，依芬普司，苯丙酸菊酯(fenprropathrin)，氟氯苯菊酯，γ-三氟氯氰菊酯，炔咪菊酯，λ-氯氰菊酯(cyalothrin)，momfluorothrin，苄氯菊酯，炔丙菊酯，除虫菊酯，哌氟菊酯，氟胺氰菊酯，以及胺菊酯。

在一些实施方式中，其他试剂是抗生素剂。在一些实施方式中，抗生素剂对在蠕形螨上或其内发现的一种或多种细菌具有抗菌活性，例如链球菌，葡萄球菌或蔬菜芽孢杆菌。在一些实施方式中，抗生素剂还具有杀螨活性，例如甲硝唑。

在一些实施方式中，其他试剂是一种或多种抗炎剂。可以包括的抗炎剂的实施例是糖皮质激素或其他类固醇(例如，泼尼松，醋酸可的松，泼尼松龙，甲基泼尼松龙，地塞米松，倍他米松，曲安西龙，倍氯米松，醋酸氟可的松，醋酸脱氧皮质酮，醛固酮)，非甾体类抗炎药物(例如水杨酸酯，芳基脂肪酸，2-芳基丙酸，N-芳基邻氨基苯甲酸，昔康，昔布或磺酰苯胺)，Cox-2特异性抑制剂(例如伐地考昔，塞来昔布或罗非考昔)，来氟米特，硫代葡萄糖金，金硫代苹果酸酯，aurofin，柳氮磺胺吡啶，羟氯奎宁，米诺环素，TNF-α结合蛋白(例如英夫利昔单抗，依那西普或阿达木单抗)，阿巴西普，阿那白滞素，干扰素-β，干扰素-γ，白介素-2，过敏疫苗，抗组胺剂，抗白三烯，β-激动剂，茶碱或抗胆碱能药，抗生素，他克莫司或类维生素A。

在一些实施方式中，将抗炎剂配制成用于局部使用。在一些实施方式中，局部抗炎剂是局部类固醇。在美国，局部类固醇根据其收缩毛细血管和引起皮肤变白的能力进行分类(I-VII类/组)，组I是最强或最有效的，而组VII则是最弱和最轻的。可以使用的局部配制的类固醇的一些实施例包括，倍他米松，双氟拉松，氟轻松醋酸酯，氟氢缩松，卤代倍他索，安西奈德，去羟米松，哈西奈德，氟替卡松，曲安西龙，氟轻松，氢可的松，莫米松，曲安西龙，阿氯米松，地奈德(denoside)和泼尼卡松。

在一些实施方式中，抗炎剂被配制成用于眼科用途。可以使用的眼科配制类固醇的一些实施例包括地塞米松，二氟泼尼酯，氟米龙，氯替泼诺(loteprednol etabonate)和利美索龙。

在一些实施方式中，其他试剂是一种或多种碱金属盐，其可以用作杀螨剂。锂盐是优选的碱金属盐。氯化锂是最优选的碱金属盐。

应该理解的是，每当提及碱金属盐或锂盐时，这些碱金属盐或锂盐都包括适合并能够发挥杀螨作用(优选对蠕形螨有作用)的碱金属或锂的任何有机以及无机盐。碱金属例如锂的有机盐包括盐，例如柠檬酸盐、碳酸盐、乳酸盐、甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、乳清酸盐等。碱金属的无机酸盐包括盐，例如氟盐、氯盐、溴盐、硫酸盐、磷酸盐等。为了本说明书的目的，无机盐可能优于有机盐。在无机盐的组中，卤化物可能优于其他无机盐。在卤化物中，氯盐是特别优选的。不管使用哪种盐(有机盐与无机盐等)，水溶性盐都是优选的，因为它们可以以蜜蜂不易消化的组合物(例如蔗糖溶液)的形式提供，可以将其喂给蜜蜂，因此大蜂螨(Varroa mite)通过该途径间接吸收了它。每当提及特定的盐时，除非另有说明，否则其始终包括其水合形式或无水形式。碱金属的组包括锂、钠、钾、铷和铯。在碱金属的组中，锂是特别优选的。

在碱金属盐中，优选可水合或无水的锂的有机或无机盐，而不是相应的例如钾盐。无机锂盐例如LiCl是有利的，因为与有机锂盐相比它们的成本更低。因此，在锂盐的组中，无机锂盐可能比有机锂盐更优选。优选的无机锂盐包括但不限于氯化锂、溴化锂、硝酸锂、硫酸锂、磷酸锂等。然而，有机锂盐可以是有利的，因为它们可以络合不止一个锂离子，并且因为与无机锂盐相比它们可以被蜜蜂更好地吸收。优选的有机锂盐包括但不限于柠檬酸锂、碳酸锂、乳酸锂、甲酸锂、乙酸锂、三氟乙酸锂、马来酸锂、酒石酸锂、乳清酸锂等。在无机锂盐的组中，卤化物优于其他无机盐。在有机锂盐的组中，乳酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐和碳酸盐可能优选于其他有机盐。在下文所述的所有方面和实施方式中优选的一种碱金属盐是水合或无水形式的氯化锂。

