一种千里香药材中九里香酮的含量测定方法

摘要

本发明公开了一种千里香药材中九里香酮的含量测定方法。本发明采用超高效液相色谱法(UPLC)测定千里香药材中九里香酮的含量，该方法专属性强、精密度好、回收率高，结果准确可靠，方法简单快速。UPLC法测定千里香中九里香酮的含量与HPLC法相比，结果更加准确可靠，方法更加简单快速，大大提高了分析速度和减少了溶剂消耗。UPLC法能够成功替代HPLC法，为千里香药材质量控制提供了新的检测方法。

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物的含量测定方法，特别涉及一种千里香药材中九里香酮的含量测定方法。

背景技术

千里香(Murraya panicula ta(L.)jack)为芸香科九里香属植物，味辛、微苦、性温、有小毒，是一种用途广泛的中药材，主要分布于我国西南部，有行气止痛、活血散瘀、祛风除湿、麻醉镇惊等功能。用于治疗胃痛、风湿痹痛；外治牙痛，跌扑肿痛，虫蛇咬伤。千里香含有多种香豆素类、黄酮类化合物、生物碱及萜类成分，其中九里香酮为其主要成分。药理研究表明，千里香具有抗生育和终止妊娠、抗菌消炎、抗甲状腺、降血糖、麻醉镇静以及增强免疫功能等作用。目前对千里香的化学成分研究主要集中在生物碱及萜类成分上，而关于对治疗多种疾病有明显疗效的黄酮类成分的含量测定研究却鲜见报道。

超高效液相色谱(Ultra performance liquid chromatography，UPLC)是近几年推出的一种新的液相色谱技术。UPLC与传统的HPLC技术相比，能获得更高的柱效，并且在更宽的线速度范围内柱效保持恒定，因而其峰容量、分离效率、灵敏度和分辨率较常规的HPLC有很大的提高，为复杂体系的分离分析提供了良好的平台。目前，UPLC已用于生物药物、天然产物、代谢组学等方面研究，但UPLC在中药分析应用中较少见。

发明内容

本发明的目的在于公开一种千里香药材中九里香酮的含量测定方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明千里香药材中九里香酮的含量测定方法包括如下步骤：

a.制备对照品溶液：精密称取九里香酮对照品2～10mg，加甲醇制成0.02～0.1mg/ml的溶液；b.制备供试品溶液：取千里香粉末(过四号筛)0.1～2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10～50ml，称定重量，用功率50～1000W、频率20～100KHz的超声波处理器超声处理10～60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；c.制定色谱条件：Acquity ITY BEH C₁₈规格为2.1mm×50mm，1.7μm的色谱柱，流动相为10～40∶90～60的乙腈-水或20～60∶80～40的甲醇-水，流速为0.2～1.0ml/min，检测波长为337nm，柱温为20～50℃，进样量为1～10μl；d.进行常规系统适应性试验；e.注入超高效液相色谱仪进行测定。

本发明千里香药材中九里香酮的含量测定方法优选如下步骤：

a.制备对照品溶液：精密称取九里香酮对照品5mg，加甲醇制成0.05mg/ml的溶液；b.制备供试品溶液：取千里香粉末(过四号筛)1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，用功率300W、频率40KHz的超声波处理器超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；c.制定色谱条件：AcquityITY BEH C₁₈规格为2.1mm×50mm，1.7μm的色谱柱，流动相为23∶77的乙腈-水或32∶68的甲醇-水，流速为0.5ml/min，检测波长为337nm，柱温为30℃，进样量为4μl；d.进行常规系统适应性试验；e.注入超高效液相色谱仪进行测定。

本发明千里香药材中九里香酮的含量测定方法优选如下步骤：

a.制备对照品溶液：精密称取九里香酮对照品9mg，加甲醇制成0.09mg/ml的溶液；b.制备供试品溶液：取千里香粉末(过四号筛)2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，用功率200W、频率80KHz的超声波处理器超声处理50分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；c.制定色谱条件：AcquityITY BEH C₁₈规格为2.1mm×50mm，1.7μm的色谱柱，流动相为15∶80的乙腈-水或25∶75的甲醇-水，流速为0.8ml/min，检测波长为337nm，柱温为25℃，进样量为2μl；d.进行常规系统适应性试验；e.注入超高效液相色谱仪进行测定。

本发明千里香药材中九里香酮的含量测定方法优选如下步骤：

a.制备对照品溶液：精密称取九里香酮对照品3mg，加甲醇制成0.03mg/ml的溶液；b.制备供试品溶液：取千里香粉末(过四号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15ml，称定重量，用功率800W、频率50KHz的超声波处理器超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；c.制定色谱条件：AcquityITY BEH C₁₈规格为2.1mm×50mm，1.7μm的色谱柱，流动相为35∶65的乙腈-水或55∶45的甲醇-水，流速为0.3ml/min，检测波长为337nm，柱温为45℃，进样量为6μl；d.进行常规系统适应性试验；e.注入超高效液相色谱仪进行测定。

所述的系统适应性试验是按照常规方法进行的，包括准确度、精密度、重复性、稳定性、线性关系考察。

本发明采用超高效液相色谱法测定千里香药材中九里香酮的含量，该方法专属性强、精密度好、回收率高，结果准确可靠，方法简单快速。UPLC法测定千里香中九里香酮的含量与HPLC法相比，结果更加准确可靠，方法更加简单快速，大大提高了分析速度和减少了溶剂消耗。UPLC法能够成功替代HPLC法，为千里香药材质量控制提供了新的检测方法。

