添加山药促进培养拟黑虫草菌丝体有效药用成分的方法

摘要

本发明涉及一种添加山药促进培养拟黑虫草菌丝体有效药用成分的方法。培养基的配制主要包括：(1)拟黑虫草菌种的准备；(2)拟黑虫草菌丝体生长培养基的配制；(3)拟黑虫草菌丝体接种、培养以及培养物后处理。使用本发明所提出的通过添加山药来促进培养拟黑虫草菌丝体有效药用成分的方法，充分利用山药丰富的营养成分，促进拟黑虫草菌丝体主要药用成分的累积。本发明操作简便，效果良好，可进行大规模推广。

说明书

技术领域

本发明属微生物技术领域，涉及一种添加山药促进培养拟黑虫草菌丝体有效药用成分的方法。

背景技术

拟黑虫草(Cordyceps nigrella Y.Kobayasi.et D.Shimizu)分布于云南西北部的金沙江和澜沧江河谷，主产于德钦县、香格里拉县、维西县、兰坪县、玉龙县、丽江市、云龙县等地。一般生长在海拔2000-3000米的云南松林、云南松高山栎混交林、高山栎林下腐殖土层中。土壤为红壤，有机质丰富、较疏松，空隙性好。拟黑虫草以干燥的子座及虫体一并入药，主要含粗蛋白、粗纤维、碳水化合物和脂肪等物质外，还含有一些具有生理活性的物质，如甾醇类、甘露醇、糖醇、有机酸、氨基酸、维生素、核苷酸等。近年来，虫草药用和保健功效被越来越多的人所认同，野生资源采挖严重，市场供需矛盾凸显，价格涨幅较快。为了解决市场需求问题，采用人工培育虫草菌丝体的技术方法，能在短时间内获得高于天然虫草营养和药用价值的虫草培养物，大大降低人们食用虫草的成本，是有效解决虫草供需矛盾的有效手段。更重要的是，这是保护野生虫草生物资源的重要途径。    

山药(Dioseorea opposita)是传统药食同源植物，为薯蓣科薯蓣属植物的块茎，含有淀粉、脂肪、蛋白质、甘露聚糖、植酸、山药素、皂苷、胆碱、淀粉酶和多种人体必须氨基酸，以及钙、镁、锌、铁等微量元素。传统中医认为山药有养胃、健脾、润肺护肝等功效，在抗疲劳、抗肿瘤、增强人体免疫机能方面有很高的医学价值。而且山药老少皆宜，没有任何副作用。

微生物培养技术的不断改进和创新，体外人工培育虫草菌丝体用于替代天然虫草已经成为可能，如任士升等发明的蛹虫草培养方法(中国发明专利，ZL 02157235.6)；柴一秋等发明的蝉拟青霉(蝉花虫草)培养方法(中国发明专利，ZL 200410033297.8)。目前为止，有关人工培养拟黑虫草菌丝体的报道很少，仅见陈毅坚等报道的研究工作(陈毅坚等，中国食用菌，2007，26(1)：21-23)，而本发明通过添加山药来促进培养拟黑虫草菌丝体有效药用成分的方法，充分利用山药丰富的营养成分，促进拟黑虫草菌丝体生长和药用成分的累积。

发明内容

本发明提供了一种添加山药促进培养拟黑虫草菌丝体有效药用成分的方法。

该方法的操作步骤如下：

(1)拟黑虫草菌种的准备：将PDA斜面琼脂培养基上保存的拟黑虫草菌种接种到液体PDA培养基，培养温度22℃，摇床转速120r/min，活化培养4天，待用。

(2)拟黑虫草菌丝体生长培养基的配制：NH-1培养基+山药粉，NH-1培养基的成分如表1所示；每100gNH-1培养基中添加山药粉10-50g，混匀，加入去离子水，使最终培养基的含水量达到65％，调pH值为5.8。培养基按60克/瓶的量装入500ml三角瓶中，121℃高压灭菌60min，冷却后将步骤(1)中已活化的拟黑虫草菌种按10％接种量接入培养基中，培养温度22℃，暗培养，培养15天，取出培养物，于40℃干燥至恒重，然后粉碎至80目粉末。

表1  NH-1培养基成分(每100g含量)

本发明的关键点在于：培养基中山药粉的含量。以上关键点如能把握好，可以显著提高拟黑虫草菌丝体主要药用成分的含量。

本发明操作简便，效果良好，本发明可应用到大规模人工培养拟黑虫草菌丝体生产主要药用成分的实际生产过程中。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不是对本发明的限制。

实施例1：

(1)拟黑虫草菌种的准备：将PDA斜面琼脂培养基上保存的拟黑虫草菌种接种到液体PDA培养基，培养温度22℃，摇床转速120r/min，活化培养4天，待用。

(2)拟黑虫草菌丝体生长培养基的配制：NH-1培养基+山药粉，每100gNH-1培养基中添加山药粉10g，混匀，加入去离子水，使最终培养基的含水量达到65％，调pH值为5.8。培养基按60克/瓶的量装入500ml三角瓶中，121℃高压灭菌60min，冷却后将步骤(1)中已活化的拟黑虫草菌种按10％接种量接入培养基中，培养温度22℃，暗培养，培养15天，取出培养物，于40℃干燥至恒重，然后粉碎至80目粉末。

3)测定拟黑虫草主要药用成分的含量，其结果见表2。

表2  每100gNH-1培养基添加10g山药粉培养拟黑虫草菌丝体主要药用成分检测结果

实施例2：

(1)拟黑虫草菌种的准备：将PDA斜面琼脂培养基上保存的拟黑虫草菌种接种到液体PDA培养基，培养温度22℃，摇床转速120r/min，活化培养4天，待用。

(2)拟黑虫草菌丝体生长培养基的配制：NH-1培养基+山药粉，每100gNH-1培养基中添加山药粉30g，混匀，加入去离子水，使最终培养基的含水量达到65％，调pH值为5.8。培养基按60克/瓶的量装入500ml三角瓶中，121℃高压灭菌60min，冷却后将步骤(1)中已活化的拟黑虫草菌种按10％接种量接入培养基中，培养温度22℃，暗培养，培养15天，取出培养物，于40℃干燥至恒重，然后粉碎至80目粉末。

3)测定拟黑虫草主要药用成分的含量，其结果见表3。

表3  每100gNH-1培养基添加30g山药粉培养拟黑虫草菌丝体主要药用成分检测结果

实施例3：

(1)拟黑虫草菌种的准备：将PDA斜面琼脂培养基上保存的拟黑虫草菌种接种到液体PDA培养基，培养温度22℃，摇床转速120r/min，活化培养4天，待用。

(2)拟黑虫草菌丝体生长培养基的配制：NH-1培养基+山药粉，每100gNH-1培养基中添加山药粉50g，混匀，加入去离子水，使最终培养基的含水量达到65％，调pH值为5.8。培养基按60克/瓶的量装入500ml三角瓶中，121℃高压灭菌60min，冷却后将步骤(1)中已活化的拟黑虫草菌种按10％接种量接入培养基中，培养温度22℃，暗培养，培养15天，取出培养物，于40℃干燥至恒重，然后粉碎至80目粉末。

3)测定拟黑虫草主要药用成分的含量，其结果见表4。

表4  每100gNH-1培养基添加50g山药粉培养拟黑虫草菌丝体主要药用成分检测结果