一种治疗糖尿病或糖尿病肾病的药物组合物及其制备方法

摘要

本发明公开一种治疗糖尿病或糖尿病肾病的药物组合物及其制备方法。该药物组合物以中药黄柏，知母和肉桂的提取物为有效药用组分配伍而成。其中含黄柏生物碱成分，知母苷类成分和肉桂挥发油及多元酚类成分。本发明的药物组合物既可由黄柏、知母和肉桂单味药材分别提取后配伍混合，也可将药材合并提取。制备方法包括乙醇提取，大孔树脂吸附，洗脱，浓缩，干燥等步骤。

说明书

技术领域

本发明属制药领域，具体涉及一种用于治疗糖尿病或糖尿病肾病的中药有效组分组合物。具体为中药黄柏、知母及肉桂的有效组分配伍的药物组合物。

背景技术

世界卫生组织(WHO)连续数年的统计资料表明，糖尿病及其并发症已成为仅次于癌症和心脑血管病的严重危害人类健康的疑难病。目前糖尿病治疗药物主要有三大类：生物药胰岛素，化学药磺酰脲类、双胍类以及中成药类。胰岛素制剂价格昂贵，难以推广；化学药虽降糖作用明显，但对肝、肾等毒副作用较大，还容易导致心血管并发症加重等。中成药虽有一定治疗作用，但目前临床使用的多为粗提物制剂或医生自拟的处方汤药，缺乏药效显著，有效成份和作用机理清楚，质量可控，剂型先进的现代中药。

由黄柏、知母和肉桂三味中药组成的复方，最早收载于我国金代著名医家李杲编撰的《兰室秘藏》，称“通关丸”。《中华人民共和国药品标准，中药成方制剂第一册，WS3-B-0158-89》收载的“滋肾丸”，处方与“通关丸”相同，也由黄柏、知母和肉桂组成。古代和现代临床将该中药复方用于治疗淋证、癃闭等，如热蕴膀胱，小腹胀满，尿闭不通。

近年来，有关黄柏、知母和肉桂单味药材及其有效成分治疗糖尿病的研究较多。例如，《Acta Pharmacologica Sinica，2004，25：496-502》报道，小檗碱能促进胰岛素分泌，调节脂质代谢而具有抗糖尿病效果；《新中医，1997，29(3)：33-34》报道，黄连素(小檗碱)临床对II型糖尿病患者有效率为63.3％，不良反应小；《Exp Clin EndocrinolDiabetes，2004，112：520-525》报道，知母醇提物可刺激糖尿病大鼠分泌胰岛素而起到降血糖作用；《中草药，1996，17：605-606》报道，知母中的多糖类成分可显著降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖及肝糖元；《中国中医药信息杂志，2001，8：26》报道，肉桂挥发油具有明显的降低糖尿病小鼠血糖作用。

中国专利CN1127657A中公开了黄柏、知母和肉桂与其它药物组合制成的降糖胶囊具有治疗II型糖尿病的作用；CN1259383A中公开了黄柏、知母、边桂(即肉桂)与其它药物组合制成的降糖胶囊；CN1555817A中公开了黄柏、肉桂与其它药物组合制成的治疗糖尿病药膏；CN1370585A中公开了肉桂、知母与其它药物组合制成的治疗2型糖尿病的中药制剂；CN1088748A中公开了知母皂苷与其它其它成分组合制成的适合于糖尿病患者的保健食品；CN1386527A中公开了含有盐酸小檗碱的中药组合物具有治疗胃热型糖尿病的作用；CN1498545A中公开了桂皮醛与其它成分组合制成的用于糖尿病的食疗奶片；CN1475222A公开了花青素与其它成分组合制成的制剂具有降血糖作用。

但是，在上述对比文件中均没有公开只有黄柏、知母和肉桂三种药材的提取物制成的治疗糖尿病的药物制剂，也没有公开以黄柏中的生物碱类成分(小檗碱)、知母中的苷类成分(知母皂苷，知母宁)和肉桂中成分的挥发油类(肉桂醛)及多元酚类成分(原花青素)配伍组合制成的药物制剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种由中药黄柏、知母和肉桂的提取物为有效药用组分配伍的药物组合物，用于治疗糖尿病或糖尿病肾病。

