吡啶甲酸铬原料药中杂质限度检测的高效液相色谱分析方法

摘要

本发明公开了一种吡啶甲酸铬原料药中杂质限度检测的高效液相色谱分析方法，它采用配有紫外检测器的液相色谱仪，以辛基键合硅胶为填充柱，流动相为0.5%～2.0%质量浓度的醋酸水溶液与乙腈的混合液，紫外检测器波长200～300nm；将50mg吡啶甲酸铬样品加入60ml甲醇超声溶解后，加入甲醇稀释至100ml摇匀，再经0.45μm滤膜过滤后作为供试品溶液；将1ml供试品溶液加甲醇稀释至100ml后摇匀，再经0.45μm滤膜过滤后作为自身对照品溶液；量取供试品溶液和对照品溶液，分别进样10μl，记录色谱图，然后按外标法以峰面积计算各杂质的含量。本发明吡啶甲酸铬与合成吡啶甲酸铬的起始物、中间体和产生的杂质能实现完全分离，峰形和分离度良好，灵敏度和准确度高，可满足吡啶甲酸铬原料药杂质限度的分析。

说明书

技术领域

本发明涉及液相色谱分析方法，具体涉及一种检测吡啶甲酸铬原料药中杂质限度的液相色谱法分析方法。

背景技术

吡啶甲酸铬(CrPic)是一种用于2型糖尿病的补充或供选择的药物，实验证据显示，CrPic在通过p38 MAPK活化作用摄取葡萄糖方面有影响。铬被认为可以增强胰岛素机能，导致2型糖尿病中胰岛素敏感性增强。2005年8月，美国食品与药物管理局(FDA) 批准了吡啶甲酸铬的生产，并确认了它可安全用于人类抗胰岛素和Ⅱ型糖尿病治疗。在我国保健品市场上，吡啶甲酸铬已被允许加入到保健食品中。

药品在生产、贮存或运输中，由于贮存时间过长，包装保管不善，在外界条件影响下，如日光、空气、温度和湿度等因素，或微生物的作用使药品发生变质，如不能监测其杂质限度变化，有可能会对人体造成危害。目前，市场上销售的吡啶甲酸铬，主要用于食品和保健品的添加剂使用，检测项目只涉及一般理化检查和含量检查，没有杂质控制检查。吡啶甲酸铬做为原料药，必须对其杂质限度变化进行灵敏、准确的检测，制定吡啶甲酸铬原料药质量标准。而国内外的文献中没有对吡啶甲酸铬原料药中杂质限度进行分析的报道。

  如CN 102926534 A 中报道了吡啶甲酸铬含量的高效液相分析方法，该分析方法定量分析准确，加标回收率试验得到的平均回收率为98.28%，精密度试验得到的RSD%=0.69，可以满足吡啶甲酸铬的含量分析。但此文献未对吡啶甲酸铬中的杂质分析进行报道。

Michael Koll等人在文献A validated method for analysis of chromi picolinate in nutraceuticals by reversed phase high performance liquid chromatography报道了保健食品中吡啶甲酸铬的高效液相分析方法，吡啶甲酸铬浓度为0.125-12.5mg/ml的浓度范围内线性良好，相关系数为0.999。Sung-Il Kim等人在文献Determination of Chromium(III) Picolinate Using High Performance  Liquid Chromatography-Μltraviolet Spectrophotometry 中报道了利用ESI-MS和HPLC对食品中吡啶甲酸铬定性的研究。

Sung-Il Kim等人在文献Determination of Chromium(III) Picolinate Using High Performance  Liquid Chromatography-Ultraviolet Spectrophotometry 中报道了利用ESI-MS和HPLC对食品中吡啶甲酸铬定性的研究。

发明内容

针对现有技术缺陷，本发明提供一种检测吡啶甲酸铬中杂质限度的分析方法。

本发明技术方案是这样实现的：它采用配有紫外检测器的液相色谱仪，其特征在于以辛基键合硅胶为填充柱，流动相为0.5%～2.0%质量浓度的醋酸水溶液与乙腈的混合液，其醋酸水溶液与乙腈的体积比为92:8～70:30，紫外检测器波长200～300nm；

