ЭФФЕКТИВНАЯ ЭКСПРЕССИЯ В КЛЕТКАХ E. COLI ФРАГМЕНТОВ ГЕНА БОТУЛИНИЧЕСКОГО НЕЙРОТОКСИНА ТИПА А, КОДИРУЮЩИХ L-ЦЕПЬ И Н-ЦЕПЬ, С ОБРАЗОВАНИЕМ ПР

摘要

На основе нативного гена нейротоксина типа А из Clostrid-ium botulinum нами сконструированы рекомбинантные гены, клонированные в составе экспрессионного вектора pET28b в клетках E. coli BL21 (DE3) и обеспечивающие образование по отдельности каждой из двух полипептидных цепей (L и Н), составляющих этот токсин. При индукции изопропил-b-D-тиога-лактозила в сконструированных рекомбинантных штаммах накапливались большие количества рекомбинантных L- и Н-це-пей токсина (не менее 20 и 5% соответственно), причем в обоих случаях эти белки присутствуют в нерастворимом денатурированном состоянии в составе телец включения. Оба рекомбинантных белка содержат дополнительный фрагмент из 6 остатков His на N-конце, что позволило эффективно связать их на колонке с Ni-агарозой и затем очистить с высоким выходом. L-цепь удалось ренатурировать, переведя в растворимую форму до 30% белка из телец включения. Н-цепь ренатурировать не удалось. Введение мышам 10 мкг очищенных препаратов рекомбинантных денатурированных цепей (как Н, так и L) показало, что они нетоксичны и вызывают выработку протективных антител, защищающих 100% испытанных животных отгибели при введении 10-кратной летальной дозы нативного токсина. Полученные данные открывают возможность использования рекомбинантных производных токсина в нерастворимой форме для получения диагностических и лечебных сывороток против боту-линического нейротоксина типа А.