与其他试剂一样，碱金属盐可以通过多种方法施用。优选地，将碱金属盐局部施用于眼表(结膜和/或角膜)或眼睛的其他解剖结构，或与眼睛相邻的区域。碱金属盐可包含在多杀菌素组合物中或在多杀菌素组合物施用之前、期间或之后以单独的组合物形式施用于受试者。优选地，施用杀螨有效量。在一些实施方式中，浓度在约0.5mM至约150mM的碱金属盐(例如，LiCl)的范围内。

制品

本发明的其他方面包括可用于实施本发明方法的制品，例如与容器结合的多杀菌素组合物；眼部或面部涂药器；和试剂盒。

本发明的一个方面是一种制品，其包含本文公开的多杀菌素组合物；和以及其中容纳局部用组合物的容器。因此，可将多杀菌素组合物容纳在容器中，可将其取出以施用于受试者。容器可具有限定的内部以容纳组合物。优选地，组合物和容器内部是无菌的。容器的实施例包括可折叠或不可折叠的管、袋、小包、泡罩、条、安瓿瓶、药水瓶、瓶、罐或广口瓶。容器可以由一种或多种适合其使用的材料组成，例如铝、聚乙烯(例如，低密度聚乙烯(LDPE)、高密度聚乙烯(HDPE)或聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET))、聚丙烯或玻璃。

在一些实施方式中，容器具有如盖的封闭件，其可以被打开以取出容器内的组合物。用于在灌装过程后覆盖容器的封闭件应尽可能惰性，不会引起内容物与外部环境之间的不期望的相互作用，并应提供完整的密封。除其保护功能外，封闭件还应使多杀菌素组合物容易且安全地施用。在一些实施方式中，容器具有防拆封封闭件。在一些实施方式中，容器没有封闭件，并且通过撕裂、分离或破坏容器的材料来获得多杀菌素组合物。

在一些实施方式中，容器包括橡胶盖(由弹性体材料组成)，或盖和/或外密封件(overseal)，其可以由铝或塑料(例如，聚乙烯、聚丙烯)组成。

所述容器可包括防拆封特征，例如防拆封封闭件。例如，眼药膏通常以小号、无菌的、可折叠的管(装有例如最多约5克的组合物)提供，该管装有防拆封涂药器。该管可以包括喷嘴，该喷嘴的形状使得可以在不污染管中剩余物的情况下施用药膏。所述容器可以包括可重新盖紧的防儿童型封闭件，例如“按转”或“挤转”类型。

该容器可以是单剂量或多剂量容器。在一些实施方式中，所述容器是单剂量容器(包含单剂量用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染，或用于治疗与眼部蠕形螨感染相关的眼睛或皮肤疾病的所述组合物)。在其他实施方式中，所述容器是多剂量容器(包含多剂量用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染，或用于治疗与眼部蠕形螨感染相关的眼睛或皮肤疾病的所述组合物)。

任选地，包含本文所述的组合物的容器是耐光的并且具有紧密的密封。例如，一个或多个容器可包括本文所述的皮肤病学或眼科上可接受的多杀菌素组合物中的一种。在一些实施方式中，容器防止某些波长的光和延长的高温和/或空气进入。在一些实施方式中，容器是密封的、耐光的容器。

标签可以在容器上或与容器相关联。当将组成标签的字母，数字或其他字符粘贴、模制或蚀刻到容器本身中时，标签可以位于容器上；当标签存在于也保持容器的接受器(receptacle)或载体中时，例如作为包装插页，标签可以与容器相关联。标签可用于指示将用于特定的治疗应用的内容物。标签还可以指示内容物的使用说明，例如本文所述的方法。

本发明的另一方面是用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染，或用于治疗与眼部蠕形螨感染有关的眼睛或皮肤疾病的眼部或面部涂药器。涂药器用本文公开的多杀菌素组合物预处理或包含多杀菌素组合物。该涂药器可以由受试者或另一个人用于向眼表(结膜和/或角膜)或眼睛的其他解剖结构或与眼睛相邻的区域局部施用包含一种或多种多杀菌素化合物的组合物。在一些实施方式中，涂药器是棉签，化妆垫，擦拭布，擦拭棒，小毛巾，海绵，纱布，粉扑，棒，刷子或梳子。

