噻唑烷二酮类药物与5-甲基四氢叶酸药物组合物的新用途

摘要

本发明涉及含有药用剂量的噻唑烷二酮类(TZDs)降血糖药、药用剂量的5-甲基四氢叶酸的药物组合物用于防治TZDs引起的药物性肝损伤；其中，TZDs的优选药物及剂量为罗格列酮1～8mg、吡格列酮7.5～45mg，5-甲基四氢叶酸的优选剂量为1.0～2.4mg。本发明的优点是：在有效降血糖的基础上，该药物组合物能够预防、治疗或缓解TZDs引发的肝损伤，因此可以提高TZDs临床应用的效益/风险比。

说明书

技术领域

本发明涉及药用剂量的噻唑烷二酮类降血糖药、5-甲基四氢叶酸所组成的药物组 合物用于防治噻唑烷二酮类药物肝损伤副作用的新用途。本发明属于医药领域。

背景技术

糖尿病是一种常见的内分泌代谢性疾病，其特点是慢性高血糖伴随因胰岛素分泌 不足和/或作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。糖尿病已成为继心脑血管、癌 症之后的人类第三大疾病。据调查，我国糖尿病患病率高达9.7％，据此推算全国糖尿 病患者约有9240万人【Yang W，et al.Prevalence of diabetes among men and women in  China.N Engl J Med.2010；362：1090-1101】。另根据国际糖尿病联盟(International  Diabetes Federation，IDF)统计，2010年全球糖尿病患者已达2.85亿，估计到2030年全 球将有近5亿人患糖尿病。由此，糖尿病药物治疗的有效性和安全性不仅具有临床意义， 更具有重要的社会意义。

糖尿病主要分为I型(胰岛素依赖型)和II型(非胰岛素依赖型)两种，后者约 占糖尿病患者总数的90％以上。II型糖尿病的主要病理生理学特征为胰岛β细胞功能 缺陷所导致的胰岛素分泌减少(或相对减少)或胰岛素抵抗所导致的胰岛素在机体内 调控葡萄糖能力的下降或两者共同存在【中华医学会糖尿病分会主编.中国2型糖 尿病防治指南(2010版).北京大学医学出版社，2011年9月第1版】。通过改善胰 岛素受体的敏感性可以增强胰岛素的作用，这是针对II型糖尿病的有效干预途径，因 此，开发胰岛素增敏剂成为近年来的研究热点。目前抗糖尿病药物市场上，噻唑烷二 酮类(thiazolidinediones，TZDs)药物属于胰岛素增敏剂的主要类型。

TZDs药物一般具有5-苄基噻唑烷-2，4-二酮的基本结构，代表药物有罗格列酮 (Rosiglitazone)、吡格列酮(Pioglitazone)，在研药物尚有法格列酮(Farglitazar，葛 兰素史克公司)、达格列酮(Darglitazoan，日本武田制药公司)等。该类药物可激活 核过氧化物酶增殖体受体(PPAR-γ)，从转录水平上增强胰岛素的作用。PPAR-γ在脂 肪组织、骨骼肌和肝脏有较高的表达，它与TZDs结合后即被激活，构象发生改变， 释放辅阻遏物，从而激活基因转录。通过这一机制，TZDs显著改善II型糖尿病患者 外周靶组织的胰岛素抵抗，增强对葡萄糖的摄取，从而降低空腹血糖和糖基化血红蛋 白水平，并可抑制血浆胰岛素的反馈性升高。

在临床应用中，人们逐渐发现TZDs对人体有较明显的肝脏毒性作用。例如，曲 格列酮(Troglitazone)是世界上第一个用于临床治疗II型糖尿病的胰岛素增敏剂，于 1996～1997年获准上市，但不久发现该药有肝脏毒性，并有死亡病例的报道，因此在 2000年即停止销售。遭遇同样命运的还有环格列酮(Cightazone)和恩格列酮 (Englitazone)，因受到包括肝毒性在内的严重不良反应的影响，二药也先后被淘汰或 撤市。目前常用的TZDs仅有吡格列酮、．罗格列酮两个，虽然尚未发现它们的严重肝 毒性，但由于是同类药物，二者仍有导致肝功能异常的不良反应，一般ALT(丙氨酸 氨基转移酶)高于正常2.5倍以上的患者禁用，1～2.5倍者慎用。在治疗前及治疗第 1年的每1～2个月要求检查肝功能，以后还要定期复查【孙敬芳，等.胰岛素增敏剂的 临床应用及研究进展.中国药物应用与监测.2007；(1)：24-26】。此外，TZDs常见 的副作用还有体重增加、水肿、诱发心衰和骨折等。