在本发明提供的治疗糖尿病或糖尿病肾病的药物组合物中，各有效药用组分提取物以相当于其提取所用的药材重量比为：黄柏2份，知母1-8份，肉桂0.1-1份。在此基础上，各有效药用组分提取物以相当于其提取所用的药材重量比在以下范围内更为理想：黄柏2份，知母2份，肉桂0.3份。

在本发明药物组合物中，含有以下一种或多种有效成分：黄柏总生物碱含量≥10％[其中的小檗碱(Berberine)或盐酸小檗碱(Berberine Hydrochloride)含量≥1％；总生物碱含量用薄层分光光度法测定(时珍国医国药，1999年第8期)；小檗碱或盐酸小檗碱含量用高效液相色谱法测定(解放军药学学报，2004年第3期)]；知母总苷含量≥8％[其中知母皂苷A3(Timosaponin A3)含量≥0.3％；知母宁(Mangiferin)含量≥0.1％；知母总苷、知母皂苷A3和知母宁含量均用高效液相色谱法测定(中国药典2005年版)]；肉桂挥发油成分含量≥0.1％[其中肉桂醛(cinnamicaldehyde)含量≥0.05％；总挥发油和肉桂醛含量均用气相色谱法测定(药物分析杂志，2000年第2期)]，多元酚类成分含量≥1％[其中原花青素(procyanidins)含量≥0.05％；多元酚总成分含量用比色法测定(食品与发酵工业，2002年第3期)；原花青素含量用高效液相色谱法测定(天然药物研究与开发，2002年第4期)]。

本发明药物组合物可与适当的药剂辅料制成各种临床用药物制剂，如片剂，胶囊剂，滴丸剂，缓释控释制剂，颗粒剂，口服液，皮下给药及注射给药制剂等。

本发明药物组合物可通过以下方法制备。

黄柏提取物的制备：

方法1：取黄柏药材，粉碎，用50-90％乙醇回流(或渗漉)提取，过滤(或离心)，滤液(或上清液)回收乙醇并浓缩后用大孔树脂吸附，水洗脱杂质，再用65-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，干燥即得。提取物中总生物碱含量≥50％，其中小檗碱或盐酸小檗碱含量≥5％(含量测定方法同上)。

方法2：取黄柏药材，粉碎，用乙醇-盐酸混合溶剂(乙醇∶盐酸＝100∶0.5-3)回流(或渗漉)提取，过滤(或离心)，滤液(或上清液)用石灰水调PH至8.5-10，过滤(或离心)，滤液(或上清液)加氯化钠，用盐酸调PH至1-2，抽滤，干燥即得。提取物中总生物碱含量≥50％，其中小檗碱或盐酸小檗碱含量≥5％(含量测定方法同上)。

知母提取物的制备：

方法1：取知母药材，粉碎，用50-90％乙醇回流(或渗漉)提取，过滤(或离心)，滤液(或上清液)回收乙醇并浓缩后用大孔树脂吸附，水洗脱杂质，再用65-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，干燥即得。提取物中总苷含量≥30％，其中知母皂苷A3含量≥0.5％，知母宁含量≥0.2％(含量测定方法同上)。

方法2：取知母药材，粉碎，用50-90％乙醇回流(或渗漉)提取，过滤(或离心)，滤液(或上清液)回收乙醇并浓缩后，用正丁醇萃取，回收正丁醇，浸膏水溶后用大孔树脂吸附，水洗脱杂质，再用65-80％乙醇洗脱，回收乙醇，浓缩，干燥即得。提取物中总苷含量≥40％，其中知母皂苷A3含量≥0.8％，知母宁含量≥0.4％(含量测定方法同上)。

肉桂提取物的制备：

挥发油类成分的提取：

方法1：取肉桂药材，粉碎，置超临界流体萃取装置萃取柱内，采用二氧化碳作超临界流体进行萃取(压力25-35Mpa，流量2.0-3.0L/min，温度35-50℃)，得挥发油提取物，其中肉桂醛含量≥5％(含量测定方法同上)。

