用于治疗高动脉压、其它心血管疾病和它的并发症的血管紧张素IIAT1受体拮抗剂的制剂的制备

摘要

使用环糊精、它们的衍生物和/或可生物降解的聚合物制备用于治疗高动脉压、其它心血管疾病和它们的并发症的AT1受体拮抗剂制剂。迄今为止，在现有技术中没有发现将AT1

说明书

发明领域

本发明包括使用环糊精或它们的衍生物、脂质体和可生物降解的聚合物制备用于治疗高动脉压、其它心血管疾病和它的并发症的新的血管紧张素II AT1受体拮抗剂的制剂的方法。

发明背景

在世界上大部分国家，15％-25％的成年人群出现高动脉压(MacMahon，S等人，Blood pressure，stroke，and coronary heartdisease，Lancet 335：765-774，1990)。心血管风险随动脉压水平增大：动脉压越高，则冠脉事件的风险越高。高血压被认为是引起冠脉、大脑和血管性肾病的主要因素，它是成人死亡和能力丧失的首要病因。

在全世界，心衰是60-80岁年龄组住院治疗的主要病因。人群老化本身已是其发生率增大的一个因素：但1％的表现心衰的个体的年龄在25-54岁之间，中年个体的发生率大大升高，而75岁以上年龄的个体达到10％的水平(Kannel，W.B等人，Changing epidemiologicalfeatures of cardiac failure，Br.Hear J 1994；72(suppl 3)：S3-S9)。

心衰，由于其临床特征，是一种限制性疾病，它随着病情的加重而降低患者的生活质量，且在多数严重的情况下，表现出恶性疾病的特征，其在第一年的死亡率超过60％，甚至现在的情况也如此(Oliveira，M.T.Clinical features and prognosis of patients with high congestedheart failure，College of Medicine USP，1999)。据估计，仅在工业化世界中，超过1500万的人受其影响，例如仅在美国1973-1990间的病例数已增加450％例(Kannel，W.B.等人，Changing epidemiologicalfeatures of cardiac failure，Br.Hear J 1994；72(suppl 3)：S3-S9)。

高血压是复杂的、多因素的、高度流行的疾病，导致多种有害影响和高发病率和死亡率(Kaplan，N.M.Blood pressure as acardiovascular risk factor：prevention and treatment.JAMA.275：1571-1576，1996)。为了提高对疾病的认识，已在一般人群和特定小组中进行无数的用于评价疾病控制的效率的研究。如果不对相关的风险因素(糖尿病、肥胖、抽烟)进行广泛的非药物和/或药物治疗而进行血压控制，则可能大大减少死亡疾病中高动脉压的长期治疗的优点(Wilson，P.W.等人，Hypertension.Raven Press.94114)。

高血压是最能导致心血管动脉硬化的病理(联合国家委员会关于高血压的检测、评价和治疗的第5次报告，国家健康研究所(VJNC).Arch，Intem，Med.153：154-181，1994)。据统计，四分之一的美国人是或将是高血压患者，且据估计478万人患心衰。每年诊断出40万新病例，导致80万住院患者和178亿美元的治疗成本。

在巴西，来自SUS(Sistema Unificado de Saude)的数据已表明在1997年，心衰是心血管疾病中主要的住院治疗的病因，导致政府用于其治疗的花费为15亿雷亚尔，其数量等于所有健康者费用的4.6％(Filho，Albanesi F.Heart failure in Brazil.Arq.Bras.Cardiol.71：561-562，1998)。

血管紧张素II(Ang II)，一种有效的血管收缩药，是最重要的肾素-血管紧张素系统(RAS)的活性激素，且它是构成高血压的病理生理学的一个重要的决定性因素。Ang II直接或间接地增加外周阻力。它直接产生小动脉血管收缩，并在较小程度上收缩毛细血管后微静脉，而在毛细血管后微静脉处发现大量血管紧张素II AT1受体。Ang II介导的动脉收缩增加血管阻力，它是在动脉压升高中所涉及的一个基本的血液动力学机理。收缩强度在肾脏中较高，而在脑、肺和骨胳肌中较低。Ang II还导致肾上腺醛固酮释放。醛固酮释放通过增加肾脏钠和水的重吸收以及钾的排泄而增加血液体积(Frohlich，E.D.，Angiotensin converting enzyme inhibitors.Hypertension 13(suppl I)：125-130，1989)。据信这增加了动脉压，作为对心输出量增加的反应，心输出量增加是动脉压升高中的第二基本血液动力学机理。已提出Ang II引起的肾上腺髓质的儿茶酚胺的释放和神经末梢去甲肾上腺素的释放的刺激和中枢神经系统的活化导致交感神经放电增加(Goodman和Gilman′s，The Pharmacological Basis of Therapeutics8th ed.Pergamon Press，New York，p755，1990)。

