人体毛囊蠕形螨、皮脂蠕形螨和山羊蠕形螨的ISSR-PCR与遗传分析

摘要

目的：以山羊蠕形螨的基因组为模板,对山羊蠕形螨进行简单重复序列锚定PCR(Inter-simple sequence repeat polymerase chain reaction ISSR-PCR)的反应体系优化并筛选引物,用梯度PCR方法筛选相应引物的最佳退火温度,选出多态性好、稳定性高的引物。以人体毛囊蠕形螨、皮脂蠕形螨和山羊蠕形螨基因组为模板,进行ISSR-PCR扩增,得出三种蠕形螨的ISSR遗传图谱,为将来开展蠕形螨分子生物学研究和分子遗传学分类奠定基础。
　　方法：用取螨器法收集人体蠕形螨,从山羊皮肤结节中获取山羊蠕形螨。用显微操作技术对各种蠕形螨标本进行清洗、分离,然后研磨粉碎。用微量样品基因组DNA提取试剂盒,分别提取人体毛囊蠕形螨和皮质蠕形螨的基因组。用Ezup柱式动物基因组试剂盒,提取山羊蠕形螨DNA,并以此为模板;以正交实验法优化的ISSR-PCR反应体系;然后从加拿大British Columbia大学设计的UBC Primer Set9组(包括90条引物)中选出6条多态性好、稳定性高的引物,并用梯度PCR筛选每条引物的最佳退火温度。以三种蠕形螨的基因组为模板,进行ISSR-PCR扩增,用琼脂凝胶电泳检测扩增结果,ZF紫外凝胶显像仪显像,然后对扩增的图谱进行统计学分析。
　　结果：改进了预处理蠕形螨标本的显微操作方法,采集到足量的毛囊蠕形螨、皮脂蠕形螨和山羊蠕形螨,分别成功提取了三种蠕形螨的基因组DNA。建立山羊蠕形螨ISSR-PCR最佳反应体系之后,筛选出6条引物,分别对三种蠕形螨基因组进行ISSR-PCR扩增,并对其电泳图谱进行遗传分析。共扩增出106条带,其DNA片段长度多为250～2000 bp,其中多态性条带83个,多态性条带百分率为78%,皮脂蠕形螨和山羊蠕形螨、皮脂蠕形螨与毛囊蠕形螨、毛囊蠕形螨与山羊蠕形螨的遗传相似系数(GS)分别为:0.335、0.298、0.208;其遗传距离(GD=1-GS)为:0.665、0.702、0.792。说明:皮脂蠕形螨和山羊蠕形螨亲缘关系最近,皮脂蠕形螨与毛囊蠕形螨次之,毛囊蠕形螨与山羊蠕形螨的亲缘关系最远。
　　结论：分别成功提取了三种蠕形螨基因组DNA。在建立最佳反应体系和筛选引物的基础上,用ISSR-PCR方法,分析了三种蠕形螨的亲缘关系。该研究方法和结果为开展蠕形螨分子生物学研究和分子遗传学分类奠定基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:说明

前言

材料与方法

实验结果

讨论

小结

附图

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文

答辩情况表