新菌株紫色红曲菌、红曲菌及其应用

摘要

本发明的新菌株紫色红曲菌、红曲菌其生化、理化特性极为稳定，其代谢产物效率高且稳定，对培养基要求条件宽，对环境无特殊要求；产物功能多，综合利用率高，无废弃物质；成本低，工艺简单，节简劳力；其发酵生产的红曲色素、降脂散(生物降脂素)，性能安全且功能多，可开发多种保健食品(药品)，对甘油三脂降率可达30-60％，并见效快，还具有降压、降血糖和防癌等功效，有利于人体健康、减少环境污染。

说明书

本发明涉及新菌株及其应用，属于微生物技术领域。

红曲色素是纯种发酵的天然色素，过去大多用乙醇浸提法获得，或直接将红曲粉碎应用，这两种方法前者成本高，获率少；后者粗放，局限性大，通常只作豆腐乳之类。降脂散也是如此。

本发明的目的就是要克服上述缺陷，提取获得新菌株紫色红曲菌、红曲菌来生产红曲色素、降脂散。

本发明的技术方案是：新菌株紫色红曲菌N₄Monascuspurpurus (AS3.4691)、红曲菌N₁₄Monascusanka(AS3.4692)，其特征在于：1-1-1.紫色红曲菌N₄Monascus purpurus(AS 3.4691)在麦芽汁培养基和G25N培养基上生长，菌落局限，质地紧密，表面有皱纹和气生菌丝，菌丝体初橙色，老熟后橙红色或葡萄紫色，菌落被面呈酱红色。1-1-2.在MEA和土豆培养基上生长时菌落呈现放射状皱纹，气生菌丝稀疏而短小，质地紧密，菌丝体初橙色，老熟后为酱红色，菌落背面酱红色。1-1-3.镜检形态为：菌丝具横隔、多核、不规则的分枝，含有橙色油滴，直径2-7微米，分生孢子偶见，单生、梨形，810微米，被子器橙红色、球形，直径40-50(70)微米，子囊孢子卵形、光滑无色，6-7×4.5-5微米。1-2-1.红曲菌N₁₄Monascus auka(AS3.4692)，在MEA和G25N培养基上生长，菌落局限型，多褶皱纹形似疮疤状，无气生菌丝，菌落溶岩色或葡萄酱紫色，背面深铁棕色。1-2-2、镜检形态为：菌丝分隔分枝，内含大量橙红色油滴，直径3-7微米，分生孢子多，梨形8-11×6-10微米，被子器球形，橙红色30--50微米，子囊孢子卵圆形、光滑、浅红色，4-5×2-3微米。

2.生产红曲色素的方法，其特征在于采用新菌株：2-1.斜面培养接种后，在温度30-32℃下培养13-16天备用；2-2.米试管或三角瓶培养，接种后在30-34℃条件下培养10--14天备用；2-3.曲池通风培养或帘子曲培养，将大米(籼米)浸泡蒸饭、冷凉接种后，堆集发酵，待品温升至50-51℃时入池(帘)通风发酵4-5天，将曲低温(45℃以下)烘干备用；2-4.将低温干燥曲按投料量的25％用曲，并加入总投料量的75％温开水(38-40℃)，拌匀后在28℃左右发酵7-10天，将发酵后的酒液压榨蒸馏得粗液(蒸馏后残液)，再经精滤得滤渣干燥后得红曲色素。

3.降脂散的生产方法，其特征在于采用新菌种：3-1.同2-1、2-2、2-3所述；3-2.将3-1所述的低温干燥曲按投料量的25％用曲，并加入总投料量的75％温开水(38-40℃)，拌匀后在室温28℃左右发酵7-10天，将发酵后的酒液压榨蒸馏得粗液(蒸馏后残液)，其压榨后的粗渣高温烘干粉碎后配以相关功能物质精制而成。

本发明的新菌株紫色红曲菌、红曲菌其生化、理化特性极为稳定，其代谢产物效率高且稳定，对培养基要求条件宽，对环境无特殊要求；产物功能多，综合利用率高，无废弃物质；成本低，工艺简单，节简劳力；其发酵生产的红曲色素、降脂散(生物降脂素)，性能安全且功能多，可开发多种保健食品(药品)，对甘油三脂降率可达30-60％，并见效快，还具有降压、降血糖和防癌等功效，有利于人体健康、减少环境污染。

实施例1：

紫色红曲菌N₄Mornascus purpureus(AS3.4691)、红曲菌N₁₄Monascus auka(AS3.4692)，均为真菌，已于1996年8月8日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，登记入册编号为：CGMCC NO.0269-1，

                              CGMCC NO.0269-2。

菌种来源：本发明菌株来源于江苏省军区运西农场所属江苏华威保健品厂红曲生产菌。经分离以AS3.978曲菌保藏菌中为参照，选育出相对一致的三组27株，即N₄Monascua purpureus(AS3.4691)和红曲菌N₁₄Monascus auka(AS3.4692)。

菌源样品制备与纯化：从红曲发酵池中采集曲样9份，将9份曲样分别分成三份，再将每份取出一小勺，加入盛有10毫升含乳酸0.7％、酒精10％的饴糖液(10Be)的试管中，30-32℃静置培养13天左右，于无菌条件下将浮于液面菌团挑入盛有30毫升无菌水的三角瓶中，瓶内放有若干灭菌玻璃珠，摇动5分钟，打碎菌团，用铺有一薄层棉花的灭菌漏斗过滤，将滤液稀释至适当浓度，涂平板，于35℃培养6天，挑选色深、浅、淡，菌落大、中、小相应的菌落，移入饴糖面培养供筛选用。

