电穿孔法基因转染悬浮细胞条件的优化

摘要

目的以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因优化悬浮培养的白血病细胞的电穿孔转染条件.方法通过控制电压、电容、细胞状态、温度及缓冲液等转染条件,采用不同条件组合后用电穿孔法将质粒GFP转入悬浮培养的人白血病细胞株K562和NB4,用流式细胞仪和荧光显微镜观察转染率.结果 (1)低电压、高电容能高效转染悬浮培养的人白血病细胞,细胞类型不同条件有所差异,K562细胞在250 V、950 μF得到最大转染率40.6%,NB4细胞在350 V、950 μF得到最大转染率32.9%.(2)良好的细胞生长状态能明显提高转染率.(3)温度和缓冲液中的血清成分对电穿孔效率影响不大.结论电穿孔是一种高效的基因转染法,通过优化其条件,可提高转染率.