方法2：取肉桂药材，粉碎，用水浸泡湿润，置蒸馏器中，通入水蒸汽，收集冷凝后的馏出液，经油水分离，得挥发油，其中含肉桂醛≥1％(含量测定方法同上)。

多元酚类成分的提取：

方法1：取肉桂药材，粉碎，用50-80％乙醇渗漉(或冷浸或常温动态萃取)提取，过滤(或离心)，滤液(或上清液)回收乙醇并浓缩后，用大孔树脂吸附，水洗脱杂质，再用乙酸乙酯洗脱，回收溶剂，干燥，即得多元酚提取物，其中原花青素含量≥1％(含量测定方法同上)。

方法2：取肉桂药材，粉碎，用丙酮冷浸(或常温动态萃取)提取，过滤，滤液回收溶剂，用石油醚或三氯甲烷萃取脱脂，再用乙酸乙酯萃取，回收溶剂，干燥，即得多元酚提取物，其中原花青素含量≥1％(含量测定方法同上)。

将上述肉桂挥发油提取物和多元酚提取物混合，即得肉桂有效药用组分。

本发明的药物组合物既可由黄柏、知母和肉桂单味药材分别按上述方法提取后以相当于其提取所用的药材重量比为黄柏2份，知母1-8份，肉桂0.1-1份，或黄柏2份，知母2份，肉桂0.3份配伍混合，也可按以下方法将黄柏和知母两味药材合并提取后再与肉桂挥发油及多元酚提取物配伍混合，或将黄柏、知母和肉桂三味药材合并提取后再与肉桂挥发油配伍混合。

黄柏和知母两味药材合并提取：

取黄柏2份，知母1-8份，或黄柏2份，知母2份，合并粉碎，用50-90％乙醇回流(或渗漉)提取，过滤(或离心)，滤液(或上清液)回收乙醇，药液用弱极性或非极性大孔树脂吸附，用水洗脱杂质，再用60-80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，浓缩，干燥，即得含黄柏总生物碱和知母总苷的提取物。其中小檗碱或盐酸小檗碱含量≥2％，知母皂苷A3含量≥0.5％，知母宁含量≥0.2％(含量测定方法同上)。

该提取物与按上述方法提取的肉桂挥发油和多元酚提取物配伍混合，即可制成本发明药物细合物。

黄柏、知母和肉桂三味药材合并提取：

取黄柏2份，知母1-8份，肉桂0.1-1份，或黄柏2份，知母2份，肉桂0.3份，合并粉碎，用50-90％乙醇渗漉(或冷浸或常温动态萃取)提取，过滤(或离心)，滤液(或上清液)回收乙醇，药液用弱极性或非极性大孔树脂吸附，用水洗脱杂质，再用60-80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，浓缩，干燥，即得含黄柏总生物碱、知母总苷和肉桂多元酚的提取物。其中小檗碱或盐酸小檗碱含量≥1.5％，知母皂苷A3含量≥0.4％，知母宁含量≥0.3％，原花青素含量≥0.01％(含量测定方法同上)。

该提取物与按上述方法提取的肉桂挥发油配伍混合，即可制成本发明药物组合物。

将本发明药物组合物灌胃给予链脲霉素致糖尿病模型大鼠四周，观察其对随机血糖、空腹血糖、糖耐量、体重、胰岛素耐量及C肽等药理指标的影响，结果发现该药物组合物具有以下药理作用：

●糖尿病大鼠的随机血糖和空腹血糖明显下降，与模型组相比有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)。

●糖耐量试验表明，糖尿病大鼠在给糖前和给糖后30、60、90及120min时的血糖均明显低于模型组(p＜0.01)。

●对链脲霉素诱导的糖尿病大鼠体重有明显的恢复作用(p＜0.01)。

●在胰岛素耐量试验中，糖尿病大鼠在各个时间点的血糖水平都明显低于模型组(p＜0.01)。

●血清C肽水平检测表明，糖尿病大鼠的C肽水平明显高于模型组(P＜0.05)，表明血清中胰岛素水平明显恢复。

●糖尿病大鼠的24小时尿量和尿蛋白含量明显低于模型组(P＜0.01，P＜0.05)。

●糖尿病大鼠的尿肌苷明显上升，与模型组比较差异显著(P＜0.05)。

●糖尿病大鼠的肾指数明显低于模型组(P＜0.05)。

药理试验结果表明，本发明药物组合物具有显著的治疗糖尿病和糖尿病肾病作用。

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但不受实施例限制。

实施例1

取黄柏2份，知母2份，肉桂0.3份，合并粉碎，用70％乙醇渗漉提取，收集渗漉液，离心，上清液减压回收乙醇，药液用AB-8大孔树脂吸附，用1.5个柱体积的水洗脱杂质，再用5个柱体积的70％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，浓缩，干燥，即得含黄柏总生物碱、知母总苷和肉桂多元酚的提取物。其中盐酸小檗碱含量大于1.5％，知母皂苷A3含量大于0.4％，知母宁含量大于0.3％，原花青素含量大于0.01％(含量测定方法同上)。

