用于分析人类白细胞抗原(HLA)基因型的寡聚核苷酸组合物及其检测方法

摘要

本发明涉及用于分析HLA基因型的寡聚核苷酸组合物及其检测方法。

说明书

发明背景

发明领域

本发明涉及用于分析HLA基因型的寡聚核苷酸及其检测方法。

所涉及技术的描述

本发明涉及寡聚核苷酸芯片组合物及其制造方法，特别是涉及用于分析HLA基因型以研究移植所需组织相容性的寡聚核苷酸芯片组合物，及其制造方法和检测方法。

主要组织相容性复合体(MHC)是由基因水平控制的复杂的抗原系统，其是与器官移植时的排斥反应(免疫应答)有关的基因群。其存在于所有动物中。人类MHC首次发现在识别白细胞表面抗原的抗白细胞因子中，因此被称作人类白细胞抗原(HLA)，其位于6号染色体的短臂上。根据免疫学特征、分子结构、基因位置和所分布细胞的类型，该HLA基因座被分成3类(HLA-I、II和III)。其中，HLA-I的HLA-A、-B、-Cw和HLA-II的HLA-DR的基因座被认为与组织的排斥反应的关系最为密切。

HLA的代表性特征如下。首先，因为HLA基因有超过几十个的等位基因，所以HLA基因在许多人类遗传标记中表现出最高的遗传多态性。第二是单元型水平的遗传。因为HLA基因类别中的基因紧密地位于6号染色体上，所以它们通常是整体遗传自亲代。这些等位基因的特定组合被称为单元型。第三是人类种族依赖的HLA遗传多态性。与其它基因相比，HLA等位基因的分布根据每个种族而表现出很大差异。该特征在HLA单元型中更为明显。一些种族的HLA基因表现出强烈的连锁不平衡，因此特定种群的HLA单元型就是某些人类种群的特征。由于这种HLA的遗传多态性，HLA基因的基因频率和单元型频率被用作研究人类种群基因背景差异的有效标记。第四，HLA基因的另一个重要作用与免疫应答有关。HLAI类和II类分子与细胞中的抗原结合，接着其出现在细胞表面，然后T细胞抗原受体识别该结合了HLA分子的抗原，这引起免疫应答。

如上所述，因为HLA基因的高度遗传多态性和与免疫应答有关的特点，所以其被用于许多领域如器官移植、与疾病的相关性、输血、法医学应用例如亲子鉴定和人类学研究。当今在肾和骨髓移植程序中HLA检测是必须的。在移植前，对供体和受体进行ABO血型检测和HLA-A、-B、-Cw和-DR型检测并进行交叉配对试验。在骨髓、肾等移植的情况下，如果供体和受体的HLA类型不同，则会有对于移植器官的排斥反应。通常骨髓移植需要供体和受体之间遗传完全一致，因为它是免疫细胞的移植。因此，选择与受体HLA型一致的供体是十分重要的。特别的是，因为在如急性或慢性白血病、免疫不全和再生障碍性贫血等的情况下进行骨髓移植时的HLA型应该完全一致，所以遗传了相同HLA型的兄弟或姐妹是最有资格的。但是，如果没有亲属，则要在没有血缘关系的人中寻找有资格的供体。在这样的情况下，必须对许多人进行分析以确定HLA基因型。

随着分子生物学的发展，发现了控制HLA抗原的等位基因的碱基序列，因此能够以通过碱基序列的差异来发现HLA多样性的方式来分析HLA基因。特别是PCR技术的引入使HLA的DNA分型快速发展，并且几乎所有的HLA多态性都在DNA水平上得到说明。使用PCR进行HLA等位基因的分类有如下优点：例如不必要分离T淋巴细胞和B淋巴细胞的分离，因为所有有核细胞都可以作为样品，而无论HLA分子在细胞表面的表达数量是多少，并且有可能利用不含有淋巴细胞的体液和组织进行基因型分析。DNA也是相对稳定的，因此它可以在冷藏条件下被储存几个月，在冷冻条件下几乎永久保存。DNA分型技术的最重要的优点之一是，它能够对大量HLA等位基因进行分类。

目前，有多种通常使用的HLA DNA分型方法。首先，PCR-SSP方法是进行合成每个等位基因碱基序列的特异性引物的PCR。这需要大量的引物来区分几十个等位基因。其分析快速并且是简单的方法，但它需要细心专心、专业知识和长时间以合成引物，并且在分析大量样品的时候会受到限制。其还有一个缺点即难以一次处理多个样品因为等位基因越多就需要越大量的PCR-SSP。第二，通过PCR-RFLP区分HLA基因型的方法是一种用于分析等位基因对限制性酶反应类型的相对简单的方法。该方法通过被多种限制性内切酶降解的一定长度的DNA片段区分等位基因的类型。虽然这种方法容易确定结果而且简便，但它的缺点是例如在限制性内切酶的识别位点受到限制时，它就不能进行区分，并且由于需要使用聚丙烯酰胺凝胶因此其不能同时区分大量样品或几十个等位基因。因此，其对于分析只有几个等位基因的基因型的情况是足够的。第三，PCR-SSCP方法是加入变性剂如甲酰胺变性为单链DNA(ssDNA)后，将PCR产物在非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。ssDNA根据碱基序列在电泳中有特定的结构并因此有特定的迁移速率，因此各自表现出其它类型的条带。利用这些性质分析HLA基因型的技术非常复杂并需要很高的技术。对结果进行分析时需要大量的经验和知识。第四，基于序列的分型(Sequence Based Typing)是在对HLA基因分别进行PCR扩增后研究碱基序列的方法。用于该方法的试剂盒的一个例子是ABI公司(美国)的HLA基于序列的分型(SBT)。然而该试剂盒非常昂贵并且该方法需要价格昂贵的设备。而且实验程序也十分复杂。第五，PCR-SSOP方法是一种分析方法，其合成与表示遗传多态性的区域的碱基序列互补的探针，并分析探针和PCR扩增产物的杂交。因为容易发生与其它具有相似碱基序列的等位基因的杂交，所以该方法需要大量探针和经验、技术来建立适当的杂交温度和反应条件。即使该方法能够根据一种探针得到精确的结果，但由于使用滤纸，所以在固定大量探针方面是受到局限的，而且由于一份滤纸只能分析一种类型，所以需要大量时间和劳力来处理和分析很多样品。可以得到的使用该方法的商品是INNOGENETICS公司(比利时)的INNO LiPA试剂盒和使用Line Probe分析方法(该方法是用分别用于HLA I类和II类的SSOP进行反向杂交)的DYNAL Biotech公司(美国)的Dynal RELI^TM SSO HLA分型试剂盒。

如上所述，虽然存在一些使用几种分型方法来分析HLA基因的商品，但是这些方法的共同的缺点是，同时进行HLA-A、-B、-Cw和DR的分型时需要很多时间和劳力。特别是，分析大量样品更加困难。

最近的DNA芯片技术(该技术可以将少量的DNA以高密度固定在如微小的玻片、硅等薄板上并能够同时对大量样品进行分析)开发了能够用于分析基因表达、基因诊断、寻找基因突变、药物检测以及疾病诊断等的新型分析系统。本发明就是利用这种DNA芯片技术，在玻片上同时对HLA-A、-B、-Cw和-DR进行分析。即，将每个探针结合到醛基化玻片的5个区域上。将通过不对称PCR方法扩增的HLA基因与结合在玻片上的探针杂交。通过对使用HLA基因分型程序对得到的探针进行分析可以鉴定HLA基因型。

发明内容

因此，为了克服上述问题，本发明的目的是提供一种包括用于分析HLA基因型的组合物的寡聚核苷酸组合物。

本发明的另一个目的是，提供一种使用该组合物的改良的HLA基因分型方法。

为了达到上述目的，本发明提供了一种具有多个用于分析HLA基因型的寡聚核苷酸探针的组合物，其中该组合物包括至少一个选自由以下探针组构成的组的探针组：由至少两个用于分析HLA-A基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO：1-41所组成的组；由至少两个用于分析HLA-B基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO：42-89所表示的碱基序列组成的组；由至少两个用于分析HLA-Cw基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO：90-112表示的碱基序列所组成的组；和由至少两个用于分析HLA-DR基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO：113-140表示的碱基序列所组成的组。

