LacZ基因在哺乳动物细胞中的稳定表达及其检测方法

摘要

目的构建含有LacZ标记基因的真核表达载体和稳定表达LacZ的转基因细胞,并建立简易有效的检测方法.方法采用脂质体转染法将装有LacZ基因的真核表达载体pcDNA3 导入鼠成纤维细胞L929,G418筛选LacZ基因稳定表达细胞株,并应用超声波破碎和贴壁细胞悬浮培养的方法来检测转基因细胞的转染率及目的蛋白的表达.结果成功构建了稳定表达LacZ 基因的转基因细胞,超声波破碎后其上清与β-半乳糖苷酶(LacZ)的底物X-gal 反应显兰色;铺有固体琼脂粉的平皿中细胞培养至第4天开始显兰色,并随时间的延长,比率增加,最终可高达100%.结论 LacZ基因在哺乳动物细胞中可稳定表达,建立的检测方法具有简单及重复性好的特点.