RAS是一种内分泌系统，其中肾素作用于来自肝的血管紧张素原以在血浆中产生血管紧张素I。然后通过血管紧张素-转化酶(ACE)的作用将此肽转化为Ang II。因此，Ang II通过血流被带至它的靶器官，以选择性方式与血管紧张素II AT1受体结合(Sasaki，k.等人，Cloningand expression of a complementary DNA enconding a bovine adrenalangiotensin II receptor type-1.Nature，351：230-233，1991)。

高血压治疗的目标不仅在于减少健康护理花费，还在于预防靶器官损害，它通过改变生活质量和在需要的情况下使用药物来实现(联合国家委员会关于高血压的检测、评价和治疗的第5次报告，国家健康研究所(VJNC).Arch，Intem，Med.153：154-181，1994)

所有患有心脏收缩期动脉压高于180mmHg或心脏舒张期动脉压高于110mmHg的患者必须接受药理学治疗，而不管存在其它因素与否(Report the Canadian Hypertension Society.Consensus Conference.3.Pharmacologic treatment of essential Hypertension.Xan.Med.Assoc.J.149(3)：575-584，1993)。

但是，自从60年代以来，抗高血压药物成为高动脉压治疗中的一个重要的工具(Menard，J.Anthology of the renin-angiotensin system：A one hundred reference approach to angiotensin II antagonists.J.Hypertension 11(suppl 3)：S3-S11，1993)。在过去的四十年中，药理学研究产生新型治疗高血压的药物：60年代的利尿剂，70年代的β阻断剂，80年代的钙离子通道阻断剂和血管紧张素-转化酶抑制剂，以及90年代的血管紧张素II AT1受体拮抗剂。

ACE抑制剂(ACEI)能够抑制血管紧张素I转化为Ang II。因此，将Ang II的血管收缩作用最小化。初步研究表明，替普罗肽，临床使用的第一抑制剂，在通过静脉内途径给药时具有抗高血压作用，但通过口服途径无效。此事实大大地限制了它的应用。

目前已知ACE是一种多作用酶，这意味着它作用于多种底物。除了用作血管紧张素I和缓激肽的二肽酶以外，它能够水解多种肽，这表明此酶可以作用于多种组织。

ACEI在单一治疗给药时是优良的。ACEI引起60-70％的高动脉压患者的动脉压较快下降(Ganong，W.Neuropeptides incardiovascular control.J.Hypertens 2(suppl 3)：1522，1984)。它们一般被良好地耐受，但它们的应用可能带来不利的副作用和反应，其中有些相对严重，其中有血管神经性水肿和干咳(8-10％)。

第一种尝试是从70年代初开始开发Ang II拮抗剂，并将努力倾注于开发类似于Ang II的肽，沙拉新(1-sarcosina，8-异亮氨酸血管紧张素II)是第一种。但是，这些衍生物在临床不被接受，因为它们还表现出部分激动活性。在1982年，开发出两种血管紧张素II AT1受体的第一非肽拮抗剂(S-8307和S-8308)。但是，尽管它们具有高度特异性和不具有激动活性，但它们表现为与Ang II受体的弱结合。通过对这两种前物分子结构进行一系列改变，开发出新的有效的口服和高特异性的产品，氯沙坦。从那时起，开发出许多其它非肽拮抗剂，如坎地沙坦酯(candesartan)、伊贝沙坦(irbersatan)、缬沙坦(valsartan)、替米沙坦(telmisartan)、依普沙坦(eprosartan)、他索沙坦(tasosartan)和zolosartan。