本发明还提供了一种测试用支持物，将具有多个用于分析HLA基因型的寡聚核苷酸探针的组合物固定在其上，其中该组合物包括至少一个选自由以下探针组构成的组的探针组：由至少两个用于分析HLA-A基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO：1-41所组成的组；由至少两个用于分析HLA-B基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO：42-89所表示的碱基序列组成的组；由至少两个用于分析HLA-Cw基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO：90-112表示的碱基序列所组成的组；和由至少两个用于分析HLA-DR基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO：113-140表示的碱基序列所组成的组。

优选的是，所述支持物为自由滤膜、条带(strip)、微球、芯片、玻片、多孔板、膜以及光学纤维所组成的组。

本发明还包括至少一种选自由SEQ ID NO：141-157表示的用于分析HLA基因型的碱基序列所组成的组的引物，其中该引物用于检测所述探针和靶基因之间的杂交反应。

在本发明的引物中，由SEQ ID NO：142、144、146、148、150、152和154表示的反义引物的优选例子是与生物素结合或与若丹明(rhodamine)结合的。在所述引物中，结合生物素的反义引物与链霉抗生物素蛋白-花青苷相互作用。

另外，本发明的优选实施例是提供一种分析HLA基因型的方法，其包括以下步骤：(a)从血液细胞和组织中分离HLADNA；(b)使用分离的DNA进行不对称PCR；(c)将权利要求1或2的探针与不对称PCR产物结合；(d)鉴定所述结合。

在本发明的所述鉴定步骤中，使用若丹明或链霉抗生物素蛋白-花青苷，其中链霉抗生物素蛋白-花青苷与生物素结合。利用微阵列扫描对结果进行鉴定和HLA基因分型程序对结果进行分析，因此HLA基因型可以很容易被鉴定。在本发明的一个优选实施例中，开发了HLA寡聚核苷酸芯片，其用于在使用最近开发的DNA微阵列技术的玻片上同时对HLA-A、-B、-Cw和-DR进行分析。也就是说制备了用于分析HLA基因型的与21类HLA-A特异反应的38个寡聚核苷酸，与36类HLA-B特异反应的46个寡聚核苷酸，与14类HLA-Cw特异反应的20个寡聚核苷酸，与16类HLA-DRB1/3/4/5特异反应的22个寡聚核苷酸和与8类HLA-DRB1的B1^*3、^*8、^*11、^*12、^*13、^*14、^*15和^*16特异反应的17个寡聚核苷酸。它们被结合在醛基化玻片的5个区域上。将通过不对称PCR方法扩增的HLA基因与结合在玻片上的寡聚核苷酸探针进行杂交。利用荧光反应方法对反应后的探针进行分析，鉴定了HLA的87个基因型。

附图说明

图1是表示HLA寡聚核苷酸芯片整个玻片的图。即具有如标示数字所示的5个槽，以在玻片上同时对HLA-A、-B、-Cw和-DR进行分析。如表所示，其中在总共155个探针中，将下列探针在玻片上设置两次，其被分在每个组中：38个区分HLA-A基因型的探针，2个用作其阳性对照的探针和1个用作其阴性对照的探针；46个区分HLA-B基因型的探针，1个用作其阳性对照的探针和1个用作其阴性对照的探针；20个区分HLA-Cw基因型的探针，2个用作其阳性对照的探针和1个用作其阴性对照的探针；22个区分HLA-DRB1/3/4/5基因型的探针，1个用作其阳性对照的探针和1个用作其阴性对照的探针；17个增强区分HLA-DRB1基因型能力的探针(其是必需的因为区分HLA-DRB1/3/4/5基因型的探针受到DRB3/4/5基因型的影响并且HLA-DRB1的分析变得部分不清楚)，1个用于阳性对照的探针和1个用于阴性对照的探针。通过将COVERWELL PERFUSION CHAMBER(SIGMA美国)附着到分散状态的探针上以制造HLA寡聚核苷酸芯片，用来进行区分每个基因型的探针的混合反应。

图2至6是表示HLA寡聚核苷酸芯片对于HLA-A^*11/^*31、B^*27、Cw^*06和DRB^*01/^*11/DRB3型的荧光反应结果。这些图是将图1所示的玻片的5个槽中所发生反应进行放大的图像。

图2a是表示HLA寡聚核苷酸芯片对于含有HLA-A^*11和HLA-A^*31型的样品同时发生的荧光反应的结果。该图表示在41个探针中的与A^*11型相关的探针13、14、15、17、18、23、29、30和33以及与A^*31相关的探针11、13、15、18、21、25、26、29、32、39和40(这些在表4中被称为“活性HLA型”)上同时发生的阳性反应。探针01和41是阳性对照，其出现在所有反应中，探针06是阴性对照，其在任何反应中都不出现，这也能证明试验的精确度。设置相同探针的两个相同的点用以使反应更加精确和减少误差。

图2b表示固定在玻片上的探针的位置。

图3a是表示HLA寡聚核苷酸芯片对于含有HLA-B^*27型的样品的荧光反应的结果。该图表示发生48个探针中与B^*27相关的探针09、12、21、30、31、32、36、37、42和47(其在表5中被称为“活性HLA型”)上的阳性反应。探针01是阳性对照，其出现在所有反应中，探针06是阴性对照，其在任何反应中都不出现，这也能证明试验的精确度。设置相同探针的两个相同的点用以使反应更加精确和减少误差。

图3b表示设置在玻片上的探针的位置。

图4a是表示HLA寡聚核苷酸芯片对于含有HLA-Cw^*06型的样品的荧光反应的结果。该图表示发生在23个探针中与Cw^*06相关的探针06、08、13和17上的阳性反应(其在表6中称为“活性HLA型”)。探针01和23是阳性对照，其出现在所有反应中，探针04是阴性对照，其在任何反应中都不出现，这也能证明试验的精确度。设置相同探针的两个相同的点用以使反应更加精确和减少误差。

图4b表示设置在玻片上的探针的位置。

图5a是表示HLA寡聚核苷酸芯片对于含有HLA-DRB1^*01和HLA-DRB1^*11型的样品同时发生的荧光反应的结果。该图表示同时发生在41个探针中与DRB1^*01相关的探针07、10和与DRB1^*11相关的探针04、10、13和与DRB1^*11一起遗传的DRB3相关的探针16、24上的阳性反应(其在表7中被称为“活性HLA型”)。探针01是阳性对照，其出现在所有反应中，探针05是阴性对照，其在任何反应中都不出现，这也能证明试验的精确度。设置相同探针的两个的相同的点用以使反应更加精确和减少误差。

图5b表示设置在玻片上的探针的位置。

图6a是表示HLA寡聚核苷酸芯片对于含有HLA-DRB1^*01和HLA-DRB1^*11型的样品同时发生的荧光反应的结果。该图表示同时发生在19个探针中的与选择性扩增所得到的DRB^*11相关的探针07、10、13上的阳性反应(其在表8中被称为“活性HLA型”)。探针01是阳性对照，其出现在所有反应中，探针04是阴性对照，其在任何反应中都不出现，这也能证明试验的精确度。设置相同探针的两个相同的点用以使反应更加精确和减少误差。

图6b表示设置在玻片上的探针的位置。

荧光引物和探针用在PCR和杂交反应中。为了分析结果，以使用GenePiX4000 Scanner(Axon仪器公司，美国)的HLA分型程序对表现探针类型的荧光进行分析。

具体实施方式的详细描述

参考附图根据示范性实施方式对本发明进行详细描述，其仅作为说明的方法提供，因此并不限制本发明。

实施例1：合成HLA引物及其碱基序列

表1中表示用于不对称PCR的HLA PCR引物，其分析HLA-A、-B和Cw的外显子2和3以及HLA-DRB1/3/4/5的外显子2的共同反应位点，并分析仅扩增8种特定基因型的位点例如HLA-DBR1的外显子2上的B1^*3、^*8、^*11、^*12、^*13、^*14、^*15和^*16。