本发明的另一方面是一种试剂盒，用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染，或用于治疗与眼部蠕形螨感染有关的眼睛或皮肤疾病。该试剂盒包含多杀菌素组合物和眼部或面部涂药器。该试剂盒可进一步包括本文公开的容纳所述组合物的容器。涂药器的实施例包括棉签，化妆垫，擦拭布，擦拭棒，小毛巾，海绵，纱布，粉扑，棒，刷子或梳子。

在一些实施方式中，涂药器用组合物预处理或包含组合物。以这种方式，当涂药器用组合物预处理或容纳该组合物时，该涂药器也可以用作容器。

所述试剂盒可包括一组印刷或数字说明书，用于通过局部施用所述组合物到眼表(结膜和/或角膜)或眼睛的其他解剖结构，或与眼睛邻近的区域来治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染，或用于治疗与眼部蠕形螨感染相关的眼睛或皮肤疾病。例如，该试剂盒可包括使用说明，包括以下步骤：将多杀菌素组合物局部施用于患处或其他目标区域；重复给药步骤直至足以缓解或消除与蠕形螨感染有关的一种或多种体征或症状，减少存活的蠕形螨的数量，消除所需区域的存活的蠕形螨，减少蠕形螨的再次感染，或预防或延迟蠕形螨感染的发作。

试剂盒可以包括包装材料，该包装材料被分隔开以容纳一个或多个容器，例如药水瓶、管等，每个容器包括要在本文所述的方法中使用的单独的元件之一。例如，用于包装药物产品的包装材料仅以实施例的方式示出，如美国专利号5,323,907、5,052,558和5,033,252。药物包装材料的实施例包括但不限于泡罩包装、瓶、管、泵、袋、药水瓶、不透光的密封容器、注射器、瓶以及适合所选制剂和预期给药方式和治疗的任何包装材料。

试剂盒可包括一个或多个另外的容器，每个容器具有一种或多种从商业和使用者的角度出发期望用于治疗本文所述的蠕形螨的组合物的各种材料。此类材料的非限制性实施例包括但不限于缓冲剂、稀释剂、载体、包装、容器、列出内容物和/或使用说明的药水瓶和/或管标签以及带有使用说明的包装插页。

标签可以在容器上或与容器相关联。当将组成标签的字母、数字或其他字符粘贴、模制或蚀刻到容器本身中时，标签可以位于容器上；当标签存在于也保持容器的接受器或载体中时，例如作为包装插页，标签可以与容器相关联。标签可用于指示将用于特定的治疗应用的内容物。标签还可以指示内容物的使用说明，例如本文所述的方法。

在试剂盒的一些实施方式中，多杀菌素组合物可以存在于包装或分配器装置中，该包装或分配器装置可以包含一种或多种含有本文公开的多杀菌素组合物的单位剂型。包装可以例如包含金属或塑料箔，例如泡罩包装。包装或分配器装置可能随附给药说明。包装或分配器还可以随附有与容器相关联的通知，该通知为管理药品生产、使用或销售的政府机构规定的形式，该通知反映了该机构对人或兽医施用的药物形式的认可。例如，此类通知可以是美国食品药品监督管理局批准的处方药标签，也可以是批准的产品插页。也可以制备在相容的药物载体中配制的包含本文提供的多杀菌素组合物的组合物，将其放置在适当的容器中，并标记用于治疗指定的疾病。

定义

如本文所用，术语“扩增”是指增加靶核酸分子的拷贝数。所得的扩增产物称为“扩增子”。核酸分子(例如DNA或RNA分子)的扩增是指使用增加样品中核酸分子的拷贝数的技术，例如蠕形螨(例如毛囊蠕形螨或皮脂腺蠕形螨)核酸的拷贝数。扩增的一个实施例是聚合酶链反应(PCR)，其中样品在允许引物与样品中核酸模板杂交的条件下与一对寡核苷酸引物接触。引物在合适的条件下延伸，与模板解离，再退火，延伸，并解离以扩增核酸的拷贝数。此循环可以重复。扩增产物可以通过诸如电泳、限制性核酸内切酶切割模式、寡核苷酸杂交或连接和/或核酸测序的技术来表征。

引物对可用于例如通过PCR、实时PCR或本领域已知的其他核酸扩增方法扩增靶核酸序列。“上游”或“正向”引物是相对于核酸序列上参考点的引物5'。“下游”或“反向”引物是是相对于核酸序列上参考点的引物3'。通常，扩增反应中至少包含一个正向引物和一个反向引物。PCR引物对可以例如通过使用旨在用于该目的(例如Primer(引物))的计算机程序(版本0.5，

制备和使用引物的方法描述于例如Sambrook等(1989)Molecular Cloning:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor,N.Y.；Ausubel等(1987)Current Protocols inMolecular Biology,Greene Publ.Assoc.&Wiley-Intersciences。在一个实施例中，引物包括标记。

