一种注射用血管生成抑肽冻干制剂及其冻干方法

摘要

本发明属于冻干制剂技术领域，公开了一种注射用血管生成抑肽冻干制剂及其冻干方法，所述注射用血管生成抑肽冻干制剂按照质量份数计，由血管生成抑肽12‑18份、甲氧基聚乙二醇3‑5份、聚己内酯3‑5份、活性制剂6‑7份、抗氧化剂2‑3份、乙醇6‑10份、低温粘结剂1‑3份、磷酸盐缓冲液5‑7份、pH调节剂1‑4份、崩解剂1‑2份、注射用水11‑17份组成。本发明充分考虑处方中各味药物的活性成分，引入大孔吸附树脂分离手段以及回流提取的技术对处方中有效成分进行精制，使得有效成分得到富集。本发明将活性成分加入冻干制剂中，能够保证血管生成抑肽的活性，更好发挥功效。凝冻后的低温冷冻能够改善冻干制剂的性状。

说明书

技术领域

本发明属于冻干制剂技术领域，尤其涉及一种注射用血管生成抑肽冻干制剂及其冻干方法。

背景技术

目前，血管生成抑肽(FpAT)是具抗血管生成的内源性小肽物质，属于多肽类药物，是一种高效、低毒副作用的血管生成抑制剂，能够抑制肿瘤的生长和扩散。血管生成抑制剂是阻断血管生成的药物，血管生成指的是新血管的形成，这个过程是生长和愈合的正常部分，它在多种疾病中也起着作用，包括癌症在内。

真空冷冻干燥技术是一种将水溶液在低温下冻结，而后在真空状态下将其中的水分不经过液体状态而直接升华干燥的技术，其干燥后的物质具有物理和化学性质基本不变，形状基本不变，有效成分损失小，复水性好，密封保存周期长。真空冷冻干燥技术为稳定性差的多肽类药物提供了稳定的保存方法。但是目前暂无注射用血管生成抑肽冻干制剂的制备方法，按照冻干制剂的制备方法进行制备的注射用血管生成抑肽冻干制剂发生不同程度的失活，影响血管生成抑肽的效果。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前暂无注射用血管生成抑肽冻干制剂的制备方法，按照冻干制剂的制备方法进行制备的注射用血管生成抑肽冻干制剂发生不同程度的失活，影响血管生成抑肽的效果。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种注射用血管生成抑肽冻干制剂及其冻干方法。

本发明是这样实现的，一种注射用血管生成抑肽冻干制剂的冻干方法，所述注射用血管生成抑肽冻干制剂的冻干方法包括以下步骤：

步骤一，将甲氧基聚乙二醇、聚己内酯溶于质量浓度为55-70％的乙醇溶液中，搅拌均匀，室温静置1-2h得到可降解溶剂；同时分别将西洋参、党参、桔梗、黄芪、蓝莓叶、葡萄籽洗净；

步骤二，进行西洋参提取物的制备：将西洋参进行切片，加水浸泡，于90-110℃下煎煮1-3h，过滤得滤液，滤渣备用；在滤渣中加水，重读煎煮、过滤操作一次，合并两次滤液；对滤液进行减压浓缩得到浸膏，浸膏经干燥、粉碎、过筛，得到西洋参提取物；

步骤三，进行黄芪提取物的制备：将黄芪置于冷水中浸泡8-10h，所述冷水没过药材；使用浸泡液直接进行药材煎煮，煎煮三次，过滤，合并三次滤液；将滤液静置20min，去除底部沉淀；将滤液进行减压浓缩，得到膏状黄芪液；将膏状黄芪液干燥至含水量＜5％，粉碎，过100目筛，得到黄芪提取物；

步骤四，进行蓝莓叶提取物的制备：将蓝莓叶进行烘干，粉碎，得到蓝莓叶碎屑；将蓝莓叶碎屑与质量浓度为75％的乙醇混合，浸泡1-2h，得到混合液；将混合液置于回流提取装置中进行回流提取，得到提取液；去除提取液中的乙醇，得到蓝莓叶提取物；

步骤五，进行葡萄籽提取物的制备：将葡萄籽表面水分晾干，研磨得到葡萄籽粉末；将葡萄籽粉末分散至乙醇溶液中，使用HP-20大孔吸附树脂进行吸附；用5倍柱体积的水洗脱，弃去水洗液；用5倍柱体积的质量浓度70％的乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱部分；回收乙醇，减压浓缩，干燥，得到葡萄籽提取物；

步骤六，分别进行党参提取物和桔梗提取物的制备，然后将制备得到的西洋参提取物、黄芪提取物、蓝莓叶提取物、葡萄籽提取物、党参提取物和桔梗提取物混合，得到活性制剂；

步骤七，在步骤一制备得到的可降解溶剂中加入低温粘结剂，在搅拌中加入血管生成抑肽，得到悬浊液；除去悬浊液中的溶剂，对悬浊液进行凝冻，得到胶状物；将胶状物进行低温冷冻，得到初次冻干物；将初次冻干物与活性制剂、抗氧化剂、低温粘结剂、磷酸盐缓冲液、崩解剂、注射用水进行混合，得到混合物；