氯沙坦是一种化学描述为2-丁基-4-氯-1-[[2′-(1H-四唑-5-基)[1，1′-联苯]-4-基]甲基]-1H-咪唑-5-乙醇的一钾盐的分子。它的经验式为C₂₂H₂₂CIKN₆O，一种完全透明的粉末，白色和灰色，自动流动且摩尔量为461.01g/mol。它被快速地吸收并表现出33％的生物利用度，并在1小时内达到最高浓度峰，其半衰期为大约2小时。它溶于水，溶于醇并微溶于常规有机溶剂，如乙腈和甲基-乙基-紫罗兰酮。氯沙坦单独通过一种新的、特异性的和选择性的作用机理降低动脉压：阻断AngII受体，而不管Ang II的来源和产生方式。氯沙坦不阻断心管调节中的其它激素受体、酶或重要的离子通道。

咪唑环中5-羟基甲基的氧化产生氯沙坦的活性代谢产物，称为EXP-3174。通过测定血浆中氯沙坦引起的肾素活性和Ang II水平增大而得知，氯沙坦的单一作用机理可能不同于ACE的抑制作用(Tavares，Agostinho等人，Antagonists of the Receptors of the Angiotensin II，Pharmacology and Cardiovascular Therapeutics，305-315，1998)。在氯沙坦的给药期间，肾素活性增加，导致血浆中Ang II的增多。在中断氯沙坦给药之后，肾素活性和Ang II的水平恢复到治疗前水平。可以在尿和粪中检测大约92％的口服剂量的氯沙坦；5％排出的为氯沙坦，8％为EXP-3174而剩余为非活性代谢产物(Meintyre，M.等人，Losartan，an orally active angiotensin ANGIOTENSIN II AT1受体拮抗剂：a review of its efficacy and safety in essential hypertension.Pharmacol.Ther.74(2)：181-194，1997)。

缬沙坦(1-氧戊基-N′[[2′-(1H-四唑-5-基)[1，1′-联苯]-4-基]甲基]-L-香草醛)是一种受体AT1的竞争性拮抗剂，表现出25％的生物利用度，其半衰期为9小时，在大约2小时后达到最高峰。它最小被代谢，并具体通过粪排出，且仅15-20％出现在尿中(Criscione，L.de Gasparo等人，Pharmacologicai profile of Valsartan.Br.J.Pharmacol 110：761-771，1993)。如果与阿替洛尔、西咪替丁、地高辛、速尿一起给药，则它表现出增强其效果的药代动力学相互作用。

伊贝沙坦(2-丁基-3-[[2′-(1H-四唑-5-基)[1，1′-联苯]4-基1，3-二氮杂螺[4，4]-壬-烯-4-酮)是一种竞争性血管紧张素II AT1受体拮抗剂。它基本上通过氧化代谢，它呈现的峰浓度在1.5和2小时之间，而半衰期约为11-15小时(Nisato，D.A review of the new ANGIOTENSIN IIantagonist irbesartan.Cardiovasc Drug Rev)。它的有效性为60-80％，且主要通过胆汁排泄(80％)。

坎地沙坦酯(2-乙氧基-1-[[2′-(lH-四唑-5-基)联苯-4-基]甲基-1H-苯并咪唑-7-甲酸)，表现出对血管紧张素II AT1受体的高度亲合力，且它缓慢地解离，表现的半衰期为9小时，生物利用度为大约40％，且它估计主要通过尿和胆汁排泄(Shibouta，Y等人，Pharmacologicalprofile of a highly potent and long-acting ANGIOTENSIN II受体拮抗剂，J.Pharmacol.Exp.Ther.266：114-120，1993)。当它与(硝苯地平、地高辛或优降糖)一起给药时表现出更好的结果。

依普沙坦((E)-a-[[2-丁基-1-[(4-羧基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]亚甲基]-2-噻吩丙酸)，还具有对血管紧张素II AT1受体的高度亲合力，其生物利用度为13-15％，最大浓度出现在大约2小时。大约90％通过粪便排除，剩余在尿中(Ruddy，Michael C等人，Angiotensin II受体拮抗剂s.71：621-633，1999)。

