RAPD em Pau-rosa (Aniba rosaeodora Ducke): adapta??o do método para coleta de amostras in situ, ajuste das condi??es de PCR e apresenta??o de um processo para selecionar bandas reprodutíveis

摘要

O Pau-rosa (Aniba rosaeodora Ducke) é uma espécie importante economicamente para a Regi?o Amaz?nica, porque sua madeira é fonte de linalol, insumo utilizado pelas perfumarias. Esta espécie foi explorada durante décadas e, ainda assim, o conhecimento acerca da diversidade genética intra-específica é muito restrito. Foram objetivos deste trabalho: 1) validar um protocolo para coleta de folhas de pau-rosa que permitisse preservar a integridade do DNA até a estocagem em "freezer"; 2) selecionar um protocolo para extra??o de DNA em quantidade e qualidade adequadas para gera??o de bandas RAPD e 3) desenvolver um critério para avaliar o grau de reprodutibilidade que pudesse auxiliar a sele??o de bandas RAPD úteis para análises de diversidade genética. Imediatamente após a coleta, as folhas foram acondicionadas em tubos de polietileno com sílica gel e aí permaneceram por até 10 dias. Foram testados três protocolos para a extra??o de ácidos nucléicos destas folhas, condi??es ideais para as PCR e a reprodutibilidade dos padr?es RAPD. Critérios para a elimina??o das bandas que mais contribuíram para o afastamento dos resultados do ideal da reprodutibilidade total foram desenvolvidos e a significancia estatística das diferen?as geradas pela aplica??o dos critérios ao conjunto de dados foi testada. DNA com qualidade e em quantidade suficiente para a gera??o de padr?es RAPD, nas condi??es ideais definidas para as PCRs, foi obtido. A elimina??o de bandas com reprodutibilidade menor que 70% n?o diferiu do controle. A elimina??o de bandas com reprodutibilidade menor que 90% diferiu dos demais tratamentos em todos os arranjos testados (P < 5%).