大鼠STAT3基因靶向shRNA真核表达载体的构建及鉴定

摘要

目的 针对大鼠信号转导子及转录激活子3(STAT3)基因序列,构建特异性短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.方法 根据STAT3基因序列及shRNA设计原则,设计4条干扰效果最佳的shRNA,化学合成4对引物,通过PCR扩增获得dsDNA模板,采用DNA重组技术与pGCsi-U6/Hygro/GFP空载体连接,转化DH5a感受态细胞经诱导表达筛选阳性克隆子,抽提重组质粒,进行DNA测序鉴定.结果 转化大肠杆菌涂布平板长出阳性菌落,测序结果与所设计的STAT3 shRNA转录模板序列一致.结论 所设计的shRNA编码序列被正确地插入到质粒骨架中,成功构建了STAT3基因的shRNA表达载体.