杂交反应后，将若丹明连接在不对称PCR中使用的反义引物的5′端用来鉴定荧光反应，或者在杂交反应后，连接生物素使其与链霉抗生物素蛋白-花青苷结合。该引物应发明人的要求由Metabion公司(德国)按照分子克隆(Molecular cloning)第三版(Sambrook和Rusell，Cold Spring HarborLaboratory Pess，New York，美国，2001)10.42中描述的合成寡聚核苷酸的方法合成的。

表1  用于分析HLA基因型的引物碱基序列

                引物           碱基序列      参照  HLA-A外显子2正义(SEQ ID NO：141)AAACC GCCTC TGYGG GGAGAAGCAA PCR大小 466bp外显子2反义(SEQ ID NO：142)GATCT CGGAC CCGGA GACTG TGG外显子3正义(SEQ ID NO：143)TCSGG GCCAG GTTCT CACACC PCR大小 374bp外显子3反义(SEQ ID NO：144)GTGTT GGTCC CAATT GTCTC CCCTC  HLA-B外显子2正义(SEQ ID NO：145GCTCC CACTC CATGAGGTAT PCR大小 420bp外显子2反义(SEQ ID NO：146)TAAAC GCGCC TGGGS CTCTCG和TAGAC GCGCCTGGGG CTCTCG外显子3正义(SEQ ID NO：147)TACCC GGTTT CATTTTCAGTTG PCR大小 509bp外显子3反义(SEQ ID NO：148)ATTCT CCATT CAASG GAGGGCGAC  HLA-Cw外显子2正义(SEQ ID NO：149)CTCCCACTCCATGARGTATTT PCR大小 419bp外显子2反义(SEQ ID NO：150)TAAAGGYGACTGGGG CTCTCT外显子3正义(SEQ ID NO：151)TTTAC CCGGT TTCAT TTTCAGTTT PCR大小 480bp外显子3反义(SEQ ID NO：152)GCTGA TCCCA TTTTC CTCCCCTC  HLA-  DRB1/3/4/5外显子2正义(SEQ ID NO：153)TCCCCACAGCACGTTTCTTG PCR大小 276bp外显子2反义(sequence ID NO：154)CCGCTGCACT GTGAAGCTCT   HLA-DRB1外显子2正义-1(SEQ ID NO：155)TCCTGTGGCAGCCTAAGAGG PCR大小 276bp外显子2正义-2(SEQ ID NO：156)AGCAC GTTTC TTGGA GTACTCTACGTC外显子2正义-3(SEQ ID NO：157)GCACG TTTCT TGGAG TACTCTACGGG外显子2反义(SEQ ID NO：154)CCGCTGCACTGTGAAGCTCT

实施例2：HLA DNA的提取和不对称PCR反应

1)使用Gentra Systems公司的PUREGENE^TM DNA分离试剂盒分离HLA DNA。将300μl血液与900μl RBC裂解溶液混合。将混合物在室温下反应1分钟，并伴随10次振动。然后，以13000rpm将混合物离心20秒。取20μl上清液。

2)将剩余的上清液漩涡(vortex)10秒以重悬浮白细胞后，加入300μl细胞裂解溶液。然后用移液管将细胞裂解。

3)向细胞裂解溶液中加入100μl蛋白质沉淀溶液，将混合液漩涡20秒。然后以13000rpm将混合液离心1分钟。

4)将含有DNA的上清液与100％的异丙醇混合。然后摇试管50次以混合，以13000rpm将试管液离心1分钟。

5)除去上清液并用300μl 70％乙醇清洗沉淀。以13000rpm离心1分钟。

6)除去上清液，使沉淀干燥。然后用100μl水合DNA的溶液对沉淀进行悬浮。

7)使用GeneAmp PCR体系9600热循环仪(Perkin Elmer CetusCompany，美国)进行如表2所示的不对称PCR反应。

8)将5μl不对称PCR产物和1μl凝胶上样缓冲液(0.25％溴酚兰，0.25％二甲苯胺FF和15％Ficol 1400)混合。然后在含有1μl/ml溴化乙啶(EtBr)的2％琼脂糖凝胶上进行电泳。使用装配紫外透射仪的图像分析仪(VilberLourmat Company，France)对PCR带进行鉴定。

表2  HLA不对称PCR反应条件

         反应组成条件       反应温度条件无菌蒸馏水(DW)10.095℃，5.0分钟1个循环10×缓冲液2.02mM dNTP1.094℃，45秒62℃，1.0分钟72℃，20秒35个循环1-3pmol正义引物1.07-15pmol反义引物1.01U Taq0.5分离的DNA4.5总计20μl72℃，5.0分钟1个循环

实施例3：合成用于制备HLA寡聚核苷酸芯片的探针及其碱基序列

将氨基链(Amino links)连接在所有探针的每个5′端用于醛基化玻片上的共价键。将10-20个寡聚(dT)连接到探针上使杂交容易进行。然后，将表3中所示的碱基连到氨基链-寡聚(dT)_10-20上。简言之，具有“氨基酸链-寡聚(dT)_10-20-探针碱基序列”顺序的引物已经按照发明人的要求由Metabion公司合成。通过分析如表3中所述21种类型的HLA-A、36种类型的HLA-B、14种类型的HLA-Cw和16种类型的HLA-D，确定所鉴定HLA基因型的碱基序列。

在表4至7所示的碱基序列中，中间的大写字母表示的碱基是最重要的碱基序列。以所述碱基为中心，合成了约13-30bp的探针，其确定了反映Tm和GC％的60～65℃。

表3  所分析的HLA基因型和种类

HLA基因型                       HLA类型                                      HLA-AA^*01，A^*02，A^*23，A^*24，A^*25，A^*26，A^*34，A^*66，A^*29，A^*30，A^*31，A^*32，A^*33，A^*74，A^*68，A^*69，A^*03，A^*11，A^*36，A^*43，A^*80HLA-BB^*07，B^*08，B^*13，B^*14，B^*15，B^*18，B^*27，B^*35，B^*37，B^*38，B^*39，B^*40，B^*41，B^*42，B^*44，B^*45，B^*46，B^*47，B^*48，B^*49，B^*50，B^*51，B^*52，B^*53，B^*54，B^*55，B^*56，B^*57，B^*58，B^*59，B^*67，B^*73，B^*78，B^*81，B^*82，B^*83HLA-CwC^*01，C^*02，C^*03，C^*04，C^*05，C^*06，C^*07，C^*08，C^*12，C^*14，C^*15，C^*16，C^*17，C^*18HLA-DRDRB1^*01，B1^*03，B1^*04，B1^*07，B1^*08，B1^*09，B1^*10，B1^*11，B1^*12，B1^*13，B1^*14，B1^*15，B1^*16，DRB3，DRB4，DRB5

表4  用于确定HLA-A基因型的探针碱基序列

    探针名称      碱基序列       活性HLA型HLA-A01(SEQ ID NO：1)gtgggctacgtggacgaca与所有类型都反应(阳性对照 外显子2)HLA-A02(SEQ ID NO：2)gcgagccagaAgatggagccA^*01，A^*36HLA-A03(SEQ ID NO：3)ctgaccgagCgAAcctgA^*01，A^*26，A^*29，A^*36，A^*43HLA-A04(SEQ ID NO：4)attgggacGGggagacaA^*02，A^*23，A^*24，A^*80HLA-A05(SEQ ID NO：5)attgggacCgggagacaA^*0246，A^*6813HLA-A06(SEQ ID NO：6)tgcgctctGTgaccgc不与任何类型反应(阴性对照)HLA-A07(SEQ ID NO：7)attgggacgAggagacaA^*23，A^*24，A^*80HLA-A08(SEQ ID NO：8)ggaTcGCgcTcCgctactaA^*23，A^*24，A^*25，A^*32HLA-A09(SEQ ID NO：9)gggaccGgAaCacacggA^*25，A^*26，A^*34，A^*66，A^*33，A^*68，A^*69HLA-A10(SEQ ID NO：10)ttgggaccTgCagacacggA^*29，A^*43

(接下页)