体外扩增技术的其他实施例包括定量实时PCR；逆转录酶PCR(RT-PCR)；实时PCR；实时逆转录酶PCR(rt RT-PCR)；巢式PCR；链置换扩增(参见美国专利号5,744,311)；无转录等温扩增(参见美国专利号6,033,881，修复链反应扩增(参见WO 90/01069)；连接酶链反应扩增(参见欧洲专利出版物EP-A-320 308)；缺口填充连接酶链反应扩增(gap fillingligase chain reaction amplification)(参见美国专利号5,427,930)；偶联的连接酶检测和PCR(参见美国专利号6,027,889)；以及NASBA

如本文所用，术语“检测”是指确定是否存在试剂(例如信号、特定的核苷酸、氨基酸、核酸分子和/或生物)，例如，蠕形螨，如毛囊蠕形螨和/或皮脂腺蠕形螨。在一些实施例中，这可以进一步包括量化。例如，探针的使用允许荧光团的检测，例如来自荧光团的信号的检测，其可以用于确定是否存在与蠕形螨(毛囊蠕形螨和/或皮脂腺蠕形螨)的核酸相对应的核酸。毛囊蠕形螨和/或皮脂腺蠕形螨的核酸分子的检测表明样品中存在毛囊蠕形螨和/或皮脂腺蠕形螨，例如，毛囊蠕形螨和/或皮脂腺蠕形螨感染。

术语“杀螨(acaricidal)”和“杀螨(miticidal)”在本文中可互换使用，是指在任何生命阶段杀死蠕形螨属的螨虫的能力，或以导致蠕形螨种群的总体减少的任何方式干扰蠕形螨生长或生命周期的能力。在一些实施方式中，蠕形螨属物种是毛囊蠕形螨、皮脂腺蠕形螨或两者。例如，术语“杀螨”包括抑制或消除害虫的繁殖能力，以及抑制害虫从一种形式发展成更成熟的形式，例如，各种幼虫形式之间的过渡或从幼虫到第一若虫或从第一若虫到若虫，或从若虫到成虫的过渡。此外，术语“杀螨”旨在包括螨虫生命周期的所有阶段。因此，例如，该术语包括杀幼虫、杀卵和杀成虫作用。

如本文所用，术语“杀螨有效”是指与不存在多杀菌素或其他杀螨剂的量或浓度的相应解剖部位相比，足以降低解剖部位上蠕形螨数量的多杀菌素或其他杀螨剂的量或浓度。

如本文所用，术语“治疗(treatment)”，“治疗(treating)”及其语法变化是指疾病、病症或其至少一种体征或症状的改善、预防或逆转。在一些实施方式中，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是指改善、预防或逆转与所治疗的疾病或病症有关的至少一种可测量的身体参数，不一定在受试者体内或由受试者辨别。在又一个实施方式中，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是指抑制或减慢疾病或病症的进展，无论是在物理上例如使可辨认的体征或症状稳定，还是在生理上例如使物理参数稳定，或两者兼而有之。在又一个实施方式中，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是指延迟疾病或病症的发作。

示例性实施方式

1.一种用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染，或用于治疗与眼部蠕形螨感染相关的眼睛或皮肤的疾病的方法，所述方法包括将包含一种或多种多杀菌素化合物的组合物局部施用至眼表(结膜和/或角膜)或眼睛的其他解剖结构，或与眼睛邻近的区域。

2.根据实施方式1所述的方法，其中，所述受试者患有所述疾病，并且所述疾病是蠕形螨引起的睑缘炎(也称为蠕形螨睑缘炎)、蠕形螨引起的眼部红斑痤疮、蠕形螨引起的面部红斑痤疮、干眼症、睑板腺功能障碍、睑板腺囊肿、睑腺炎、滤泡性炎症、非特异性面部皮炎、浸润性角膜结膜炎，结节性瘢痕沉积或角膜新血管形成中的一种或多种。

3.根据实施方式1或2所述的方法，其中所述治疗减轻了选自以下的受试者的一种或多种体征或症状：瘙痒、灼热、异物感、眼睑边缘结痂和发红、视力模糊、圆柱形皮屑、睫毛错位、睫毛倒睫、睫毛脱落、眼睑边缘炎症、睑板腺功能障碍、睑结膜炎和睑缘角膜炎。

4.根据实施方式1至3中任一项所述的方法，其中将所述组合物局部施用至与眼睛相邻的区域，其中所述区域包括眼睑、眼睑边缘、睫毛、睫毛毛囊、眉毛或眉毛毛囊中的一种或多种。

5.根据实施方式1至3中任一项所述的方法，其中将所述组合物局部施用至与眼睛相邻的区域，其中所述区域包括眼睑的皮脂腺开口(例如，蔡氏腺，莫尔腺或睑板腺中的一个或多个)。