步骤八，使用pH调节剂调节混合物的pH值为6.5-7.2，得到液态物质；对液态物质进行凝冻，并对凝冻产物进行充分搅拌，后进行速冻，得到冻干物，对冻干物进行干燥脱水，即可得到所述注射用血管生成抑肽冻干制剂。

进一步，步骤六中，所述党参提取物的制备方法，包括：

将党参置于烘干箱内，设定烘干温度为90-120℃，进行15-25min烘干，对烘干后的党参进行粉碎，研磨，得到党参提取物。

进一步，步骤六中，所述桔梗提取物的制备方法，包括：

将桔梗进行充分浸泡后置于打浆机中进行打浆，将桔梗浆液进行过滤，对滤液进行加热浓缩，超声提取即可得到桔梗提取物。

进一步，所述超声频率35-45Hz，超声时间40-50min，提取温度35-55℃。

进一步，步骤五中，所述加入乙醇的料液比为1：(7-9)，乙醇的体积分数为40-60％。

进一步，步骤七中，所述低温冷冻的温度为-50℃。

本发明的另一目的在于提供一种应用所述的注射用血管生成抑肽冻干制剂的冻干方法制备得到的注射用血管生成抑肽冻干制剂，所述注射用血管生成抑肽冻干制剂按照质量份数计，由血管生成抑肽12-18份、甲氧基聚乙二醇3-5份、聚己内酯3-5份、活性制剂6-7份、抗氧化剂2-3份、乙醇6-10份、低温粘结剂1-3份、磷酸盐缓冲液5-7份、pH调节剂1-4份、崩解剂1-2份、注射用水11-17份组成。

进一步，所述活性制剂按照质量份数计，由西洋参提取物4-5份、党参提取物2-3份、桔梗提取物1-2份、黄芪提取物4-5份、蓝莓叶提取物8-10份、葡萄籽提取物2-4份组成。

进一步，所述抗氧化剂为丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、特丁基对苯二酚或没食子酸丙酯中的任意一种；所述低温粘结剂为磷酸盐-二氧化硅体系；所述pH调节剂为盐酸、乳酸或一水合柠檬酸中的任意一种。

进一步，所述崩解剂由内加崩解剂和外加崩解剂组成，所述内加崩解剂占崩解剂总重量的30-50；所述内加崩解剂为交联聚维酮、交联欲甲基纤维素钠、低取代羚丙基纤维素或发甲基淀粉钠中的任意一种或两种以上的混合物，所述外加崩解剂为低取代羚丙基纤维素和微晶纤维素按重量比1：(3-7)组成的混合物。

结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：本发明提供的注射用血管生成抑肽冻干制剂的冻干方法，在提取方面，充分考虑处方中各味药物的活性成分，并引入大孔吸附树脂分离手段以及回流提取的技术对处方中有效成分进行精制，使得主要有效成分得到了富集。本发明将活性成分加入冻干制剂中，能够保证血管生成抑肽的活性，更好的发挥其功效。进行凝冻后的低温冷冻，能够改善冻干制剂的性状，保证注射用冻干试剂的性能。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对本申请实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例提供的注射用血管生成抑肽冻干制剂的冻干方法流程图。

图2是本发明实施例提供的进行西洋参提取物的制备方法流程图。

图3是本发明实施例提供的黄芪提取物的制备方法流程图。

图4是本发明实施例提供的蓝莓叶提取物的制备方法流程图。

图5是本发明实施例提供的葡萄籽提取物的制备方法流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种注射用血管生成抑肽冻干制剂及其冻干方法，下面结合附图对本发明作详细的描述。

如图1所示，本发明实施例提供的注射用血管生成抑肽冻干制剂的冻干方法包括以下步骤：

S101，氧基聚乙二醇、聚己内酯溶于质量浓度为55-70％的乙醇溶液中，搅拌均匀，室温静置1-2h得到可降解溶剂；

S102，分别将西洋参、党参、桔梗、黄芪、蓝莓叶、葡萄籽洗净，进行西洋参提取物、党参提取物、桔梗提取物、黄芪提取物、蓝莓叶提取物、葡萄籽提取物的制备，得到活性制剂；

S103，在可降解溶剂中加入粘结剂，在搅拌中加入血管生成抑肽，得到悬浊液；除去悬浊液中的溶剂，对悬浊液进行凝冻，得到胶状物；将胶状物进行低温冷冻，得到初次冻干物；