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HLA-A11(SEQ ID NO：11)gcaggagAggccTgagtatA^*30，A^*31HLA-A12(SEQ ID NO：12)ctgaccgagAgaGcctgA^*25，A^*32HLA-A13(SEQ ID NO：13)cagaTtgaccgagTgGacctgA^*03，A^*11，A^*30，A^*31，A^*33，A^*34，A^*66，A^*68，A^*69，A^*74HLA-A14(SEQ ID NO：14)cagaCtgaccgagtggacctgA^*03，A^*11，A^*30，A^*34，A^*66，A^*68，A^*69A^*74HLA-A15(SEQ ID NO：15)ctgaccgaGtgGacctgA^*02，A^*30，A^*31，A^*33，A^*34，A^*66，A^*74，A^*68，A^*69，A^*03，A^*11HLA-A16(SEQ ID NO：16acTcgcagttcgtgcAgttA^*80HLA-A17(SEQ ID NO：17)gagggcCGgtgcgtA^*01，A^*25，A^*26，A^*66，A^*11，A^*43HLA-A18          (SEQ ID NO：18)cgtggaGTggctccgcA^*02，A^*25，A^*26，A^*34，A^*66，A^*29，A^*30，A^*31，A^*32，A^*33，A^*74，A^*68，A^*69，A^*03，A^*11，A^*36，A^*43HLA-A19(SEQ ID NO：19)tacctggaTggcACgtgcA^*03HLA-A20(SEQ ID NO：20)ccagatGatgtTtggctgcA^*23，A^*24HLA-A21(SEQ ID NO：21)tggagggcACgtgcgtA^*02，A^*03，A^*23，A^*24，A^*34，A^*29，A^*30，A^*31，A^*32，A^*33，A^*74，A^*68，A^*69，A^*36HLA-A22(SEQ ID NO：22)tggaTggcACgtgcgtA^*03HLA-A23(SEQ ID NO：23)ggagcagcAgagagCctaA^*24，A^*11HLA-A24(SEQ ID NO：24)caccatccgaGGatgtatggcA^*02，A^*25，A^*26，A^*66，A^*43，A^*29，某些A^*31，A^*32，A^*33，A^*34，A^*68，A^*69，A^*74HLA-A25(SEQ ID NO：25)caccatccagaTgatgtatggcA^*29，A^*31，A^*32，A^*33，A^*68，A^*74HLA-A26(SEQ ID NO：26)cagatcaccCagcgcaagA^*23，A^*25，A^*26，A^*34，A^*66，A^*29，A^*30，A^*31，A^*32，A^*33，A^*74，A^*43HLA-A27(SEQ ID NO：27)gagAcggCccatgAggcA^*25，A^*26，A^*34，A^*66，A^*43HLA-A28(SEQ ID NO：28)gagGcggcccatgaggcA^*03

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HLA-A29(SEQ ID NO：29)ttacatcgccTtgaacgaggA^*29，A^*31，A^*32，A^*33，A^*74，A^*01，A^*03，A^*11，A^*25，A^*26，A^*30，A^*34，A^*36，A^*43，A^*66，A^*80HLA-A30(SEQ ID NO：30)ttacatcgccCtgaacgaggA^*01，A^*03，A^*11，A^*25，A^*26，A^*30，A^*34，A^*36，A^*43，A^*66，A^*80HLA-A31(SEQ ID NO：31)gcgggtaTGAAcagCacgcA^*30HLA-A32(SEQ ID NO：32)ccatccagatGatgtatggcA^*29，A^*31，A^*32，A^*33，A^*74，A^*68HLA-A33(SEQ ID NO：33)ccatccagatAatgtatggcA^*01，A^*03，A^*11，A^*30，A^*80，A^*34，A^*36HLA-A34(SEQ ID NO：34)agcagTggagagCctaccA^*25，A^*26，A^*66，A^*68，A^*43    HLA-A35(SEQ ID NO：35)ctcagaCcaccaagcAcaagtgA^*02，A^*68，A^*69HLA-A36(SEQ ID NO：36)tcacaccGtccagaGGatgtatgA^*02，A^*69HLA-A37(SEQ ID NO：37)tcacaccCtccagaggatgtatg某些A^*02HLA-A38(SEQ ID NO：38)tcacaccAtccagaggatgtatgA^*25，A^*26，A^*66，A^*43HLA-A39(SEQ ID NO：39gggTcggacTggcgcA^*02，A^*69，A^*03，A^*23，A^*24，A^*29，A^*30，A^*31，A^*33，A^*34，A^*68，A^*80HLA-A40(SEQ ID NO：40)gggtcggacGggcgcA^*03，A^*23，A^*24，A^*29，A^*30，A^*31，A^*33，A^*34，A^*68，A^*80HLA-A41(SEQ ID NO：41)ctgcgctcttggaccgcg与所有类型都反应(阳性对照，外显子3)

表5  用于测定HLA-B基因型的探针碱基序列

    探针名称       碱基序列                       活性HLA型HLA-B01(SEQ ID NO：42)gccctcccgttgattggag与所有类型都反应(阳性对照)HLA-B02(SEQ ID NO：43)gcagcTgagaAcctacctgB^*1548，B^*1569，B^*3535，B^*39，B^*4429，B^*5119，B^*67HLA-B03(SEQ ID NO：44)tatttcGacaccGccAtgtcB^*0729，B^*08 HLA-B04(SEQ ID NO：45)cacccagcTcaagtgggB^*13HLA-B05(SEQ ID NO：46)ggccggaAtattgggaccB^*14，B^*3526，某些B^*38，B^*670101HLA-B06(SEQ ID NO：47)agacggcacgattgagaca不与任何类型反应(阴性对照)HLA-B07(SEQ ID NO：48)agGATggCgccCcgB^*13，某些B^*15，B^*4021，B^*4408，B^*46，B^*5202，B^*57 HLA-B08(SEQ ID NO：49tagagcaAgaggggccgB^*18 HLA-B09(SEQ ID NO：50)atctGcaaggccAaggcB^*27，B^*7301HLA-B10(SEQ ID NO：51)gactTaccgagagGAcctgB^*37，B^*0727，B^*543，B^*47010101，B^*47010102，B^*5303HLA-B11(SEQ ID NO：52)gtatttcCacaccGccAtgt某些B^*40，B^*41，B^*45，B^*49，B^*50，B^*4415，B^*4418HLA-B12(SEQ ID NO：53)ggtatttcCacacctccgtg某些B^*40，B^*18，B^*27，B^*37，B^*4202，B^*5402，B^*7301HLA-B13(SEQ ID NO：54)CgctgGagcgcgcGB^*41，B^*42，B^*08HLA-B14(SEQ ID NO：55)caagGccCaGGcacag某些B^*07，B^*42，B^*54，B^*55，B^*56，B^*670101，B^*670102，B^*81，B^*82，B^*83HLA-B15(SEQ ID NO：56)cgggTatgaccagGacgB^*0728，B^*44，B^*5704，B^*8301HLA-B16(SEQ ID NO：57)GtggagtCgctccgcB^*0720，B^*1514，B^*44，B^*45，B^*5002，B^*5123，B^*5707，B^*82，B^*83HLA-B17(SEQ ID NO：58)acagaAGtacaagCGccagB^*0713，B^*46，B^*6702HLA-B18(SEQ ID NO：59)tccagagGatgtTTggctgB^*1506，B^*1527，B^*3523，B^*4410，B^*47，B^*82HLA-B19(SEQ ID NO：60)tcTcccagcgcaagtTgg某些B^*40，B^*4431，B^*48，B^*8101HLA-B20(SEQ ID NO：61)acgacggcaaAgattacatcgB^*150102，B^*1509，B^*4026，B^*4028，B^*51，B^*52，B^*5605，B^*5606，B^*78HLA-B21(SEQ ID NO：62)cggGaGacacagatctCcB^*13，某些B^*15，B^*1812，B^*27，某些B^*35，B^*37，某些B^*38，B^*40，B^*41，B^*44，B^*45，B^*47，B^*48，B^*49，B^*50，B^*52，B^*7805