替米沙坦(4′-[(1，4′-二甲基]-2′-丙基[2，6′-二-1H-苯并咪唑]-1′-基)甲基]1，1′联苯]-2-甲酸)是一种竞争性血管紧张素II AT1受体抑制剂，其表现的生物利用度为45％。它主要通过胆汁排出(97％)(Ruddy，Michael C等人，Angiotensin II受体拮抗剂.71：621-633，1999)。

血管紧张素-(1-7)，(Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro)及其衍生物Sar1-Ang-(1-7)还对抗Ang II在人(Ueda等人，Mol.Biol.Cell 11：259A-260A suppl.S Dec 2000)和大鼠中的压力效果。还通过血管紧张素-(1-7)减少由Ang II引起的兔和人的分离的动脉收缩(Roks等人，Eur.Heart J 22：53-53 Suppl.S Sep，2001)。

US4340598(CA1152515、JP56071073、EP0028833、DE3066313D)，Yoshiyasu，Toyonara等人(1982)已开发出一种获得新的抗高血压化合物的方法：通过用苯基、卤素、硝基或氨基取代咪唑环以获得咪唑衍生物。这些化合物表现出对血管紧张素II AT1受体的优良拮抗活性，并被用作降压药。

US4576958(US4372964)，Wexler，Ruth R.(1986)，已开发出4，5-二芳基-1H-咪唑-2-甲醇的某些衍生物，这些化合物由于其血管舒张性能而表现出抗高血压效果。这种发现基于一系列的化学反应，其中有Friedel-Crafts酰化、在甲酰氨中回流和氧化。

US4598070(CA1215359、DK 356684、EP135044、ES8506757、GR82322、JP60025967)，Mashiro，Kawahara等人(1986)，已开发出一种基于在抗高血压药、曲帕胺和环糊精(-环糊精和-环糊精)之间的包含化合物的制备的发明。使用环糊精导致曲帕胺溶解度的提高。

US4666705，de Crosta，Mark.T.等人，(1987)已提出一种新的用于治疗高血压的药物控制释放系统。使用一种ACE抑制剂，卡托普利，因为它快速吸收，其半衰期为2小时。为了延长它在机体中的存在，使卡托普利与聚合物或共聚物结合，以片剂形式存在。所用的聚合物是(聚乙烯吡咯烷酮)(PVP)，而所用的技术是干法制粒。结果是，药物持续时间从4小时增至6小时。

US5064825，Chakravarty，Prasun，K.等人(1991)，已获得新的咪唑环衍生物，其表现为七元环并表现出对血管紧张素II AT1受体的拮抗活性。

US5073641，Bundgaard，Hans等人(1991)，已获得新的羧酸的酯衍生物作为ACE抑制剂。其中发现乙酯，喷托普利在人血浆中非常稳定。

US5171748(JP3005464、CA2017065、EP0399732)，Roberts，David等人(1992)，还已获得新的咪唑环的杂环衍生物，它对抗血管紧张素II的作用。

US5256687，Becker，Reinhard等人，(1993)，已要求一种由与利尿剂(速尿或吡咯他尼)结合的ACE抑制剂(Tandolpril或Pamipril)组成的药物组合物，和它在高血压治疗中的应用，这种方法增加ACE抑制剂的效力。

US5266583，Otawa，Masakatsu(1993)，已分离一种氯沙坦的代谢产物，其表现出对血管紧张素II AT1受体的拮抗活性。

US5519012，Fercej-Temeljoov，Darja等人(1996)，已要求一种新的抗高血压药，1，4-二氢吡啶和甲基-β-环糊精和其它衍生物如环糊精羟基化物(hydroxilate)的包含化合物。

US5728402，Chen，Chih-Ming等人(1998)，已要求一种含有内相和在胃中不溶的外相的药物组合物的制备和应用，所述内相包含卡托普利(ACE抑制剂)和水凝胶。这种制剂导致药物吸收的持续时间增加。

US5834432，(AU5990796、CA2221730、EP0828505、W009639164、JP115073625)，Rodgers，Kathlen Elizabeth等人(1998)，使用AT₂受体激动剂改善伤口愈合。