实施例2

取肉桂药材0.3份，粉碎，置超临界流体萃取装置萃取柱内，采用二氧化碳作超临界流体进行萃取(压力30Mpa，流量2.0L/min，温度40℃)，得挥发油提取物，其中肉桂醛含量大于5％(含量测定方法同上)。

将实施例1制得的提取物与实施例2制得的提取物配伍混合，即得本发明药物组合物。

实施例3

取SD大鼠，体重200+5g，适应性饲养一周后，按55mg/kg腹腔注射链脲霉素，注射后第七天检测随机血糖，根据随机血糖水平进行随机分组，每组10只，两周后血糖水平基本稳定，开始分别口服本发明药物组合物(2g生药/kg)和阳性对照药盐酸二甲双胍(18mg/kg)治疗，给药四周后测定各组的随机血糖、空腹血糖、糖耐量、胰岛素耐量、体重等指标。结果如下：

1、对随机血糖的影响

链脲霉素致糖尿病大鼠经药物治疗四周后随机血糖情况

  组别   正常细   模型组   本发明  药物组合物  二甲双胍   血糖  (mmol/l)  5.2±0.18   30.75±3.05   19.11±3.82**   12.16±1.17** 

**与模型组比较有极显著差异P＜0.01

结果表明：链脲霉素导致大鼠随机血糖水平升高，与正常组相比有极显著差异；经分别用本发明药物组合物和阳性对照药盐酸二甲双胍治疗四周后，随机血糖水平大幅度下降，与模型组相比有极显著差异P＜0.01。

2、对空腹血糖的影响

链脲霉素致糖尿病大鼠经药物治疗四周后空腹血糖情况

  组别   正常组   模型组   本发明  药物组合物  二甲双胍   血糖  (mmol/l)  4.16±0.46   17.9±4.79   9.33±5.91*   6.54±1.13** 

*与模型组比较有显著差异P＜0.05

**与模型组比较有极显著差异P＜0.01

结果表明：链脲霉素导致大鼠空腹血糖水平升高，与正常组相比有极显著差异；经分别用本发明药物组合物和阳性对照药盐酸二甲双胍治疗四周后，空腹血糖水平大幅度下降，与模型组相比有显著差异(P＜0.05，P＜0.01)。

3、对糖耐量的影响

链脲霉素致糖尿病大鼠经药物治疗四周后糖耐量情况

**与模型组比较有极显著差异P＜0.01

结果表明：各组大鼠空腹8小时，测血糖后给予葡萄糖灌胃，剂量2g/kg，不同时间点采血测血糖。本发明药物组合物和阳性对照药二甲双胍在给糖前和给糖后30、60、90、120min的血糖均明显低于模型组P＜0.01。

4、胰岛素耐量实验

链脲霉素致糖尿病大鼠经药物治疗四周后胰岛素耐量情况

**与模型组比较有极显著差异P＜0.01

结果表明：模型组给予胰岛素后血糖水平在30分钟出现下降，60-120分钟之间变化不明显。治疗组本发明药物组合物和阳性对照药二甲双胍各时间点血糖水平明显低于模型组，有极显著差异P＜0.01，而且2-4小时之间治疗组血糖水平渐趋平稳，这与正常组的表现相似。

5、对体重的影响

链脲霉素致糖尿病大鼠经药物治疗四周后体重情况

  组别   正常组   模型组   本发明  药物组合物  二甲双胍  18mg/kg  体重  (g)  456±-35.1   223.75±8.26   316±57.2**   385±40.3** 

**与模型组比较有极显著差异P＜0.01

结果表明：链脲霉素导致大鼠空腹体重下降，与正常组相比有极显著差异；经用本发明药物组合物和阳性对照药盐酸二甲双胍治疗四周后，体重较模型组明显恢复(P＜0.01)。