羊膜3D基质组织工程支架羊膜平铺固定完全脱细胞方法及装置

摘要

本发明羊膜3D基质组织工程支架羊膜平铺固定完全脱细胞方法及装置，通过取羊膜用胰蛋白酶溶液浸泡，将羊膜平铺悬空夹放在支架上，并通过位于支架下方的旋转体旋转，使胰蛋白酶液体产生旋涡进行冲洗，直至将羊膜上皮细胞层的上皮细胞和纤维母细胞层的纤维母细胞全部冲掉。本发明由于半透膜的羊膜在漩涡水流的作用下使上皮细胞层的上皮细胞和纤维母细胞层的纤维母细胞随着水流而脱下。本发明的方法简单，成本低，便于批量生产，为实现组织工程大规模产业化创造了条件，具有良好的经济效益和社会效益。

说明书

技术领域

本发明涉及制造人体器官和组织的组织工程领域，特别是一种羊膜3D基质组织工程支架羊膜平铺固定完全脱细胞方法及装置。

背景技术

组织工程是用生物工程学方法制作人体组织和器官的科学，其中支架(供细胞生长的细胞外基质)是组织工程方法的一个重要方面。目前已经出现的组织工程支架除化学合成支架、生物提取物外，还有自然衍发基质(如：用尸体的皮肤、阔筋膜、头发、羊膜制作支架)。对于自然衍发基质(3D基质)，它含有细胞所需要的各种整合素生物信息，因此用自然衍发基质制作组织工程支架是最佳方案。研究证明在这些自然衍发基质中，羊膜是公认的抗原性很低的材料，且来源广泛，成本几乎是零。现有技术中，中国专利申请021163057公开了一种羊膜完全脱细胞的方法。该方法用胰蛋白酶溶液浸泡羊膜；然后固定羊膜进行搅拌冲洗，将羊膜上皮细胞层的上皮细胞和纤维母细胞层的纤维母细胞冲掉。它是在不使用氨水等破坏生物信息物质的条件下，将羊膜上的所有细胞都脱掉，因此可以保留富含各种整合素生物信息的羊膜基质，用作3D组织工程支架，有利于细胞外不同的生物信息传导到细胞核，从而支配细胞的生存、分裂、增殖、功能、衰老和细胞的运动。但是，该方法对于如何固定羊膜没有找到更好的方法，导致脱细胞的效率受到影响。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的问题，而提供一种羊膜3D基质组织工程支架羊膜平铺固定完全脱细胞方法及装置。该方法通过胰蛋白酶溶液浸泡与平铺固定羊膜，并通过浸泡溶液产生漩涡水流更有效地作用于羊膜，而使羊膜表面和内部的所有细胞都被脱掉。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

羊膜3D基质组织工程支架羊膜平铺固定完全脱细胞方法，其特征是包括以下步骤完成：

(1)取羊膜，用胰蛋白酶溶液浸泡；

(2)将羊膜平铺悬空夹放在支架上；

(3)开动位于支架下方的旋转体，使胰蛋白酶液体产生旋涡进行冲洗，直至将羊膜上皮细胞层的上皮细胞和纤维母细胞层的纤维母细胞全部冲掉。

本发明专用于羊膜3D基质组织工程支架羊膜平铺固定完全脱细胞方法的装置，它包括装有液体的容器和旋转体。其特征是容器底部固定有一个或多个用来平铺悬空夹放羊膜的支架，而旋转体对应安装在每个支架的下方。

有益效果

本发明提供的羊膜3D基质组织工程支架羊膜平铺固定完全脱细胞方法及装置，由于在脱细胞过程中，经过浸泡的羊膜平铺固定在支架上，半透膜的羊膜在搅动的水流作用下使上皮细胞层的上皮细胞和纤维母细胞层的纤维母细胞随着水流而脱下。其中，旋转的水流漩涡对羊膜的下表层产生湍流冲洗效果，而对羊膜的上表层在负压下产生层流冲洗效果，部分液体从羊膜中穿过，从而得到完全去除了上皮细胞层的上皮细胞和纤维母细胞层的纤维母细胞的羊膜。本发明的方法简单，成本低，便于批量生产，为实现组织工程大规模产业化创造了

附图说明

图1专用装置示意图主视图；

图2专用装置示意图俯视图。

具体实施方式

本发明羊膜3D基质组织工程支架羊膜平铺固定完全脱细胞方法通过以下步骤完成：

(1)取羊膜，用0.2-5％的胰蛋白酶溶液，在37℃温度下浸泡羊膜20-30分钟；

(2)将羊膜裁剪成适合大小，然后平铺悬空夹放在支架上；

(3)开动位于支架下方的旋转体，使胰蛋白酶液体产生旋涡进行冲洗，直至将羊膜上皮细胞层的上皮细胞和纤维母细胞层的纤维母细胞全部冲掉。

本发明也可以通过以下步骤完成：

(1)取羊膜，用0.2-5％的胰蛋白酶溶液，在37℃温度下浸泡羊膜20-30分钟；

(2)将羊膜裁剪成适合大小，然后平铺悬空夹放在支架上；

(3)开动位于支架下方的旋转体，使胰蛋白酶液体产生漩涡进行冲洗；

(4)关闭旋转体，取下支架上的羊膜，将其翻转后仍夹放在支架上；

(5)继续开动支架下方的旋转体，使胰蛋白酶液体产生旋涡进行冲洗，直至将羊膜上皮细胞层的上皮细胞和纤维母细胞层的纤维母细胞全部冲掉。

冲洗可以在浸泡过程中开始进行，或在浸泡后再开始进行。

本发明的专用装置，由装有液体2的容器1和旋转体8等组成。它是在容器的底部固定一个或多个用来平铺悬空夹放羊膜的支架6，旋转体可以是叶轮或磁棒，对应安装在每个支架的下方。接通电源即可旋转工作。

支架则由支撑腿7、内夹环4和外夹环3组成。其中，内夹环固定在三个支撑腿的顶部，外夹环套于内夹环外，二者之间留有可夹放并固定羊膜5的间隙。为此，也可将外夹环制成可调节式，以保证得到合适的间隙。