6.根据任何前述实施方式所述的方法，其中所述蠕形螨包括毛囊蠕形螨，皮脂腺蠕形螨或两者

7.根据前述任何实施方式所述的方法，其中所述受试者在所述施用时是有症状的。

8.根据实施方式1至6中任一项所述的方法，其中所述受试者在所述施用时是无症状的。

9.根据任何前述实施方式所述的方法，其还包括在所述施用之前确认蠕形螨的存在。

10.根据实施方式9所述的方法，其中，所述确认包括鉴定体内或在离体生物样品(例如，毛发或皮肤样品)中的蠕形螨，或检测与蠕形螨的存在相关的分子(例如，几丁质、几丁质合酶、脂肪酶，芽孢杆菌抗原)。

11.根据任何前述实施方式所述的方法，其中有效量的所述组合物被局部施用以减少在眼睛以及邻近的皮肤和头发上的存活的蠕形螨的数量。

12.根据任何前述实施方式所述的方法，其中有效量的所述组合物被局部施用以消除来自眼睛以及邻近的皮肤和头发的存活的蠕形螨的存在。

13.根据任何前述实施方式所述的方法，其中所述一种或多种多杀菌素化合物具有式(I)的化学结构或其药学上可接受的盐：

其中R

其中R

其中R

其中R

其中R

14.根据任何前述实施方式所述的方法，其中所述一种或多种多杀菌素化合物选自多杀菌素A，多杀菌素B，多杀菌素C，多杀菌素D，多杀菌素E，多杀菌素F，多杀菌素G，多杀菌素H，多杀菌素I，多杀菌素J，多杀菌素K，多杀菌素L，多杀菌素M，多杀菌素N，多杀菌素O，多杀菌素P，多杀菌素R，多杀菌素S，多杀菌素T，多杀菌素U，多杀菌素V，多杀菌素W，多杀菌素Y，多杀菌素N-去甲基D，多杀菌素N-去甲基K，多杀菌素N，N-二甲基K，多杀菌素N-去甲基P，多杀菌素2'-H A，多杀菌素2'-H D，多杀菌素2'-O-乙基A，多杀菌素3'-H A，多杀菌素3'-O-乙基A，多杀菌素3'-O-n-丙基A，多杀菌素3'-O-n-丁基A，多杀菌素3'-O-烯丙基A，多杀菌素-O-CH

15.根据任何前述实施方式所述的方法，其中所述一种或多种多杀菌素化合物包含多杀菌素A和多杀菌素D的组合。

16.根据实施方式15所述的方法，其中所述多杀菌素A和多杀菌素D以约18：2至约16：4的多杀菌素A与多杀菌素D的比例存在于所述组合物中。

17.根据实施方式15所述的方法，其中所述多杀菌素A和多杀菌素D以约17：3多杀菌素A与多杀菌素D的比例存在于所述组合物中。

18.根据任何前述实施方式所述的方法，其中所述组合物不包含除所述一种或多种多杀菌素化合物之外的活性剂。

19.根据实施方式1至18中任一项所述的方法，其中所述组合物不包含对所述蠕形螨有杀螨活性的其他试剂。

20.根据实施方式1至17中任一项所述的方法，其中所述方法不包括将一种或多种多杀菌素化合物以外的任何活性剂局部施用至所述眼表(结膜和/或角膜)或眼睛的其他解剖结构，或与眼睛相邻的区域。

21.根据实施方式1至17中任一项所述的方法，其中该方法不包括将除了一种或多种多杀菌素化合物之外的对蠕形螨具有杀螨活性的试剂局部施用至眼表(结膜和/或角膜)或眼睛的其他解剖结构，或与眼睛相邻的区域。

22.根据实施方式1至17中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含对所述蠕形螨具有杀螨活性的其他试剂。

23.根据实施方式22所述的方法，其中所述对蠕形螨具有杀螨活性的其他试剂是选自以下物质中的一种或多种试剂：伊维菌素，除虫菊酯，拟除虫菊酯(例如苄氯菊酯，苄呋菊脂或D-苯醚菊酯)，茶树油(TTO)，TTO组分(例如4-萜烯醇(T4O))，甲硝唑，次氯酸(HOCl)，精油(例如薄荷油或鼠尾草)，碱金属盐(例如锂盐)，硫代磷酸酯(例如，非挥发性，脂溶性硫代磷酸酯(例如，蝇毒磷)或甲脒(例如，双甲脒)。

24.根据实施方式1至17中任一项所述的方法，其进一步包括在局部施用具有一种或多种多杀菌素化合物的所述组合物之前、期间或之后，施用对所述蠕形螨具有杀螨活性的其他试剂，其中所述其他试剂是以单独的组合物形式施用。