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HLA-B22(SEQ ID NO：63)gacCtggggccCgacB^*0712，B^*1520，B^*1562，B^*35，B^*4024，B^*4104，某些B^*44，B^*45，B^*4802，B^*49，某些B^*50，B^*53，B^*5609，B^*5705，B^*58，B^*82HLA-B23(SEQ ID NO：64)gttcgtgCggttcgacaB^*150104，B^*54HLA-B24(SEQ ID NO：65)cacaTcAtccagGTGatgtaTggB^*4030，B^*4034，B^*57HLA-B25(SEQ ID NO：66)agcgaggAcgggtctcB^*73HLA-B26(SEQ ID NO：67)ctacaccGcTAtgtcccGB^*82HLA-B27(SEQ ID NO：68)ggaaggacaAgctggagcB^*07HLA-B28(SEQ ID NO：69)TggacgGcacccagB^*18HLA-B29(SEQ ID NO：70ctacaccGccgtgtccB^*14，B^*3805HLA-B30(SEQ ID NO：71)gcttcatcAcCgtgggctaB^*13，B^*1553，B^*27某些B^*40，B^*41，某些B^*44，B^*45，某些B^*49，B^*50，B^*73HLA-B31(SEQ ID NO：71)ggacctgAgctcctggB^*13，B^*14，某些B^*15，B^*18，某些B^*27，某些B^*35，B^*37，B^*38，B^*4026，B^*4028，B^*4035，某些B^*44，B^*45，B^*46，B^*47，B^*4802，B^*49，B^*50，某些B^*51，B^*52，B^*53，B^*54，某些B^*55，B^*56，B^*57，B^*58，B^*59，B^*67，B^*78，B^*82，B^*83HLA-B32(SEQ ID NO：71)cGCgcTcCgctactaca某些B^*13，B^*1513，B^*1516，B^*15170101，B^*15170102，B^*1523，B^*1524，B^*1536，B^*1567，B^*1809，B^*2701，B^*2702，B^*38，B^*4013，B^*4019，某些B^*44，B^*49，B^*51，B^*52，某些B^*53，B^*5607，B^*57，B^*58，B^*59HLA-B33(SEQ ID NO：74)ggagggcACgtgcgtB^*0719，B^*0731，某些B^*08，B^*1306，B^*14，B^*1542，B^*1544，B^*1550，B^*1569，某些B^*18，B^*2715，B^*3535，某些B^*37，某些B^*38，B^*4039，B^*41，B^*42，B^*4404，B^*5121，B^*54，某些B^*55，B^*5610，B^*5805，B^*59，B^*67

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HLA-E34(SEQ ID NO：75)cgagagaAcctgcggaTcB^*1513，B^*1516，B^*15170101，B^*151702，B^*1523，B^*1524，B^*1567，B^*2702，B^*3801，B^*3805，B^*3806，B^*3807，B^*3809，B^*4013，B^*4019，B^*4406，B^*4418，B^*4425，某些B^*49，B^*51，B^*52，某些B^*53，B^*57，B^*58，B^*59HLA-B35(SEQ ID NO：76)caccctccagTgGatgtatcc某些，b^*14，某些B^*58HLA-B36(SEQ ID NO：77accctccagaATatgtaTggctg某些B^*27，B^*3702，B^*4704HLA-B37(SEQ ID NO：78agtccgagAGAggagccgB^*07，B^*08，B^*14，某些B^*15，B^*27，某些B^*38，B^*39，B^*4012，B^*42，B^*48，B^*55，B^*56，B^*59，某些B^*67，B^*73，B^*81，B^*82，B^*83HLA-B38(SEQ ID NO：79)agaggatgtCTggctgcga某些B^*37，B^*1532，B^*1818，B^*3909，B^*5307HLA-B39(SEQ ID NO：80)tatttcTacaccTccGtgtcccB^*07，B^*38，某些B^*42，B^*48，B^*5510，B^*81HLA-B40(SEQ ID NO：81)ggagcagGACagagccta某些B^*07，B^*08，B^*3538，某些B^*37，B^*41，B^*42，某些B^*44，某些B^*51，B^*5709，B^*82，B^*83                                                HLA-B41(SEQ ID NO：82)ggagcagCGGagagcctaB^*07，B^*0806，B^*1403，某些B^*15，B^*1813，某些B^*35，某些B^*40，某些B^*44，某些B^*51，B^*5509，某些B^*57HLA-B42(SEQ ID NO：83)cgTgtggcggagcagcTgagaB^*0726，B^*13，某些B^*15，B^*18，B^*27，B^*35，B^*3702，B^*38，B^*39，B^*40，某些B^*44，B^*47，B^*48，某些B^*51，B^*5203，B^*53，B^*54，某些B^*55，某些B^*56，某些B^*57，某些B^*58，B^*59，B^*7804，B^*81HLA-B43(SEQ ID NO：84)ggagcagTggagagccta某些B^*15，B^*2725，某些B^*35，B^*3918，B^*5603HLA-B44(SEQ ID NO：85)gacgccAcgagtccgagGATB^*13，某些B^*15，某些B^*40，B^*41，某些B^*44，B^*45，B^*47，某些B^*49，B^*50HLA-B45(SEQ ID NO：86)tccgcagaCacctggagB^*14，某些B^*15，某些B^*18，某些B^*35，B^*3704，B^*4028，某些B^*51，某些B^*52，某些B^*53，某些B^*56，B^*73，某些B^*78HLA-B46(SEQ ID NO：87)cGgaAcATGaaggccTCC某些B^*15，B^*57，B^*58HLA-B47(SEQ ID NO：88)gggTaCCaccagGacgcc某些B^*15，某些，B^*27，B^*3702，B^*47HLA-B48(SEQ ID NO：89)gagGACggagccCcggB^*18，B^*35，B^*37，某些B^*39，B^*51，B^*52，B^*53，B^*58，B^*78

表6  用于确定HLA-Cw基因型的探针碱基序列

     探针名称          碱基系列           活性HLA型HLA-Cw01(SEQ ID NO：90)cggagtattgggaccgggagaca与所有类型都反应(阳性对照，外显子2)HLA-Cw02(SEQ ID NO：91)catgaAgtatttctTcacATCcgtgtccCw^*01 HLA-Cw03(SEQ ID NO：92)gaggtatttctCcacatccgtgt某些Cw^*04，Cw^*14 HLA-Cw04(SEQ ID NO：93)agacggcacgattgagaca与任何类型都不反应(阴性对照)HLA-Cw05(SEQ ID NO：94tccgtgtccTggcccggc某些Cw^*04 HLA-Cw06(SEQ ID NO：95)cgcttcatcTcagtgggctaCw^*01，Cw^*0311，Cw^*06，Cw^*07，Cw^*18 HLA-Cw07(SEQ ID NO：96)agttcgtgcAgttcgacagCw^*05，Cw^*0605，Cw^*08 HLA-Cw08(SEQ ID NO：97)tgaAcctgcggaaActgcgCw^*02，某些Cw^*03，Cw^*04，Cw^*05，Cw^*06，某些Cw^*07，某些Cw^*12，Cw^*15，Cw^*1602，Cw^*17，Cw^*18 HLA-Cw09(SEQ ID NO：98gggccaggTtctcacaccACw^*17 HLA-Cw10(SEQ ID NO：99)cgcgggCatgaccagCw^*15HLA-Cw11(SEQ ID NO：100)cgccctgaaTgaggaccCw^*05，Cw^*08 HLA-Cw12(SEQ ID NO：101)gcggacaAGgcggctcagCw^*05，某些Cw^*08HLA-Cw13(SEQ ID NO：102)ggagcagTggagagcc某些Cw^*01，某些Cw^*02，某些Cw^*06，Cw^*12，Cw^*160401 HLA-Cw14gagggcGAgtgcgtgCw^*02，Cw^*0608，Cw^*0715，Cw^*17

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(SEQ ID NO：103)HLA-Cw15(SEQ ID NO：104)gctccgcGgatacctgCw^*17HLA-Cw16(SEQ ID NO：105)gatacctgAagaaTgggaaggaCw^*03HLA-Cw17(SEQ ID NO：106)aggtatttcGAcacCGccgtCw^*06，Cw^*07，Cw^*18HLA-Cw18(SEQ ID NO：107)cggcccgtACggcggagc某些Cw^*08HLA-Cw19(SEQ ID NO：108)agacacagaaCtacaagcgccCw^*0308，某些Cw^*07，Cw^*1208，Cw^*15HLA-Cw20(SEQ ID NO：109)cagAggatgtTtggctgcgCw^*04，Cw^*0708，Cw^*1210，Cw^*18HLA-Cw21(SEQ ID NO：110)gtctcacaTcctccagAggat某些Cw^*03，某些Cw^*07HLA-Cw22(SEQ ID NO：111)tggaccgcGgcggacacgCw^*120302，Cw^*17HLA-Cw23(SEQ ID NO：112)caaggattacatcgccctgaa与所有类型都反应(阳性对照，外显子3)