US5859258(HR970565、CN124186、SK57099、EP0937068、AU5089898)，Breen，Patrick等人(1999)，已研制出一种通过加入溶剂(其中有异丙醇、水、环己烷)，然后蒸馏而使血管紧张素II AT1受体拮抗剂，氯沙坦结晶的方法。

AU200012728-A，Anker，SD和Cats，Aj.S.(1999)，已开发出一种新的咪唑环衍生物，它在口服时比咯沙坦更有效。

WO9916437，Remuzzi，Giuseppe(1999)，已开发出一种新的咪唑衍生物。所得的药物能够提高肾和心脏移植患者的存活率。

WO0110851，Galbiat Barbara Via Goidomi(1999)等人已提出一种赖氨酸-羧酸酐，一种在赖诺普利的合成中的中间产物的制备方法。

WO0037075，Synthelabo，Elizabeth Sanofi等人(1999)要求血管紧张素II AT1-受体拮抗剂(Irbesartan)和免疫抑制剂(环孢菌素)的组合应用。发现这种组合对心血管问题的治疗是有效的。

US6087386(W09749392A1)Chen，Tzyy-Show H.等人(2000)要求一种含有一层氯沙坦(血管紧张素II AT1受体拮抗剂)和其它的马来酸盐铥依拉普利(ACE抑制剂)层的药物的制备和应用。这种制剂导致药理学作用提高，降低副作用并延长吸收。

US6096772(AU1184097、AU706660、CA2225175、HU9901448、CN1192681、JP11507921T、ZA9604690)，Fandriks，Lars等人将血管紧张素II AT1受体拮抗剂用于治疗或预防dispeptidic综合征。

US6178349，Kieval，Roberts S.等人(2001)已开发出一种用于治疗心血管疾病的基于通过神经刺激释放药物的装置。这种装置由与神经相连的电极、可植入脉冲发生器和含有欲应用的药物的贮器组成。使用期间，电极和药物的释放刺激神经，从而影响对心血管系统的控制。

发明内容

已开发出多种方法，以获得更为有效和/或较小毒性的治疗高动脉压的药物。这可以从大量被认定为现有技术的专利来看出。但是，这些方法仍带来严重的副作用，且所得的药物经常表现出半衰期短和生物利用度低。因此本发现包括血管紧张素II ATI-受体拮抗剂的控释系统的制备和应用，使用将药物半衰期从9小时增至60小时的环糊精和它们的衍生物，导致拮抗剂在生物系统中的生物利用度增加。这意味着所得的制剂提供一个作为用于治疗温血动物的高血压的可选择的药物的巨大潜力。

可以化学修饰特定的药物以改变它的性能如生物分布、药代动力学和溶解度。已使用多种方法增加药物的溶解度和稳定性，其中有使用有机溶剂，将它们结合在乳剂或脂质体中，调节pH，对它们进行化学修饰和将它们与环糊精络合。

环糊精是寡糖环家族，它包括六、七或八个单位的吡喃葡萄糖。由于空间的相互作用，环糊精，CD′s，形成具有非极性内部空腔的(圆锥形截断结构(truncado))形状的环式结构。它们是化学稳定的化合物并可以区域选择性方式被修饰。环糊精宿主与它们空腔内的多种疏水客体形成配合物。CD’s已用于药物、香料和香精的增溶和胶囊化，如Szejtli，J.，Chemical Reviews，(1998)，98，1743-1753.Szejtli，J.，J.Mater.Chem.，(1 997)，7，575-587所述。

根据在[Rajewski，R.A.，Stella，V.，J.Pharmaceutical Sciences，(1996)，85，1142-1169]所述的关于环糊精的毒性、突变性、畸变性和致癌性的详细研究，Szejtli，J.Cyclodextrins：properties and applications.Drug investing.，2(suppl.4)：11-21，1990报道提供了特定的低毒性的(羟基丙基-β-环糊精)。除了某些高浓度的导致对eritrocites的损害的某些衍生物之外，这些产物一般对健康无害。在诸如日本和匈牙利的国家已许可将环糊精用作食物添加剂，而在法国和丹麦许可用于更为特殊的应用。除此之外，它们可以从酰胺降解的可再生来源获得。所有这些特征是关于新应用的研究发现的极大动力。CD分子结构类似于圆锥形截断结构，其中Cn大约对称。主要的hydroxilas位于此圆锥的最窄侧而，通过分子内氢连接，这种组分具有足够的灵活性以允许在规则形状中发生相当的偏离。