25.根据实施方式24所述的方法，其中所述对蠕形螨具有杀螨活性的其他试剂是选自以下物质的一种或多种试剂：伊维菌素，除虫菊酯，拟除虫菊酯(例如苄氯菊酯，苄呋菊脂或D-苯醚菊酯)，茶树油(TTO)，TTO组分(例如4-萜烯醇(T4O))，甲硝唑，次氯酸(HOCl)，精油(例如薄荷油或鼠尾草)，碱金属盐(例如锂盐)，硫代磷酸酯(例如，非挥发性，脂溶性硫代磷酸酯(例如，蝇毒磷)或甲脒(例如，双甲脒)。

26.根据任何前述实施方式所述的方法，还包括向所述受试者施用抗生素剂，其中所述抗生素剂与所述一种或多种多杀菌素化合物一起存在于所述组合物中或在单独的组合物中。

27.根据实施方式26所述的方法，其中所述抗生素剂对链球菌、葡萄球菌或蔬菜芽孢杆菌中的一种或多种具有抗菌活性。

28.根据任何前述实施方式所述的方法，进一步包括向所述受试者施用抗炎剂，其中所述抗炎剂与所述一种或多种多杀菌素化合物一起存在于所述组合物中或在单独的组合物中。

29.根据实施方式28所述的方法，其中所述抗炎剂选自糖皮质激素或其他类固醇(例如，泼尼松，醋酸可的松，泼尼松龙，甲基泼尼松龙，地塞米松，倍他米松，曲安西龙，倍氯米松，醋酸氟可的松，醋酸脱氧皮质酮，醛固酮)，非甾体类抗炎药物(例如水杨酸酯，芳基脂肪酸，2-芳基丙酸，N-芳基邻氨基苯甲酸，昔康，昔布或磺酰苯胺)，Cox-2特异性抑制剂(例如伐地考昔，塞来昔布或罗非考昔)，来氟米特，硫代葡萄糖金，金硫代苹果酸酯，aurofin，柳氮磺胺吡啶，羟氯奎宁，米诺环素，TNF-α结合蛋白(例如英夫利昔单抗，依那西普或阿达木单抗)，阿巴西普，阿那白滞素，干扰素-β，干扰素-γ，白介素-2，过敏疫苗，抗组胺剂，抗白三烯，β-激动剂，茶碱或抗胆碱能药，抗生素，他克莫司或类维生素A。

30.根据任何前述实施方式所述的方法，其中所述组合物是溶液、悬浮液、药膏、喷雾剂、洗剂、凝胶、糊剂、香脂、泡沫、摩丝、磨砂膏或清洁剂(例如洗发剂或肥皂)、乳膏或软膏。

31.根据任何前述实施方式所述的方法，其中所述组合物使用涂药器(例如，棉签，化妆垫，擦拭布，擦拭棒，小毛巾，海绵，纱布，粉扑，棒，刷子或梳子)局部施用。

32.根据任何前述实施方式所述的方法，其中所述组合物是化妆品。

33.根据实施方式32所述的方法，其中所述化妆品是睫毛膏、眼影或眼线膏。

34.根据任何前述实施方式所述的方法，其中所述组合物还包含一种或多种赋形剂，其选自矿脂、矿物油、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸甲酯、羊毛脂、氯丁醇、水、羊毛脂醇、硫代硫酸钠、磷酸二氢钠、醋酸苯汞、甘露醇、氯化锌、磷酸钠、乙酸钾、羟丙甲纤维素、硫酸庆大霉素、硼酸、氢氧化钠、羊毛脂油、卡波姆均聚物A或B型(烯丙基季戊四醇交联)或苯扎氯铵。

35.根据实施方式1至34中任一项所述的方法，其中所述组合物是乳液，并且还包含一种或多种选自水、氢氧化钠、聚山梨醇酯80、甘油、蓖麻油、卡波姆共聚物A型、乙酸钠、硼酸、山梨酸、乙二胺四乙酸二钠或硅油或硅酮聚合物凝胶(例如，二甲硅油或环甲硅油)的赋形剂。

36.根据任何前述实施方式所述的方法，其中所述组合物还包含胶凝剂(例如树胶、琼脂、角叉菜胶、矿脂或纤维素聚合物(例如羟乙基纤维素或羟甲基纤维素))。

37.根据任何前述实施方式所述的方法，其还包含溶剂、助溶剂、缓和剂、润肤剂、防腐剂、抗氧化剂、保湿剂或增溶剂中的一种或多种。

38.根据任何前述实施方式所述的方法，其中组合物包含0.1％至10％(w/v)的一种或多种多杀菌素化合物。

39.根据任何前述实施方式所述的方法，其中在施用之前，从具有或不具有封闭件(例如，盖)的容器中取出并分配组合物。

40.根据实施方式39所述的方法，其中所述容器是可折叠或不可折叠的管、袋、小包、泡罩、条、安瓿瓶、药水瓶、瓶、罐或广口瓶。

41.根据实施方式39或40所述的方法，其中，所述容器包括选自铝、聚乙烯(例如，低密度聚乙烯(LDPE)、高密度聚乙烯(HDPE)或聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET))、聚丙烯或玻璃中的一种或多种材料。