表7  用于确定HLA-DRB1/3/4/5基因型的探针碱基序列

    探针名称       碱基序列    活性HLA型HLA-DRN01(SEQ ID NO：113)gacagcgacgtggggggagt与所有类型都反应(阳性对照)HLA-DRN02(SEQ ID NO：114)ctggagcagGcgcgggB1^*15HLA-DRN03(SEQ ID NO：115)cggtatctgCacagaggcaB1^*09HLA-DRN04(SEQ ID NO：116)ggcctgatgAGgagtactgB1^*11HLA-DRN05(SEQ ID NO：117)acagcgacCAgggggag与任何类型都不反应(阴性对照)HLA-DRN06(SEQ ID NO：118)caggataagtAtgagtgtcatDRB5，B1^*15，B1^*16HLA-DRN07(SEQ ID NO：119)gttgctggaaagatGcatctataaccaagB1^*01

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HLA-DRN08(SEQ ID NO：120)ggaaagacgcGtccataaccaB1^*10HLA-DRN09(SEQ ID NO：121)aggaggagCTcctgcgcttB1^*12HLA-DRN10(SEQ ID NO：122)TataaccaAgaggagtAcgtgcgDRB4，B1^*01，B1^*04，B1^*08，B1^*09，B1^*10，B1^*11，某些B1^*13HLA-DRN11(SEQ ID NO：123)ggagcgagtgTggaacctgatDRB4，B1^*04，B1^*07，B1^*09，HLA-DRN12(SEQ ID NO：124)tttcttcaaCgggacggagDRB5，B1^*04，B1^*07，B1^*09，B1^*10HLA-DRN13(SEQ ID NO：125)tggagtactctacgKStgagtgtB1^*03，B1^*08，B1^*11，B1^*12，B1^*13，B1^*14HLA-DRN14(SEQ ID NO：126)ggaagacGAgcgggcc某些B1^*13HLA-DRN15(SEQ ID NO：127)cctgCtgcGgagCactg某些B1^*14HLA-DRN16(SEQ ID NO：128)ggtggacaATtactgcagacaDRB3，B1^*03，B1^*11，B1^*12，B1^*13，B1^*14HLA-DRN17(SEQ ID NO：129)tgGAgcagGttaaACAtgaGtgtB1^*04HLA-DRN18(SEQ ID NO：130)gGcCGggtggacaAcB1^*03HLA-DRN19(SEQ ID NO：131)ccgAggtggacacctaTTgDRB4，B1^*12，某些B1^*14HLA-DRN20(SEQ ID NO：132)aaccaGgaggagAAcgtgcB1^*03，某些B1^*14，某些B1^*13HLA-DRN21(SEQ ID NO：133)gcagcctaagAgggagtgtcaB1^*15，B1^*16HLA-DRN22(SEQ ID NO：134)tcctggaaagaCTcttctataaccaB1^*07HLA-DRN23(SEQ ID NO：135)cgggccCTggtggacB1^*08HLA-DRN24(SEQ ID NO：136)gacagatacttcCataaccaggaggDRB3，B1^*03，B1^*12，某些B1^*13，B1^*14，B1^*15，B1^*16

表8  用于确定HLA-DRB1基因型的探针碱基序列

     探针名称      碱基序列               活性HLA型HLA-DRS01(SEQ ID NO：113)gacagcgacGTgggggagt与所有类型都反应(阳性对照)HLA-DRS02(SEQ ID NO：130)gGcCGggtggacaAcB1^*03HLA-DRS03(SEQ ID NO：126)ggaagacGAgcgggcc某些B1^*13HLA-DRS04(SEQ ID NO：117)acagcgacCAgggggag与任何类型都不反应(阴性对照)HLA-DRS05(SEQ ID NO：133)gcagcctaagAgggagtgtcaB1^*15，B1^*16HLA-DRS 06(SEQ ID NO：135)cgggccCTggtggacB1^*08HLA-DRS07(SEQ ID NO：122)TataaccaAgaggagtAcgtgcgB1^*08，B1^*11，某些B1^*13HLA-DRS08(SEQ ID NO：137)CataaccaGgaggagtTcgtgB1^*15，B1^*16，某些B1^*14HLA-DRS09(SEQ ID NO：114)ctggagcagGcgcgggB1^*15HLA-DRS10(SEQ ID NO：116)ggcctgatgAGgagtactgB1^*11HLA-DRS11(SEQ ID NO：132)aaccaGgaggagAAcgtgcB1^*03，某些B1^*14，某些B1^*13HLA-DRS12(SEQ ID NO：138)cagaaggacCtcctggagcB1^*03，某些B1^*14HLA-DRS13(SEQ ID NO：139)cctggaAGaCaggcgcB1^*16，B1^*08，B1^*11，B1^*12，某些B1^*13HLA-DRS14(SEQ ID NO：121)aggaggagCTcctgcgcttB1^*12HLA-DRS15(SEQ ID NO：140)cagaaggacAtcctggaagacB1^*12，某些B1^*13HLA-DRS16(SEQ ID NO：131)ccgAggtggacacctaTTg某些B1^*12，某些B1^*14HLA-DRS17(SEQ ID NO：125)tggagtactctacgKStgagtgtB1^*08，B1^*12

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HLA-DRS18(SEQ ID NO：136)gacagatacttcCataaccaggaggB1^*03，B1^*12，B1^*15，B1^*16，某些B1^*13，B1^*14HLA-DRS19(SEQ ID NO：127)cctgCtgcGgagCactg某些B1^*14

实施例4：制备HLA寡聚核苷酸芯片

1)在寡聚核苷酸芯片的制备中使用NuricellInc.(韩国)或CellInc.(美国)的醛基化玻片。将100pmole/μl的连接氨基的探针与等量的3X SSC混合。将所得到的探针固定在玻片上并在室温下反应16小时。然后用0.2％的SDS清洗该玻片2次，每次5分钟，接着用蒸馏水清洗2次，每次5分钟。用加热至95℃的蒸馏水清洗2分钟后，用室温的蒸馏水清洗5分钟。

2)该玻片与硼氢化钠(1.3g NaBH₄，375ml PBS和125ml 100％EtOH)反应5分钟后，用0.2％的SDS清洗三次，每次1分钟，用蒸馏水清洗两次，每次1分钟，然后在室温下干燥。

3)通过将Coverwell Perfusion Chamber(SIGMA，美国)连接在玻片上分割出反应槽，用于HLA PCR的5种反应物各自反应。在使用前将制成的HLA寡聚核苷酸芯片于室温下储藏于暗处。

实施例5：与HLAPCR产物的杂交反应

1)将结合了若丹明或生物素的HLAPCR产物与杂交溶液(3X SSC和0.3％SDS)以1∶9的比例混合。当使用生物素引起荧光反应时，加入1μl/ml链霉抗生物素蛋白-花青苷进行反应。

2)向玻片的带盖的反应室中滴加90μl杂交缓冲液。该玻片在62℃下反应1小时。

3)在室温下用1X SSC清洗该玻片5分钟，用0.1X SSC清洗2分钟，然后在室温下干燥。

4)鉴定结果

使用Scanner(GenePiX4000，Axon仪器公司，美国)分析荧光探针以对HLA基因型进行鉴定。用发明人开发的HLA基因分型程序对其进行分析。

在表4～7中所示的碱基序列中，中间由大写字母表示的碱基是最重要的碱基序列。以所述碱基为中心，合成了约13～30bp的探针，其确定反映Tm和GC％的60-65℃。

结果如图2至6中所示。图中，在PCR和杂交反应中使用荧光引物和探针。使用GenePiX4000 Scanner(Axon仪器公司，美国)分析荧光探针，以对HLA基因型进行鉴定。使用由发明人开发的HLA基因分型程序对其进行分析。