糖尿病是一种伴随终身的疾病，需要长期服药，故用药安全性问题不容忽视。 上述肝损害等副作用大大限制了TZDs的使用，降低了TZDs临床应用的效益/风险比。 在我们之前获得授权的专利(CN200510106553.6)中，公开了胰岛素增敏剂与B族维生 素的组合物在血管内皮细胞保护和防治糖尿病并发症方面的优势，但未涉及TZDs的 药物性肝损伤方面。5-甲基四氢叶酸(5-methyltetrahydrofolate，5-MTHF)是叶酸的 天然活性形式，可经人体肠道吸收，由尿排出体外，在体内很少蓄积，所以必须经常 从体外摄取以满足机体营养和代谢需要。我们在动物实验中意外发现5-MTHF具有显 著的肝功能保护作用，因此认为把它与TZDs组成复方药物将有额外的获益，即可以 预防或缓解TZDs引起的药物肝损伤，提高TZDs临床应用的效益/风险比。

发明内容

本发明旨在克服噻唑烷二酮类(TZDs)抗糖尿病药物存在的肝损伤副作用，选择 药用剂量的5．甲基四氢叶酸(5-MTHF)与TZDs组成复方药物，用于治疗II型糖尿病， 并能够预防、治疗或延缓TZDs引起的药物性肝损伤。该药物组合物在提高降血糖治疗 的效益/风险比方面明显优于TZDs单独使用。

所述的“药用剂量”是指具有协同、预防或治疗的药理作用的量。

所述的TZDs包括已上市的罗格列酮、吡格列酮和待上市的法格列酮、达格列酮 等，药学上优选马来酸罗格列酮、盐酸吡格列酮。

在本发明中，根据临床资料和实验数据，TZDs的药用剂量分别为罗格列酮1～8mg、 吡格列酮7.5～45mg；5-MTHF的药用剂量为0.1～5mg，优选剂量为1.0～2.4mg。

在动物实验中我们发现，药用剂量的TZDs和药用剂量的5-MTHF组成的药物组合 物对TZDs引起的转氨酶升高有令人惊奇的效果：本药物组合物不仅使TZDs的降血糖效 应有所增强(5-MTHF有轻度降血糖作用)，更重要的是可以显著抑制转氨酶的升高， 提示其具有肝保护作用，可用于防治TZDs的药物性肝损伤。

本发明的药物组合物的剂型包括但不限于普通片剂、双层片剂、多层片剂、缓释 片剂、单室控释片剂、双室控释片剂、微孔型控释片剂、舌下含片、口腔速崩片、分 散片、肠溶片、颗粒剂、丸剂、肠溶胶囊、延迟释放片、定时/位释放片、普通胶囊、 缓释胶囊、控释胶囊、含有微丸或小片的胶囊、含有微丸或小片的pH依赖型胶囊、 口服液、膜剂或贴剂。应该特别指出的是，将含有TZDs和5-MTHF的药物组合物制成 片剂或胶囊。

术语“药用剂量”是指为达到有效控制或治疗疾病目的，临床医生根据患病个体 病情严重程度对患病个体施与药物的剂量。应当理解本发明提供的药物药用剂量不是 对本发明的限制，而是对本发明的优选，通常情况下，在该剂量优选范围内，该药物 能够对患病个体产生有效的治疗效果。患病个体是指患有疾病的独立存在的生命体， 在本发明中，生命体尤指人类。应当理解，现有技术中，人类药用剂量或药用剂量范 围可与哺乳动物，如大鼠、小鼠等，进行换算以得出适合相应动物适用的药用剂量或 剂量范围。

本发明的优点：

本发明提供了含有药用剂量的TZDs、5-MTHF的药物组合物的新用途。TZDs与 5-MTHF的联合效果并不是各个活性物质的各自作用的简单加和，而是在使II型糖尿病 患者血糖得到更佳控制的基础上能够显著降低TZDs诱发的肝损伤作用，从而提高 TZDs临床应用的效益/风险比。

下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明，并非对本发明的限定，凡依照本 发明内容进行的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。