42.根据实施方式39至41中任一项所述的方法，其中所述容器是单剂量容器(包含单剂量用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染或用于治疗与眼部蠕形螨感染有关的眼睛或皮肤疾病的所述组合物)。

43.根据实施方式39至41中任一项所述的方法，其中所述容器是多剂量容器(包含多剂量用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染或用于治疗与眼部蠕形螨感染有关的眼睛或皮肤疾病的所述组合物)。

44.根据实施方式39至43中任一项所述的方法，其中所述容器具有容纳所述组合物的内部，并且其中所述容器内部和所述组合物是无菌的。

45.根据任何前述实施方式所述的方法，其中所述组合物是表1，表2，表3，表4或表5之一中的组合物。

46.一种局部用组合物，其包含0.1％至10％(w/v)的一种或多种多杀菌素化合物。

47.根据实施方式46所述的局部用组合物，其中所述一种或多种多杀菌素化合物具有式(I)的化学结构或其药学上可接受的盐：

其中R

其中R

其中R

其中R

其中R

48.根据实施方式46或47所述的局部用组合物，其中所述一种或多种多杀菌素化合物包含多杀菌素A和多杀菌素D的组合。

49.根据实施方式48所述的局部用组合物，其中所述多杀菌素A和多杀菌素D以约18：2至约16：4的多杀菌素A与多杀菌素D的比例存在于所述组合物中。

50.根据实施方式48所述的局部用组合物，其中所述多杀菌素A和多杀菌素D以约17：3的多杀菌素A与多杀菌素D的比例存在于所述组合物中。

51.根据实施方式46至50中任一项所述的局部用组合物，其中所述组合物除一种或多种多杀菌素化合物外不包含活性剂。

52.根据实施方式46至50中任一项所述的局部用组合物，其中所述组合物不包含对蠕形螨具有杀螨活性的其他试剂。

53.根据实施方式46至50中任一项所述的局部用组合物，其中所述组合物还包含对蠕形螨具有杀螨活性的其他试剂。

54.根据实施方式53所述的局部用组合物，其中所述对蠕形螨具有杀螨活性的其他试剂是选自以下物质的一种或多种试剂：伊维菌素，除虫菊酯，拟除虫菊酯(例如苄氯菊酯，苄呋菊脂或D-苯醚菊酯)，茶树油(TTO)，TTO组分(例如4-萜烯醇(T4O))，甲硝唑，次氯酸(HOCl)，精油(例如薄荷油或鼠尾草)，碱金属盐(例如锂盐)，硫代磷酸酯(例如，非挥发性，脂溶性硫代磷酸酯(例如，蝇毒磷)或甲脒(例如，双甲脒)。

55.根据实施方式46至54中任一项所述的局部用组合物，其还包含抗生素剂。

56.根据实施方式55所述的局部用组合物，其中所述抗生素剂对链球菌，葡萄球菌或蔬菜芽孢杆菌中的一种或多种具有抗菌活性。

57.根据实施方式46至56中任一项所述的局部用组合物，其进一步包含抗炎剂。

58.根据实施方式57所述的局部用组合物，其中所述抗炎剂选自糖皮质激素或其他类固醇(例如，泼尼松，醋酸可的松，泼尼松龙，甲基泼尼松龙，地塞米松，倍他米松，曲安西龙，倍氯米松，醋酸氟可的松，醋酸脱氧皮质酮，醛固酮)，非甾体类抗炎药物(例如水杨酸酯，芳基脂肪酸，2-芳基丙酸，N-芳基邻氨基苯甲酸，昔康，昔布或磺酰苯胺)，Cox-2特异性抑制剂(例如伐地考昔，塞来昔布或罗非考昔)，来氟米特，硫代葡萄糖金，金硫代苹果酸酯，aurofin，柳氮磺胺吡啶，羟氯奎宁，米诺环素，TNF-α结合蛋白(例如英夫利昔单抗，依那西普或阿达木单抗)，阿巴西普，阿那白滞素，干扰素-β，干扰素-γ，白介素-2，过敏疫苗，抗组胺剂，抗白三烯，β-激动剂，茶碱或抗胆碱能药，抗生素，他克莫司或类维生素A。