HLA基因分型程序通过对位于本发明的HLA寡聚核苷酸芯片的每个室中的探针的结果进行分析，形成一个合适的标准化方法。该程序形成中间区域，它引入了能够划分阳性和阴性的界线值这一概念。我们基于所述界线值来判断探针是阳性还是阴性。通过将探针的阳性或阴性与程序中编制的阳性和阴性类型的对照表比较，分析相应得HLA基因型，对HLA基因型进行鉴定。

工业上的应用

本发明中，开发了一种寡聚核苷酸芯片，通过分析HLA基因用来诊断HLA-A、-B、Cw和DR基因型。使用该芯片的HLA基因分型，与通常使用的试剂盒相比，可以节约大量时间、材料成本和人工成本。即，本发明的HLADNA芯片仅通过一次实验就可以表现出HLA-A、-B、Cw和DR基因型，并且因为可以紧密地固定探针所以对于大量HLA等位基因只需要1个玻片，而通常的检测方法和试剂盒不能同时分析HLA-A、-B、Cw和DR基因型，因此实验必须分别进行。另外，本发明的方法使用了荧光材料，因此不需要颜色产生的步骤。本发明的方法也不需要通常方法所必需的许多步骤如清洗、颜色反应等，因此本发明的方法可以节约大量时间来得到期望的结果。

