ADSCs和β-TCP复合支架制备及其对猪膝关节软骨缺损组织CollagenⅡ、Sox-9表达的影响

摘要

目的 制备猪脂肪干细胞(ADSCs)和β-磷酸三钙(β-TCP)复合支架,观察其对猪膝关节软骨缺损组织CollagenⅡ和Sox-9表达的影响.方法 取1只巴马小型仔猪的颈部皮下脂肪组织,分离并鉴定ADSCs.以β-TCP作为支架材料,将其制成12个圆柱体支架,随机选择其中6个进行成骨诱导.将12个支架与ADSCs复合培养,制备复合支架,对经成骨诱导后复合支架上的ADSCs进行茜素红和碱性磷酸酶染色.将18只巴马小型猪随机分为空白对照组、支架组、成骨诱导支架组,每组6只.支架组、成骨诱导支架组制备与支架大小相符的膝关节软骨缺损模型,并分别植入未经过、经过成骨诱导的复合支架;空白对照组切开膝关节后直接缝合,不进行其他处理.各组常规饲养4周后处死,取缺损处软骨组织,采用荧光定量PCR法检测CollagenⅡmRNA和Sox-9 mRNA相对表达量,Western blotting法检测CollagenⅡ蛋白和Sox-9蛋白相对表达量.结果 分离提取的ADSCs在分离初期镜下显示为圆形单个细胞,细胞的边缘比较清楚,细胞贴壁并形成均匀分布的细胞.免疫组化染色显示,分离的细胞CD44和CD105表达均为阳性,证明其为ADSCs.与空白对照组比较,支架组和成骨诱导支架组软骨组织Collagen Ⅱ和Sox-9 mRNA及蛋白相对表达量均降低,但支架组降低更明显(P均＜0.05).结论 成功制备了ADSCs和β-TCP的复合支架;该支架经成骨诱导后可提高猪膝关节软骨缺损组织CollagenⅡ和Sox-9的表达.