ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ ПЕРОКСИДАЗНЫХ КОНЪЮГАТОВ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ СЕРОГРУПП 01,0139 В РЕАКЦИИ ДОТ-ИММУНОАНАЛИЗА

摘要

Источником моноклоналъных антител (МКА) служила кулътуралъная жидкость (КЖ) гибридом-продуцентов, депонированных в специализированной коллекции клеточных культур позвоночных (Санкт-Петербург) под номерами РККК(П) 386Д и РККК(П) 674Д. Специфические иммуноглобулины (Ig) из КЖ концентрировали путем осаждения их насыщенным раствором сульфата аммония. Схема полученияМКА-пероксидазных конъюгатов включала активацию пероксидазы (ПХ), конъюгацию активированной ПХс Ig, удаление несвязавшихся белков, хранение и контроль. Сохранность активности конъюгатов обеспечивали с помощью БСА (10%) или глицерина (50%), причем использование последнего для этих целей предпочтительнее. Испытание МКА-01 и МКА-О139 пероксидазных конъюгатов на наборе штаммов холерных вибрионов О1 и 0139 показало их строгую специфичность, так как они взаимодействовали только с соответствующими им серогруппами при отсутствии перекрестных реакций с представителями гетерологичных микроорганизмов. Постановка прямого дот-иммуноанализа осуществляется в течение 1,5 ч, чувствительность его находится в пределах 10~5-10~6. Применение диагностических моноклоналъных пероксидазных конъюгатов 01, 0139 в лабораторной практике будет способствовать повышению специфичности серологического анализа на холеру и сокращению сроков его выполнения.