序列表

<110>博康有限公司

     吉诺切克有限公司

<120>用于分析人类白细胞抗原(HLA)基因型的寡聚核苷酸组合物及其检测方法

<130>PCT04-032

<150>KR1020040020155

<151>2004-03-24

<160>157

<170>KopatentIn 1.71

<210>1

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 01)的探针

<400>1

gtgggctacg tggacgaca                                                   19

<210>2

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 02)的探针

<400>2

gcgagccaga agatggagcc                                                  20

<210>3

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 03)的探针

<400>3

ctgaccgagc gaacctg                                                     17

<210>4

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 04)的探针

<400>4

attgggacgg ggagaca                                                     17

<210>5

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 05)的探针

<400>5

attgggaccg ggagaca                                                      17

<210>6

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 06)的探针

<400>6

tgcgctctgt gaccgc                                                      16

<210>7

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 07)的探针

<400>7

attgggacga ggagaca                                                     17

<210>8

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 08)的探针

<400>8

ggatcgcgct ccgctacta                                                   19

<210>9

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 09)的探针

<400>9

gggaccggaa cacacgg                                                    17

<210>10

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 10)的探针

<400>10

ttgggacctg cagacacgg                                                   19

<210>11

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 11)的探针

<400>11

gcaggagagg cctgagtat                                                   19

<210>12

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 12)的探针

<400>12

ctgaccgaga gagcctg                                                     17

<210>13

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 13)的探针

<400>13

cagattgacc gagtggacct g                                                21

<210>14

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 14)的探针

<400>14

cagactgacc gagtggacct g                                                21

<210>15

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 15)的探针

<400>15

ctgaccgagt ggacctg                                                     17

<210>16

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 16)的探针

<400>16

actcgcagtt cgtgcagtt                                                   19

<210>17

<211>14

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 17)的探针

<400>17

gagggccggt gcgt                                                        14

<210>18

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 18)的探针

<400>18

cgtggagtgg ctccgc                                                     16

<210>19

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 19)的探针

<400>19

tacctggatg gcacgtgc                                                   18

<210>20 

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 20)的探针

<400>20

ccagatgatg tttggctgc                                                   19

<210>21

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 21)的探针

<400>21

tggagggcac gtgcgt                                                     16

<210>22

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 22)的探针

<400>22

tggatggcac gtgcgt                                                     16

<210>23

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 23)的探针

<400>23

ggagcagcag agagccta                                                    18

<210>24

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 24)的探针

<400>24

caccatccag aggatgtatg gc                                               22

<210>25

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 25)的探针

<400>25

caccatccag atgatgtatg gc                                               22

<210>26

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 26)的探针

<400>26

cagatcaccc agcgcaag                                                    18

<210>27

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A27)的探针

<400>27

gagacggccc atgaggc                                                    17

<210>28

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 28)的探针

<400>28

gaggcggccc atgaggc                                                     17

<210>29

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A29)的探针

ttacatcgcc ttgaacgagg                                                  20

<210>30

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 30)的探针

<400>30

ttacatcgcc ctgaacgagg                                                  20

<210>31

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 31)的探针

<400>31

gcgggtatga acagcacgc                                                   19

<210>32

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 32)的探针

<400>32

ccatccagat gatgtatggc                                                  20

<210>33

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 33)的探针

<400>33

ccatccagat aatgtatggc                                                  20

<210>34

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 34)的探针

<400>34

agcagtggag agcctacc                                                    18

<210>35

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 35)的探针

<400>35

ctcagaccac caagcacaag tg                                               22

<210>36

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 36)的探针

<400>36

tcacaccgtc cagaggatgt atg                                              23

<210>37

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 37)的探针

<400>37

tcacaccctc cagaggatgt atg                                              23

<210>38

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 38)的探针

<400>38

tcacaccatc cagaggatgt atg                                             23

<210>39

<211>15

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 39)的探针

<400>39

gggtcggact ggcgc                                                       15

<210>40

<211>15

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 40)的探针

<400>40

gggt cggacg ggcgc                                                      15

<210>41

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 41)的探针

<400>41

ctgcgctctt ggaccgcg                                                    18

<210>42

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 42)的探针

<400>42

gccctcccgt tgattggag                                                   19

<210>43

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 02)的探针

<400>43

gcagctgaga acctacctg                                                   19

<210>44

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 03)的探针

<400>44

tatttcgaca ccgccatgtc                                                  20

<210>45

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 04)的探针

<400>45

cacccagctc aagtggg                                                     17

<210>46

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 05)的探针

<400>46

ggccggaata ttgggacc                                                    18

<210>47

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 06)的探针

<400>47

agacggcacg attgagaca                                                   19

<210>48

<211>14

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 07)的探针

<400>48

aggatggcgc cccg                                                        14

<210>49

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 08)的探针

<400>49

tagagcaaga ggggccg                                                     17

<210>50

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 09)的探针

<400>50

atctgcaagg ccaaggc                                                     17

<210>51

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 10)的探针

<400>51

gacttaccga gaggacctg                                                   19

<210>52

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B11)的探针

<400>52

gtatttccac accgccatgt                                                  20

<210>53

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 12)的探针

<400>53

ggtatttcca cacctccgtg                                                  20

<210>54

<211>14

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 13)的探针

<400>54

cgctggagcg cgcg                                                        14

<210>55

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 14)的探针

<400>55

caaggcccag gcacag                                                      16

<210>56

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 15)的探针

<400>56

cgggtatgac caggacg                                                     17

<210>57

<211>15

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 16)的探针

<400>57

gtggagtcgc tccgc                                                       15

<210>58

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 17)的探针

<400>58

acagaagtac aagcgccag                                                   19

<210>59

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 18)的探针

<400>59

tccagaggat gtttggctg                                                   19

<210>60

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 19)的探针

<400>60

tctcccagcg caagttgg                                                    18

<210>61

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 20)的探针

<400>61

acgacggcaa agattacatc g                                                21

<210>62

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 21)的探针

<400>62

cgggagacac agatctcc                                                    18

<210>63

<211>15

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 22)的探针

<400>63

gacc tggggc ccgac                                                      15

<210>64

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 23)的探针

<400>64

gttcgtgcgg ttcgaca                                                     17

<210>65

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 24)的探针

<400>65

cacatcatcc aggtgatgta tgg                                              23

<210>66

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 25)的探针

<400>66

agcgaggacg ggtctc                                                      16

<210>67

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 26)的探针

<400>67

ctacaccgct atgtcccg                                                    18

<210>68

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 27)的探针

<400>68

ggaaggacaa gctggagc                                                    18

<210>69

<211>14

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 28)的探针

<400>69

tggacggcac ccag                                                        14

<210>70

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 29)的探针

<400>70

ctacaccgcc gtgtcc                                                      16

<210>71

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 30)的探针

<400>71

gcttcatcac cgtgggcta                                                   19

<210>72

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 31)的探针

<400>72

ggacctggc tcctgg                                                       16

<210>73

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 32)的探针

<400>73

cgcgctccgc tactaca                                                     17

<210>74

<211>15

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 33)的探针

<400>74

ggagggcacg tgcgt                                                       15

<210>75

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 34)的探针

<400>75

cgagagaacc tgcggatc                                                    18

<210>76

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 35)的探针

<400>76

caccctccag tggatgtatc c                                                21

<210>77

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 36)的探针

<400>77

accctccaga atatgtatgg ctg                                              23

<210>78

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 37)的探针

<400>78

agtccgagag aggagccg                                                    18

<210>79

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 38)的探针

<400>79

agaggatgtc tggctgcga                                                   19

<210>80

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 39)的探针

<400>80

tatttctaca cctccgtgtc cc                                               22

<210>81

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 40)的探针

<400>81

ggagcaggac agagccta                                                    18

<210>82

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 41)的探针

<400>82

ggagcagcgg agagccta                                                    18

<210>83

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 42)的探针

<400>83

cgtgtggcgg agcagctgag a                                                21

<210>84

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 43)的探针

<400>84

ggagcagtgg agagccta                                                    18

<210>85

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 44)的探针

<400>85

gacgccacga gtccgaggat                                                  20

<210>86

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 45)的探针

<400>86

tccgcagaca cctggag                                                     17

<210>87

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 46)的探针

<400>87

cggaacatga aggcctcc                                                    18

<210>88

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 47)的探针

<400>88

gggtaccacc aggacgcc                                                    18

<210>89

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 48)的探针

<400>89

gaggacggag ccccgg                                                      16

<210>90

<21t>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 01)的探针

<400>90

cggagtattg ggaccgggag aca                                              23

<210> 91

<211>28

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 02)的探针

<400>91

catgaagtat ttcttcacat ccgtgtcc                                         28

<210>92

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 03)的探针

<400>92

gaggtatttc tccacatccg tgt                                              23

<210>93

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 04)的探针

<400>93

agacggcacg attgagaca                                                   19

<210>94

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 05)的探针

<400>94

tccgtgtcct ggcccggc                                                    18

<210>95

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 06)的探针

<400>95

cgcttcatct cagtgggcta                                                  20

<210>96

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 07)的探针

<400>96

agttcgtgca gttcgacag                                                   19

<210>97

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 08)的探针

<400>97

tgaacctgcg gaaactgcg                                                   19

<210>98

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 09)的探针

<400>98

gggccaggtt ctcacacca                                                   19

<210>99

<211>15

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 10)的探针

<400>99

cgcgggcatg accag                                                       15

<210>100

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 11)的探针

<400>100

cgccctgaat gaggacc                                                     17

<210>101

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 12)的探针

<400>101

gcggacaagg cggctcag                                                    18

<210>102

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 13)的探针

<400>102

ggagcagtgg agagcc                                                      16

<210>103

<211>15

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 14)的探针

<400>103

gagggcgagt gcgtg                                                       15

<210>104

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 15)的探针

<400>104

gctccgcgga tacctg                                                      16

<210>105

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw16)的探针

<400>105

gatacctgaa gaatgggaag ga                                               22

<210>106

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 17)的探针

<400>106

aggtatttcg acaccgccgt                                                  20

<210>107

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列    

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 18)的探针

<400>107

cggcccgtac ggcggagc                                                    18

<210>108

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 19)的探针

<400>108

agacacagaa ctacaagcgc c                                                21

<210>109

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 20)的探针

<400>109

cagaggatgt ttggctgcg                                                   19

<210>110

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 21)的探针

<400>110

gtctcacatc ctccagagga t                                                21

<210>111

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 22)的探针

<400>111

tggaccgcgg cggacacg                                                     18

<210>112

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 23)的探针

<400>112

caaggattac atcgccctga a                                                 21

<210>113

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-DR基因型(HLA-DRN 01)的探针

<400>113

gacagcgacg tgggggagt                                                   19

<210>114

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于分析HLA-DR基因型(HLA-DRN 02)的探针

<400>114

ctggagcagg cgcggg                                                      16

<210>115

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 03探针

<400>115

cggtatctgc acagaggca                                                   19

<210>116

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 04探针

<400>116

ggcctgatga ggagtactg                                                   19

<210>117

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 05探针

<400>117

acagcgacca gggggag                                                     17

<210>118

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 06探针

<400>118

caggataagt atgagtgtca t                                                21

<210>119

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 07探针

<400>119

gttgctggaa agatgcatct ataaccaag                                        29

<210>120

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 08探针

<400>120

ggaaagacgc gtccataacc a                                                21

<210>121

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 09探针

<400>121

aggaggagct cctgcgctt                                                   19

<210>122

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 10探针

<400>122

tataaccaag aggagtacgt gcg                                              23

<210>123

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 11探针

<400>123

ggagcgagtg tggaacctga t                                                21

<210>124

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 12探针

<400>124

tttcttcaac gggacggag                                                   19

<210>125

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 13探针

<400>125

tggagtactc tacgkstgag tgt                                              23

<210>126

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 14探针

<400>126

ggaagacgag cgggcc                                                      16

<210>127

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 15探针

<400>127

cctgctgcgg agcactg                                                     17

<210>128

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 16探针

<400>128

ggtggacaat tactgcagac a                                                21

<210>129

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 17探针

<400>129

tggagcaggt taaacatgag tgt                                              23

<210>130

<211>15

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 18探针

<400>130

ggccgggtgg acaac                                                       15

<210>131

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 19探针

<400>131

ccgaggtgga cacctattg                                                   19

<210>132

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 20探针

<400>132

aaccaggagg agaacgtgc                                                   19

<210>133

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 21探针

<400>133

gcagcctaag agggagtgtc a                                                21

<210>134

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 22探针

<400>134

tcctggaaag actcttctat aacca                                            25

<210>135

<211>15

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 23探针

<400>135

cgggccctgg tggac                                                       15

<210>136

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRN 24探针

<400>136

gacagatact tccataacca ggagg                                            25

<210>137

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRS 08探针

<400>137

cataaccagg aggagttcgt g                                                21

<210>138

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRS 12探针

<400>138

cagaaggacc tcctggagc                                                   19

<210>139

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRS 13探针

<400>139

cctggaagac aggcgc                                                      16

<210>140

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRS 15探针

<400>140

cagaaggaca tcctggaaga c                                                21

<210>141

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-A外显子2正义引物

<400>141

aaaccgcctc tgyggggaga agcaa                                            25

<210>142

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-A外显子2反义引物

<400>142

gatctcggac ccggagactg tgg                                              23

<210>143

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-A外显子3正义引物

<400>143

tcsgggccag gttctcacac c                                                21

<210>144

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-A外显子3反义引物

<400>144

gtgttggtcc caattgtctc ccctc                                            25

<210>145

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-B外显子2正义引物

<400>145

gctcccactc catgaggtat                                                  20

<210>146

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-B外显子2反义引物

<400>146

taracgcgcc tgggsctctc g                                                21

<210>147

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-B外显子3正义引物

<400>147

tacccggttt cattttcagt tg                                               22

<210>148

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-B外显子3反义引物

<400>148

attctccatt caasggaggg cgac                                             24

<210>149

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-Cw外显子2正义引物

<400>149

ctcccactcc atgargtatt t                                                21

<210>150

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-Cw外显子2反义引物

<400>150

taaaggygac tggggctctc t                                                21

<210>151

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-Cw外显子3正义引物

<400>151

tttacccggt ttcattttca gttt                                             24

<210>152

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-Cw外显子3反义引物

<400>152

gctgatccca ttttcctccc ctc                                              23

<210>153

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRB 1/3/4/5外显子2正义引物

<400>153

tccccacagc acgtttcttg                                                  20

<210>154

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRB1/3/4/5外显子2反义引物

<400>154

ccgctgcact gtgaagctct                                                  20

<210>155

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRB1外显子2正义-1引物

<400>155

tcctgtggca gcctaagagg                                                  20

<210>156

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRB1外显子2正义-2引物

<400>156

agcacgtttc ttggagtact ctacgtc                                          27

<210>157

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>HLA-DRB1外显子2正义-3引物

<400>157

gcacgtttct tggagtactc tacggg                                           26