单分子探针多重靶向捕获文库的构建方法及应用

摘要

本发明涉及分子检测的技术领域，特别涉及单分子探针多重靶向捕获文库的构建方法及应用；包括以下步骤：根据靶目标区域序列设计并合成分子倒置探针；针对捕获的目标区域，靶序列互补区域探针A和靶序列互补区域探针B可特异性与目标区域模板互补结合，形成含有一个核苷酸至几百个核苷酸缺口的环状结构；然后加入4种游离的核苷酸，在DNA聚合酶的作用下以靶目标序列为模板填补缺口，DNA连接酶催化探针区域两端的3’，5’‑磷酸二酯键，形成完整的环化探针；用PCR扩增直接产生靶向区域的测序文库，此时的PCR扩增产物即为测序文库。本发明在传统的MIP技术基础上做了优化和改进，用于肿瘤相关的低频变异和甲基化的检测。