将50mg吡啶甲酸铬样品加入60ml甲醇超声使其充分溶解后，加入甲醇稀释至100ml摇匀，再经0.45μm滤膜过滤后作为供试品溶液；

将1ml上述供试品溶液加甲醇稀释至100ml后摇匀，再经0.45μm滤膜过滤后作为自身对照品溶液；

分别量取上述供试品溶液和对照品溶液，进样10μl，流速1ml/min，柱温30℃，记录色谱图，然后按外标法以峰面积计算各杂质的含量。

本发明有益效果在于：采用本发明分析方法，吡啶甲酸铬与合成吡啶甲酸铬的起始物、中间体和产生的杂质能实现完全分离，峰形和分离度良好，灵敏度和准确度高，最大单杂RSD值为8.05%，总杂质RSD值为6.82%，可以满足吡啶甲酸铬原料药杂质限度的分析要求。

附图说明

图1为本发明吡啶甲酸铬原料药中杂质高效液相色谱图。

具体实施方式

以下结合具体实施对本发明做进一步详述。

实施例1：

采用配有紫外检测器的高效液相色谱仪（Waters e2695）（型号、生产厂家），色谱柱为辛基键合硅胶填料（Venusil MP-C8，250×4.6mm×5μm），流动相为0.5%～2.0%质量浓度的醋酸水溶液与乙腈的混合液，其醋酸水溶液与乙腈的体积比为70:30～92:8，紫外检测器波长220nm；

称取吡啶甲酸铬样品50mg，置100ml量瓶中后，加入60ml甲醇超声使其充分溶解，再加入甲醇稀释至100ml，摇匀，再经0.45μm滤膜过滤后作为供试品溶液；取上述供试品溶液1ml至100ml量瓶中，加甲醇稀释至100ml，摇匀，再经0.45μm滤膜过滤后作为自身对照品溶液；

分别量取上述供试品溶液和对照品溶液，分别进样10μl，记录色谱图，然后按外标法以峰面积计算各杂质的含量，本实施例色谱图如图1所示。

实施例2：

本实施例与实施例1不同之处是，采用配有紫外检测器的高效液相色谱仪，色谱柱为辛基键合硅胶填料（Venusil MP-C8，250×4.6mm×5μm），流动相为1.0%质量浓度的醋酸水溶液与乙腈的混合液， 1.0%醋酸水溶液与乙腈的体积比为85:15，紫外检测器波长265nm；

称取吡啶甲酸铬样品50mg，置100ml量瓶中后，加入60ml左右甲醇超声使其充分溶解，再加入甲醇稀释至100ml，摇匀，再经0.45μm滤膜过滤后作为供试品溶液；取上述供试品溶液1ml至100ml量瓶中，加甲醇稀释至100ml，摇匀，再经0.45μm滤膜过滤后作为自身对照品溶液；

量取上述供试品溶液和对照品溶液，分别进样10μl，记录色谱图，然后按外标法以峰面积计算各杂质的含量。

实施例3：

本实施例与实施例1不同之处是，采用配有紫外检测器的高效液相色谱仪，色谱柱为辛基键合硅胶填料（Venusil MP-C8，250×4.6mm× 5μm），流动相为1.5%质量浓度的醋酸水溶液与乙腈的混合液，1.5%醋酸水溶液与乙腈的体积比为75:25，紫外检测器波长280nm；

称取吡啶甲酸铬样品50mg，置100ml量瓶中后，加入60ml左右甲醇超声使其充分溶解，再加入甲醇稀释至100ml，摇匀，再经0.45μm滤膜过滤后作为供试品溶液；取上述供试品溶液1ml至100ml量瓶中，加甲醇稀释至100ml，摇匀，再经0.45μm滤膜过滤后作为自身对照品溶液；

量取上述供试品溶液和对照品溶液，分别进样10μl，记录色谱图，然后按外标法以峰面积计算各杂质的含量。

按本实施例分别准确称取6份供试品进样，进行重复性试验，结果如表1所示，计算得最大单杂RSD值为8.05%，总杂质RSD值为6.82%，可以满足吡啶甲酸铬杂质限度的检测要求。

表1：6份供试品的高效液相检测数据