初筛：将以上分离菌株27株，保藏菌株6株，进行色价、米曲糖化发酵对比试验：供试菌斜面——三角瓶(50g/500ml)色价、糖化发酵检测。结果显示，色价在1500以上3株，色价在1000-1500之间的6株，其它均在1000以下。糖化力在700以上的7株，低于250的5株，其它均在500左右。

复筛：将糖化力在700以上的菌株和色价在1500以上的菌株进行纯化后再进行生产、复筛、对比试验三年，最终得到新菌株N₄Monascuspurpureus紫色红曲菌(AS3.4691)，色价稳定在1200-2000(液态发酵高于固态发酵)，糖化力在600-800。N₁₄Mon-ascus auka红曲菌(AS3.4692)，其色价稳定在1000-1500(液态发酵优于固态发酵)，糖化力在700-850。上述两株菌水溶性较一般对照菌有明显优势，为食品加工提供了方便。

基本培养基的组成(％)：

(1)可溶性淀粉5，蛋白栋3，琼脂3，6-8Be饴糖液定溶100毫升；

(2)NaNO₃0.3，K₂HPO₄0.1，KCL0.05，MgSO₄.7H₂O0.05，FeSO₄.7H₂OFe0.01，酵母膏0.5，琼脂1.5，甘油23，PH值6.5-6.7。

三角瓶种培养基：取1000g籼米，浸泡24小时后沥干，蒸饭(熟而不粘，内无硬芯)，冷凉后分装于20只500ml三角瓶中，50g/瓶，经灭菌后即可在无菌条件下接种。

接种：用直形管吸取0.2％稀醋酸溶液(0.3％的冰醋酸溶液)5-10毫升，注入AS3.4691或AS3.4692于斜面试管中，用玻璃棒或接种针在无菌条件下搅拌菌苔，再用经灭菌的粗口吸管取0.5-1毫升红曲菌液，接入大米三角瓶中摇匀，放置于30-34℃恒温箱中，期间应经常摇动，使米饭分散，不使之产生结团及生长不匀现象，培养10-13天备用。

红曲用料配比：取100kg籼米加冷开水7kg，冰醋酸120--150kg，红曲米三角瓶种三瓶(150g)，使用前将红曲米种研细，并与冷开水及冰醋酸混合均匀。

浸泡、蒸饭、接种：采用上等籼米放置于大缸中，加水浸泡120分钟后，捞起放入竹箩内少淘洗，把米泔水洗去，沥干，然后倒入蒸桶内周围全部冒气后，加盖再蒸三分钟；蒸好后的米饭移入木盘内，搓散结块，并散热冷却到42-44分钟，接入已混合冰醋酸液的研细红曲种子，充分拌合后装入灭菌麻袋，封口进入曲室培养。

培养：进入曲室时，品温开始由原来的36℃下降到34℃，而后上升至39℃，约需17-19小时；后每小时升温约一度，最后半小时升温一度，待曲温达50-51℃时，开包移至曲池发酵，室温25-30℃、曲温35℃条件下培养4-5天，成熟后低温干燥备用。

红曲色素的生产方法：将大米或籼米浸泡24小时后沥干、蒸煮，无夹心，熟而不粘即可，冷凉到40℃后，投放到坛中，并按投放量25％加入红曲，再加入占投料总量75％的40℃温开水，搅匀后按0.25％加入干酵母，搅匀后封坛发酵7-10天，发酵结束，开坛压榨，榨液蒸馏得白酒和余液，将余液过滤得粗渣液和清液，将粗滤液浓缩、烘干、粉碎后即为红曲色素精品。

降脂散的生产方法：将生产红曲色素过程中的压榨酒糟，烘干、粉碎，再将与之相关物质配伍精制而成降脂散。

AS3.4691和AS3.4692富含洛伐它丁(C₂₄H₃₆O₅)，一种HMG—COA还原酶抑制剂(抑制胆固醇的合成)和红曲霉素活性物质Monacilink，具有降低血脂作用，其中红曲橙色素的Monas——corubin及Rubuopunctatin具有活泼的羰基，很容易与氨基起作用，因此不但可以治疗胺血症(Ammoniemia)，还可有效地防癌。

实施例2：

基本培养基同实施例1。

红曲色素生产方法：

取大米或籼米100kg，浸泡、沥干蒸饭后，投放到容积为500kg大坛中，在加饭24小时前，应取25kg低温干燥的红曲米加75kg40℃温开水入坛浸曲，待投入米饭后，加入0.25kg干酵母，搅匀后封口发酵，前三天每天搅拌一次，发酵室温应保持28℃左右，7至10天发酵完毕。

将发酵液压榨后得酒液和酒糟，将酒液蒸得白酒和蒸馏余液，再将蒸馏余液过滤得粗滤液与清液，再将粗滤液浓缩、烘干、粉碎即为红曲色素粉剂精品，也可制备液体红曲色素。

降脂散生产方法：

将压榨后的酒糟进行高温(100-120℃)烘干、粉碎后，再与相关降脂物质配伍制成降脂散或降脂丹、降脂胶囊等。精制后的降脂散，每克含洛伐它丁(C₂₄H₃₆O₅)8毫克以上。

附：

1、红曲色素、降脂散工艺流程图。

2、菌种鉴定书；

3、菌种存活性报告书。