59.根据实施方式46至58中任一项所述的局部用组合物，其中所述组合物是溶液、悬浮液、药膏、喷雾剂、洗剂、凝胶、糊剂、香脂、泡沫、摩丝、磨砂膏或清洁剂(例如洗发剂或肥皂)、乳膏或软膏。

60.根据实施方式46至59中任一项所述的局部用组合物，其中所述组合物是化妆品。

61.根据实施方式60所述的局部用组合物，其中所述组合物是睫毛膏，眼影或眼线膏。

62.根据实施方式46至61中任一项所述的局部用用组合物，其中所述组合物是软膏，并且还包一种或多种含选自矿脂、矿物油、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸甲酯、羊毛脂、氯丁醇、水、羊毛脂醇、硫代硫酸钠、磷酸二氢钠、醋酸苯汞、甘露醇、氯化锌、磷酸钠、乙酸钾、羟丙甲纤维素、硫酸庆大霉素、硼酸、氢氧化钠、羊毛脂油、卡波姆均聚物b型(烯丙基季戊四醇交联)或苯扎氯铵的赋形剂。

63.根据实施方式46至61中任一项所述的局部用组合物，其中所述组合物是乳液，并且还包含一种或多种选自水、氢氧化钠、聚山梨醇酯80、甘油、蓖麻油、卡波姆共聚物A型、乙酸钠、硼酸、山梨酸、乙二胺四乙酸二钠、卡波姆共聚物a型(烯丙基季戊四醇交联)或硅油或硅酮聚合物凝胶(例如二甲硅油或环甲硅油)的赋形剂。

64.根据实施方式46至63中任一项所述的局部用组合物，其中所述组合物还包含胶凝剂(例如树胶、琼脂、角叉菜胶、矿脂或纤维素聚合物(例如羟乙基纤维素或羟甲基纤维素))。

65.根据实施方式46至64中任一项所述的局部用组合物，其还包含溶剂、助溶剂、缓和剂、润肤剂、防腐剂、抗氧化剂、保湿剂或增溶剂中的一种或多种。

66.根据实施方式46至64中任一项所述的局部用组合物，其中所述组合物是表1，表2，表3，表4或表5之一中的组合物。

67.一种制品，其包含实施方式46至66中任一项所述的局部用组合物；以及其中容纳有所述局部用组合物的容器。

68.根据实施方式67所述的制品，其中所述容器具有封闭件(例如，盖)，所述封闭件可以被打开以取出所述容器内的组合物。

69.根据实施方式67或68所述的制品，其中所述容器是可折叠或不可折叠的管、袋、小包、泡罩、条、安瓿瓶、药水瓶、瓶、罐或广口瓶。

70.根据实施方式67至69中任一项所述的制品，其中所述容器包括选自铝、聚乙烯(例如，低密度聚乙烯(LDPE)、高密度聚乙烯(HDPE)或聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET))、聚丙烯或玻璃中的一种或多种材料。

71.根据实施方式67至70中任一项所述的制品，其中所述容器是单剂量容器(包含单剂量用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染或用于治疗与眼部蠕形螨感染有关的眼睛或皮肤疾病的所述组合物)。

72.根据实施方式67至70中任一项所述的制品，其中所述容器是多剂量容器(包含多剂量用于治疗人或动物受试者的眼睛的眼部蠕形螨感染或用于治疗与眼部蠕形螨感染有关的眼睛或皮肤疾病的所述组合物)。

73.根据实施方式67至72中任一项所述的制品，其中所述容器具有容纳所述组合物的内部，并且其中所述容器内部和所述组合物是无菌的。

74.一种用实施方式46至66中任一项所述的局部用组合物预处理或包含实施方式46至66中任一项所述的局部用组合物的眼部或面部涂药器。

75.根据实施方式74所述的眼部或面部涂药器，其中，所述涂药器是棉签，化妆垫，擦拭布，擦拭棒，小毛巾，海绵，纱布，粉扑，棒，刷子或梳子。

76.一种试剂盒，其包含实施方式46至66中任一项所述的局部用组合物；和眼部或面部涂药器。

77.根据实施方式76所述的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包括容纳所述组合物的容器。

78.根据实施方式76所述的试剂盒，其中所述涂药器用所述组合物预处理或包含所述组合物。

79.根据实施方式76至78中任一项所述的试剂盒，其中，所述涂药器是棉签，化妆垫，擦拭布，擦拭棒，小毛巾，海绵，纱布，粉扑，棒，刷子或梳子。

80.根据实施方式76至79中任一项所述的试剂盒，其还包括通过将组合物局部施用于眼表(结膜和/或角膜)或眼睛的其他解剖结构，或与眼睛相邻的区域用于治疗人或动物受试者的眼睛的蠕形螨感染，或用于治疗与眼部蠕形螨感染有关的眼睛或皮肤疾病的说明书。

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