一种用于构建先天性黑蒙症克隆猪核供体细胞的CRISPR/Cas9系统及其应用

摘要

本发明公开了一种用于构建先天性黑蒙症克隆猪核供体细胞的CRISPR/Cas9系统及其应用。猪RPE65基因的gRNA，序列如SEQ ID NO.23所示。一种用于猪RPE65基因编辑的CRISPR/Cas9系统，包含本发明所述的gRNA表达载体和Cas9表达载体。所述的Cas9表达载体为pU6gRNA eEF1a‑mNLS‑hSpCas9‑EGFP‑PURO。采用本发明筛选的gRNA联合改造的Cas9高效表达载体进行基因编辑,编辑效率比原载体提高100％以上。本发明为先天性黑蒙症猪模型的制备奠定了坚实的基础，对于针对该病的治疗及病理研究具有重大应用价值。