具体实施方式

实施例1：马来酸罗格列酮4mg/5-甲基四氢叶酸(5-MTHF)1.2mg片的制备

配方组成

制备方法：将原辅料粉碎过80目筛，干燥备用。取马来酸罗格列酮4.0g和 5-MTHF1.2g按照等量递增法混合均匀，加入微晶纤维素122g、羧甲基淀粉钠18g、 再加入乳糖80g，均匀混合，加入适量粘合剂10％聚维酮水溶液制软材，30目制粒， 40～45℃干燥3h；30目整粒，最后加入适量1％硬脂酸镁混匀，含量测定后，压片， 包装。制备过程中注意避光，成品检验合格后，铝塑泡罩包装，避光保存。制成的复 方片剂中每片含马来酸罗格列酮4mg、5-MTHF1.2mg。

实施例2：盐酸吡格列酮30mg/5-MTHF1.2mg胶囊的制备

配方组成

制备方法：将原辅料粉碎过80目筛，干燥备用。取盐酸吡格列酮30g、5-MTHF1.2g 按照等量递增法混合均匀，加入淀粉80g、微晶纤维素60g、羧甲基淀粉钠20g，混合均 匀，用60％乙醇适量制成软材，20目筛制粒，60℃干燥约2h，20目筛整粒，控制颗粒 的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与处方量的1％硬脂酸镁混合均匀，半成品进行检测， 测定含量，装入空心胶囊，即得1000粒胶囊。制备过程中注意避光。成品检验合格后 铝塑泡罩包装，避光保存。制成的复方胶囊中每粒含盐酸吡格列酮30mg、5-MTHF 1.2mg。

实施例3：盐酸吡格列酮15mg/5-MTHF1.0mg颗粒剂的制备

配方组成

制备工艺：将原、辅料粉碎过80目筛，取盐酸吡格列．酮15g、5-MTHF1.0g、乳糖 800g、淀粉40g、阿拉伯胶5g、甜橙香精2g、聚乙二醇5g粉碎过筛，加入羧甲基淀粉钠 混合均匀制成软材，制粒、40-60℃干燥，含水量为3％左右，取出，整粒，按常规方法 填充成颗粒剂剂即可。制成的复方片剂中每袋含盐酸吡格列酮15mg、5-MTHF1.0mg。

实施例4：盐酸罗格列酮2mg/5-MTIHF1.2mug片的制备

配方组成

制备工艺参考实施例1。

实施例5：盐酸吡格列酮15mg/5-MTHF1.0mg片的制备

配方组成

制备工艺参考实施例1。

实施例6：口服5-MTHF对TZDs造成糖尿病患者转氨酶升高的影响

一、方法：

收集本市3家医院满足下列条件的门诊患者42例：(1)男女不限，年龄范围30-65 岁；(2)患II型糖尿病，近期连续服用TZDs药物1个月以上；(3)无已知的肝脏疾 病；(4)入组前血生化检查ALT＞40IU/L。将患者分为两组：①对照组(21例)：继 续服用TZDs药物，剂量不变；②试验组(21例)：继续服用TZDs药物，剂量不变，同 时口服5-MTHF(Merck产品)，剂量为1.2mg/天，两组其它治疗或处理保持基本对等。以 上治疗/处理持续8周，分别检测入组(基线)及8周后患者的空腹血糖(FPG)和肝功 能(ALT、AST)。

二、结果：

人口学资料显示，对照组平均年龄53.5±9.4(岁)，男/女之比为9/12，试验组平均 年龄54.3±10.2(岁)，男/女之比为10/11，两组人口总体上无明显差异。

两组相关指标基线值及8周后结果与统计见下表1。我们发现，治疗8周后，与自身 基线值比较，对照组患者血清ALT仍有轻度升高(81.6±23.2vs72.7±16.9，P＜0.05)，AST 略有上升，但无统计意义：而治疗8周后试验组患者血清ALT和AST均显示不同程度 的降低，尤以ALT降低更为显著(53.8±12.3vs75.5±19.6，P＜0.01)。此外，与对照组相 比，试验组治疗后的空腹血糖(FPG)降低幅度更大，提示5-MTHF具有辅助降糖作用。

结论：与单用TZDs相比，联合使用TZDs与5-甲基四氢叶酸使已有转氨酶升高的糖 尿病患者的肝功能得到显著改善，提示5-甲基四氢叶酸具有保肝作用，并有辅助降糖 效应。