已知的环糊精衍生物可以根据它们的极性、尺寸、生物活性等分类。它们的实际应用分类如下：1.生物活性物质的载体(，助溶剂、稳定剂)；2.酶模型；3.分离剂(用于色谱处理或批处理)；4.催化剂或添加剂(作为洗涤剂、粘度改性剂等)，L.Szente和J.Szejtli，Adv.DrugDeliv.Rev.36(1999)，17。CD′s在水、甲醇和乙醇中具有适中的溶解度，并快速地溶于极性溶剂，如二甲亚砜、二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺哌啶。

文献中存在多种关于增大在水中溶解度小的客体在水中的溶解度的研究工作，在以下文献中描述了通过使用包含化合物而使用环糊精：Szejtli，J.，Chemical Reviews，(1998)，98，1743-1753.Szejtli，J.，J.Mater.Chem.，(1997)，7，575-587。

为了设计一种药物递送系统(DDS)，正开发多种高性能载体材料以在必需的时间内同时有效和准确地将必需量的药物递送至靶部位。

环糊精、可生物降解的或不可生物降解的聚合物、脂质体、乳剂、多乳剂是用于这种作用的潜在的候选物，因它们能够改变客体分子的物理、化学和生物性能。除了环糊精以外，已研究了许多药物递送系统，包括聚合物微胶囊、微颗粒、脂质体和乳剂。这些物质中的许多由合成的可生物降解的聚合物，如聚酐和聚(羟基酸)制备。在这些系统中，药物结合在聚合物微球中，它们在数天、数月或直至数年期间内，在机体内以少量和受控的日剂量方式释放药物。

已在控释系统中测试多种聚合物。例如测试聚氨酯的弹性，测试聚硅氧烷或硅的良好绝缘性，测试聚甲基-甲基丙烯酸酯的物理作用力，测试聚乙烯醇的疏水性和电阻，测试聚乙烯的硬度和不渗透性(Gilding，D.K.Biodegradable polymers.Biocompat.Clin.Impl.Mater.2：209-232，1981)。可生物降解的聚合物和生物相容聚合物已被广泛地研究，作为用于控释系统的赋形剂，因为它们能够经历表面降解。这类聚合物可以选自聚(2-羟基-乙基甲基丙烯酸酯)、聚丙烯酰胺、来自乳酸的聚合物(PLA)、来自乙醇酸的聚合物(PGA)和各种成分共聚合物、(PLGA)和聚(酐)，如Tamada和Langer，J.Biomater.Sci.Polym.Edn，3(4)：315-353所述。

本发明的制剂还可以包括其它组分，如药学上可接受的赋形剂。例如，可以在欲被保护的动物能够耐受的赋形剂中制备本发明的制剂。赋形剂还可以包含少量添加剂，如提高缓冲剂的等渗性和化学稳定性的物质。标准制剂可以是注射液体或可以回收于适宜的液体成为用于注射或口服制剂的悬浮液或溶剂的固体。适宜的控释赋形剂包括但不限于生物相容聚合物，其它聚合物基质、胶囊、微胶囊、纳米胶囊、微颗粒、纳米颗粒、大丸剂、渗透泵、扩散装置、脂质体、脂球和透皮递送系统，它们是可植入或不可植入的

在过去几年中，已研究了多种药物递送系统以改善药物吸收，提高药物稳定性并使其靶向作用于某些细胞群。这些研究导致开发许多基于用于药物携带和递送的环糊精、乳剂、脂质体和聚合物的产品。这些制剂可以通过肌内、静脉内、皮下注射，口服，吸入或可被植入的装置来给药。

直到现在，现有技术中仍没有发现将血管紧张素II AT1受体拮抗剂、环糊精或它们的衍生物、脂质体和可生物降解的聚合物及其组合用于治疗高动脉压或其它心血管疾病，如温血动物的心衰的应用。这表明本发明为一种用于治疗这些病理和它们的并发症的新的更有效的选择。

