一种用于体外检测泛素结合酶活性的系统及检测方法

摘要

本发明公开了一种用于体外检测泛素结合酶活性的系统及检测方法。该系统包括：(1)能够表达E1蛋白的原核表达菌株C1感受态细胞；(2)能够同时表达E1蛋白和Ub蛋白的原核表达菌C2感受态细胞；(3)与表达E1蛋白和Ub蛋白质粒复制起点不同的，能够进行原核体外表达待测E2蛋白的质粒P3。将P3分别转入C1和C2感受态细胞，命名为C3CK(负对照)、C3，分别扩大培养，并诱导蛋白表达后收集菌体，进行蛋白质印迹杂交；在C3样品中检测到待测E2蛋白迁移条带，并且迁移大小符合Ub分子量，即可证明此待测E2具有泛素结合酶活性。该方法无需裂解细胞提取蛋白、纯化蛋白，也不需要做体外反应，非常方便、结果更稳定。