表1患者基线特征及8周治疗后相关指标比较

注：8周后与基线比较(配对t检验)，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

实施例7：5-MTHF对四氯化碳诱导的肝损伤大鼠的影响

一、方法：

采用20％四氯化碳植物油溶液为诱导剂，对SD大鼠用量为1.5ml/kg体重，每隔3天 腹腔注射1次，共8周，造成大鼠慢性化学性肝损伤模型【张海燕，等.实用肝脏病杂 志，2009；12(3)：161～163)】。取造模成功大鼠40只，随机化分组为：5-MTHF高剂 量组(0.32mg/kg)、5-MTHF中剂量组(0.16mg/kg)、5-MTHF低剂量组(0.08mg/kg)、模型对 照组，另设正常对照组(造模阶段时腹腔注射等量植物油)10只，前3组按上述设定的 5-MTHF剂量每日灌胃一次，后2个对照组每日灌胃0.5％羧甲基纤维素溶液，连续用药 或处理8周，第9周取血(备测血清肝功能)后处死动物，称动物体质量和肝湿质量， 肉眼观察肝组织并制作病理切片，HE染色观察肝组织病理学改变。

二、结果：

模型对照组大鼠血清ALT和AST水平明显高于正常对照组，肉眼观察见肝脏肿大， 称肝湿重增加，病理学HE染色示肝小叶中大部分肝细胞肿胀，有气球样变，部分胞质 中出现脂滴空泡，核居边，细胞界限不清，肝窦狭窄，小叶内及门管区炎症细胞浸润， 并伴有肝细胞再生，提示造模成功。与模型对照组比较，5-MTHF高剂量(0.32mg/kg)明 显降低大鼠血清ALT和AST水平：59.08±20.52v.s.168.37±66.51，P＜0.01；192.63±67.41 v.s.386.16±92.63，P＜0.01；与模型组比较，5-MTHF中剂量(0.16mg/kg)亦明显降低大鼠 血清ALT和AST水平：108.32±38.63v.s.168.37±66.51，P＜0.01；325.18±86.47v.s. 386.16±92.63，P＜0.05。5-MTHF高、中、低剂量组肝组织肿大在治疗后均有不同程度 减轻，肝小叶内及汇管区炎症细胞浸润亦有不同程度改善。主要数据见表2。

结论：5-MTHF对四氯化碳诱导的慢性肝损伤具有明显改善作用，尤以中、高剂量 (0.16～0.32mg/kg/d)的治疗效果较为显著。

表2各组大鼠肝湿重、肝重指数及血清转氨酶水平比较

注：与模型对照比较，^aP＜0.01；^bP＜0.05；与正常对照比较，^tP＜0.01；

实施例8：吡格列酮+5-MTHF对糖尿病大鼠的降糖、保肝作用

一、方法：

SD大鼠60只，体重200～230g，雌雄各半，适应性饲养1周后随机抽取10只作为空白 对照组，其余50只分别给予链脲佐菌素(STZ)30mg/kg单次腹腔注射，14天后大鼠尾静 脉采血测定血糖水平，大于11.1mmoL/L确定为糖尿病造模成功；取40余只糖尿病大鼠， 随机分为3组，即模型对照组、吡格列酮组、吡格列酮+5-MTF组，后2组分别每日给予 吡格列酮3mg/kg/d、吡格列酮+5-MTF(3+0.12mg/kg/d)，空白组、模型组给予等量生 理盐水，各组均按每日1次灌喂，用药或处理时间为16周。8周后取血测ALT、AST， 16周后大鼠禁食12小时，麻醉动物后腹主动脉放血测血糖、ALT、AST。除去中途死 亡大鼠，各组实验数据及统计(采用SPSS10.0统计软件包)见表3。

二、结果：

(1)对糖尿病大鼠血糖的影响实验结果表明：给药16周后，与模型组相比，吡 格列酮组、吡格列酮+5-MTF组能够显著地降低血糖。但与吡格列酮组比较，吡格列酮 +5-MTF组的降血糖效果更显著(P＜0.05)，提示吡格列酮与5-MTHF合用具有协同降糖 效果。详见表3。

(2)对糖尿病大鼠转氨酶的影响大鼠给药8周后，与模型组相比，吡格列酮 组血清ALT、AST活性开始显著升高，吡格列酮+5-MTF组亦有轻度升高。给药16周 后，与模型组相比，吡格列酮组血清ALT、AST活性进一步升高，而吡格列酮+5-MTF 组转氨酶ALT及AST活性呈现显著降低(ALT接近模型组水平)，与吡格列酮组相 比有显著差异(P＜0.05)。这些结果表明5-MTF能够改善吡格列酮引起的肝损害。

表3吡格列酮+5-MTHF给药16周对糖尿病大鼠血糖、转氨酶的影响

注：与正常对照组比较，^#P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；

复方组与单药组比较，^ΔP＜0.05。