本发明的特征是两种不同技术的组合：一种是将血管紧张素IIAT1受体拮抗剂分子胶囊包封于环糊精和/或脂质体中，而另一种是微囊包封于可生物降解的聚合物中。它的特征还在于增加血管紧张素IIAT1受体拮抗剂的效力和增加它们的生物利用度。

此外，本发明表明血管紧张素II AT1受体拮抗剂与环糊精和可生物降解的聚合物结合提高降压药效果。

可以通过以下某些实施例更好地理解本发明，但本发明并不受其限制。

实施例1.β-环糊精和血管紧张素II AT1受体拮抗剂之间的包含化合物的制备：以氯沙坦为例

制备等摩尔比例的环糊精和ATI受体拮抗剂。简言之，利用搅拌和加热将β-环糊精和/或它的衍生物溶于水。然后将各种数量的氯沙坦加到水溶液中。溶解后，在液氮下冷冻混合物，并经过冻干处理，得到一种干燥固体。然后利用红外范围内的光谱吸收、热分析(TG/DTG和DSC)和X射线衍射对所得的固体进行物理化学表征。在β-环糊精的红外光谱中，观察β-环糊精谱带为：在大约3500cm^-1，ν_OH′，在2910cm^-1，ν_CH3不对称，而在1440cm^-1，ν_C＝O。氯沙坦谱带校正为：在大约3400cm^-1，对应于ν_NH，2980cm^-1，ν_CH3不对称，2770cm^-1，ν_CH3对称，大约1600cm^-1，芳基的ν_C＝C，大约1350cm^-1，ν_CH，在500-1600cm^-1处与方式的组合有关：振动的ν_C＝C+C＝N，而在760cm^-1处，对应于CH3‘摇摆’的强谱带。在包含化合物的IR光谱中，不存在CH3‘摇摆’的谱带，ν_C-H在2770cm^-1处对称，而ν_N-H在3400cm^-1，且1500-1600cm^-1处的谱带减小，与咪唑和芳环的模式有关。这些观察证明包含化合物的形成。

β-环糊精的曲线TG/DTG表现出两个分解阶段，一个在大约85℃处，由于空腔所包含的七分子水损失所致；另一个在大约320℃处，对应于物质的分解，这种结果通过各自的DSC曲线得到加强。氯沙坦的曲线TG/DTG表现出三个分解阶段，第一分解阶段在110℃处，对应于水的丧失；另一分解阶段在大约190℃处，表明物质的熔解；第三分解阶段在大约400℃，其中发生氯沙坦的全部分解。包含化合物的曲线TG与纯氯沙坦相比表现出热稳定性增加。另一方面，在相同的TG曲线中观察到两种热分解现象，第一种现象在大约60℃处，对应于三分子水的损失；而另一种现象在大约300℃处，由超分子化合物的完全分解导致。

包含化合物的X射线衍射表现出新的结晶相，此时观察到主峰出现在4、12e 25°2θ处的β-环糊精的XRD图案，主峰出现在11、15.2、19、23和29.2°2θ处的氯沙坦的XRD图案，而包含化合物的XRD图案表现出更加无定形的曲线，其中峰在4、23和25°2θ处消失，而新峰出现在6°和15°2θ处。

实施例2.在羟基丙基-β-环糊精和血管紧张素II AT1受体拮抗剂之间的包含化合物的制备：以氯沙坦为例。

以摩尔比为1∶1的羟基丙基-β-环糊精和血管紧张素II AT1受体制备制剂。简言之，利用搅拌和加热将羟基丙基-β-环糊精和/或它的衍生物溶于水，然后将各种数量的氯沙坦加到水溶液。在溶解之后，在液氮中冷冻混合物，并使其经过冻干处理，得到一种干燥的固体。随后用红外范围内的光谱吸收、热分析(TG/DTG和DSC)和X射线衍射对所得的固体进行物理化学表征。羟基丙基β-环糊精的红外光谱表现的吸收谱带为：在3400cm^-1，ν_O-H，大约2900cm^-1，ν_C-H，在1140cm^-1，ν_C-O-C，而在1630cm^-1，ν_OH。在包含化合物的IR光谱中证实不存在谱带CH₃′摇摆′，ν_C-H对称在2770cm^-1而ν_N-H在3400cm^-1，这证明形成包含化合物。