附图说明

图1九里香酮对照品线性回归曲线图

图2九里香酮对照品超高效液相色谱(UPLC)图

图3千里香药材的超高效液相色谱(UPLC)图

下面实验例用于进一步说明但不限于本发明

实验例1-5均采用如下仪器与试药。

仪器与试药：液相色谱仪为Waters Acqui tyUPLC system，包括二元泵处理器、样品处理器、柱温箱、PDA检测器以及Empower色谱工作站；九里香酮对照品，三九医药股份有限公司自制，纯度96.5％；千里香药材三批，产地分别为：广西凭祥、广西防城港、越南同登，由华南植物园叶华谷教授鉴定；乙腈为色谱纯，来自Merck公司；水为Millipore超纯水，18Ω，其他试剂均为分析纯。

实验例1加样回收试验

称取千里香药材粉末(过四号筛)6份，每份0.5g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入相当于千里香药材中100％量的九里香酮对照品溶液，按实施例1方法进行处理并测定，计算回收率，结果见表1。

表1九里香酮回收率试验结果(n＝6)

由上表可知，平均回收率为99.49％，RSD为1.90％。说明本法回收率良好，适合本品的含量测定。

实验例2重复性试验

精密称取千里香药材粉末(过四号筛)1g，共6份，按实施例2方法项下进行处理，测定九里香酮的含量。结果见表2，九里香酮含量的RSD值为1.58％，表明该方法重复性良好。

表2重复性试验结果(n＝6)

实验例3稳定性试验

精密吸取实施例3方法制备的供试品溶液4μl，分别在0、2、4、6、8、12、24h进样1次，计算峰面积的RSD值，结果见表3，结果表明九里香酮峰面积的RSD值为1.57％，表明供试品溶液在24h内稳定。

表3稳定性试验结果表

实验例4线性关系考察

分别精密吸取九里香酮(0.05256mg/ml)对照品溶液1、2、4、6、8μl，注入液相色谱仪，以色谱峰峰面积(Y)为纵坐标，以浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线，见图1。回归方程为Y＝1E+07x-1036.9，r＝0.9997，n＝6。线性范围：0.05256g～0.4205g。

实验例5样品测定

取千里香药材粉末(过四号筛)各1g，精密称定，按实施例1方法进行处理并测定，结果见表4、图2、图3。

表4不同产地千里香药材中九里香酮的含量

下述实施例均能实现上述实验例的效果

具体实施方式

实施例1-3均采用如下仪器与试药。

仪器与试药：液相色谱仪为Waters AcquityUPLC system，包括二元泵处理器、样品处理器、柱温箱、PDA检测器以及Empower色谱工作站；九里香酮对照品，三九医药股份有限公司自制，纯度96.5％；千里香药材三批，产地分别为：广西凭祥、广西防城港、越南同登，由华南植物园叶华谷教授鉴定；乙腈为色谱纯，来自Merck公司；水为Millipore超纯水，18Ω，其他试剂均为分析纯。

实施例1：超高效液相色谱(UPLC)法测定千里香药材中九里香酮的含量

a.制备对照品溶液：精密称取九里香酮对照品5mg，加甲醇制成0.05mg/ml的溶液；b.制备供试品溶液：取千里香粉末(过四号筛)1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，用功率300W、频率40KHz的超声波处理器超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；c.制定色谱条件：AcquityITY BEH C₁₈规格为2.1mm×50mm，1.7μm的色谱柱，流动相为23∶77的乙腈-水或32∶68的甲醇-水，流速为0.5ml/min，检测波长为337nm，柱温为30℃，进样量为4μl；d.进行常规系统适应性试验；e.注入超高效液相色谱仪进行测定；结果，三批千里香药材九里香酮的含量分别为1.61mg/g、1.40mg/g、1.66mg/g。

实施例2：超高效液相色谱(UPLC)法测定千里香药材中九里香酮的含量

a.制备对照品溶液：精密称取九里香酮对照品9mg，加甲醇制成0.09mg/ml的溶液；b.制备供试品溶液：取千里香粉末(过四号筛)2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，用功率200W、频率80KHz的超声波处理器超声处理50分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；c.制定色谱条件：AcquityITY BEH C₁₈规格为2.1mm×50mm，1.7μm的色谱柱，流动相为15∶80的乙腈-水或25∶75的甲醇-水，流速为0.8ml/min，检测波长为337nm，柱温为25℃，进样量为2μl；d.进行常规系统适应性试验；e.注入超高效液相色谱仪进行测定；结果，千里香药材中九里香酮的含量为1.58mg/g。

实施例3：超高效液相色谱(UPLC)法测定千里香药材中九里香酮的含量

a.制备对照品溶液：精密称取九里香酮对照品3mg，加甲醇制成0.03mg/ml的溶液；b.制备供试品溶液：取千里香粉末(过四号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15ml，称定重量，用功率800W、频率50KHz的超声波处理器超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；c.制定色谱条件：AcquityITY BEH C₁₈规格为2.1mm×50mm，1.7μm的色谱柱，流动相为35∶65的乙腈-水或55∶45的甲醇-水，流速为0.3ml/min，检测波长为337nm，柱温为45℃，进样量为6μl；d.进行常规系统适应性试验；e.注入超高效液相色谱仪进行测定；结果，千里香药材中九里香酮的含量为1.59mg/g。