S104，将初次冻干物与活性制剂、抗氧化剂、低温粘结剂、磷酸盐缓冲液、崩解剂、注射用水进行混合，得到混合物；

S105，使用pH调节剂调节混合物的pH值为6.5-7.2，得到液态物质；对液态物质进行凝冻，并对凝冻产物进行充分搅拌，后进行速冻，得到冻干物，对冻干物进行干燥脱水，得到注射用血管生成抑肽冻干制剂。

本发明实施例提供的步骤S102中，所述党参提取物的制备方法，包括：将党参置于烘干箱内，设定烘干温度为90-120℃，进行15-25min烘干，对烘干后的党参进行粉碎，研磨，得到党参提取物。

本发明实施例提供的步骤S102中，所述桔梗提取物的制备方法，包括：将桔梗进行充分浸泡后置于打浆机中进行打浆，将桔梗浆液进行过滤，对滤液进行加热浓缩，超声提取即可得到桔梗提取物。

本发明实施例提供的超声频率35-45Hz，超声时间40-50min，提取温度35-55℃。

本发明实施例提供的注射用血管生成抑肽冻干制剂按照质量分数由血管生成抑肽12-18份、甲氧基聚乙二醇3-5份、聚己内酯3-5份、活性制剂6-7份、抗氧化剂2-3份、乙醇6-10份、低温粘结剂1-3份、磷酸盐缓冲液5-7份、pH调节剂1-4份、崩解剂1-2份、注射用水11-17份组成。

本发明实施例提供的活性制剂按照质量分数由西洋参提取物4-5份、党参提取物2-3份、桔梗提取物1-2份、黄芪提取物4-5份、蓝莓叶提取物8-10份、葡萄籽提取物2-4份组成。

本发明实施例提供的抗氧化剂为丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、特丁基对苯二酚或没食子酸丙酯中的任意一种；所述低温粘结剂为磷酸盐-二氧化硅体系；所述pH调节剂为盐酸、乳酸或一水合柠檬酸中的任意一种。

本发明实施例提供的崩解剂由内加崩解剂和外加崩解剂组成，所述内加崩解剂占崩解剂总重量的30-50；所述内加崩解剂为交联聚维酮、交联欲甲基纤维素钠、低取代羚丙基纤维素或发甲基淀粉钠中的任意一种或两种以上的混合物，所述外加崩解剂为低取代羚丙基纤维素和微晶纤维素按重量比1：(3-7)组成的混合物。

下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。

实施例1

本发明实施例提供的注射用血管生成抑肽冻干制剂的冻干方法方法如图1所示，作为优选实施例，如图2所示，本发明实施例提供的西洋参提取物的制备方法，包括：

S201，将西洋参进行切片，加水浸泡，于90-110℃下煎煮1-3h，过滤得滤液，滤渣备用；

S202，在滤渣中加水，重读煎煮、过滤操作一次，合并两次滤液；

S203，对滤液进行减压浓缩得到浸膏，浸膏经干燥、粉碎、过筛，得到西洋参提取物。

实施例2

本发明实施例提供的注射用血管生成抑肽冻干制剂的冻干方法如图1所示，作为优选实施例，如图3所示，本发明实施例提供的黄芪提取物的制备方法，包括：

S301，将黄芪置于冷水中浸泡8-10h，所述冷水没过药材；

S302，使用浸泡液直接进行药材煎煮，煎煮三次，过滤，合并三次滤液；将滤液静置20min，去除底部沉淀；

S303，将滤液进行减压浓缩，得到膏状黄芪液；

S304，将膏状黄芪液干燥至含水量＜5％，粉碎，过100目筛，得到黄芪提取物。

实施例3

本发明实施例提供的注射用血管生成抑肽冻干制剂的冻干方法如图1所示，作为优选实施例，如图4所示，本发明实施例提供的蓝莓叶提取物的制备方法，包括：

S401，将蓝莓叶进行烘干，粉碎，得到蓝莓叶碎屑；

S402，将蓝莓叶碎屑与质量浓度为75％的乙醇混合，浸泡1-2h，得到混合液；

S403，将混合液置于回流提取装置中进行回流提取，得到提取液；

S404，去除提取液中的乙醇，得到蓝莓叶提取物。

实施例4

本发明实施例提供的注射用血管生成抑肽冻干制剂的冻干方法如图1所示，作为优选实施例，如图5所示，本发明实施例提供的葡萄籽提取物的制备方法，包括：

S501，将葡萄籽表面水分晾干，研磨得到葡萄籽粉末；

S502，将葡萄籽粉末分散至乙醇溶液中，使用HP-20大孔吸附树脂进行吸附；

S503，用5倍柱体积的水洗脱，弃去水洗液；

S504，用5倍柱体积的质量浓度70％的乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱部分；

S505，回收乙醇，减压浓缩，干燥，得到葡萄籽提取物。

本发明实施例提供的步骤S502中，加入的乙醇的料液比为1：(7-9)，乙醇的体积分数为40-60％。

以上所述，仅为本发明较优的具体的实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。