羟基丙基-β-环糊精的曲线TG/DTG表明在大约60℃处发生与2分子水损失有关的质量损失。然后热稳定性的发生持续到300℃，此时样品发生完全分解。相同的现象在DSC曲线中得到证实，其中在367℃处观察到放热峰，表明物质分解。包含化合物的TG/DTG曲线表明两种分解步骤。第一个步骤大约在100℃，对应于三分子水的丧失；而另一步骤在大约300℃，由全部分解所致。进一步证实包含后客体的热稳定性增大。

与羟基丙基-β-环糊精相比，包含化合物的X射线图案衍射表现出新的结晶相，表明它是无定形物质。

氯沙坦的X射线图案表现的峰在11，15.2，19，23和29.2°2θ处。

实施例3.以可生物降解的聚合物(PLGA)和由实施例1和2得到的包含化合物为基础的微球体的制备

首先制备一种由有机相(由溶于二氯甲烷的聚(乳-乙二醇酸)(PLGA)组成)和含水相(由血管紧张素II AT1受体拮抗剂，例如氯沙坦)组成的乳液。

然后将乳液超声处理半分钟，并将其加到1％(PVA)溶液中，形成第二乳液，将其搅拌1分钟以完成微乳液的均化。使系统在不加热的情况下保持搅拌2小时直至溶剂蒸发。将混合物离心2-3次，并用水洗涤3次以除去表面吸附的PVA，并最终再悬浮在2mL水中，并冻干。然后通过热分析和扫描电子显微镜法SEM表征固体微球体。微球体DSC曲线表明一种类似于关于PLGA聚合物所观察到的玻璃状转变。各SEM显微图表现出50微米的粒径。进一步证实微球体的多孔表面。

为了测定不同应用系统的胶囊包封的能力，通过UV-VIS光谱建立校准曲线，获得浓度和吸光度之间的关系，从而确定结合的氯沙坦的数量(见表1)。

表1-不同应用系统的胶囊包封的百分率

    系统    胶囊包封的百分率    氯沙坦+PLGA    36.7％    氯沙坦+HP-βCd+PLGA    72.0％    氯沙坦+βCd+PLGA    85.0％

HP-βCd(羟基丙基-β-环糊精)

PLGA(聚(乳-乙二醇酸)

βCd(β-环糊精)

根据表1的数据证实胶囊包封百分率之间的巨大差别。这种事实是由于氯沙坦、β-环糊精和羟基丙基-β-环糊精的不同溶解度导致的，β-环糊精表现较小的溶解度，从而表现出较大的胶囊包封百分率。

实施例4.β-环糊精和HP-β-环糊精中所包含的氯沙坦在Ang II对大鼠的升血压作用中的效果的比较。

在氯沙坦给药(0.2mg/Kg)和将氯沙坦包入环糊精(管饲法)之前和之后的2、6、24、48小时，给在股动脉和股静脉植入导管的大鼠注射分级剂量的血管紧张素II(5、10和20ng/100μl)。包入环糊精的氯沙坦阻断大约75％的Ang II的升血压作用，持续长达48小时。氯沙坦单独阻断Ang II的作用持续大约8小时。

实施例5.氯沙坦和与可生物降解的聚合物结合的氯沙坦在AngII对大鼠的升血压作用中的效果的比较。

将配备遥测记录动脉压的仪器的称重的雄性大鼠(330-350g)麻醉，并在股静脉植入导管。

在皮下注射氯沙坦(0.7mg)、与可生物降解的聚合物结合的含有0.7 mg药物氯沙坦或单独的聚合物之前和之后完成Ang II注射(5、10和20ng/100μL)。在2、8、24小时之后完成Ang II注射，然后在24小时的时间时隔内进行注射，持续15天。可以表明可生物降解的聚合物-氯沙坦-β-环糊精的组合显著地阻断Ang II的升血压作用，持续长达15天。用赋形剂给药没有观察到显著的变化。氯沙坦单独阻断AngII作用持续大约8小时。