无刺蜂蜂胶乙醇提取物的体外抗氧化及抗炎活性

摘要

[目的]无刺蜂(stingless bees)是热带和亚热带地区重要的授粉昆虫之一,以尾部无蛰针为典型特征,其蜂胶采集量较意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)更多,然而其蜂胶活性研究却相对匮乏.本文以来源于马来西亚无刺蜂(Heterotrigona itama)采集蜂胶的乙醇提取物(ethanol extract of H.itama propolis,EEHI)为研究对象,旨在探究其体外抗氧化和抗炎活性.[方法]采用福林酚法和硝酸铝法测定EEHI中总酚酸和总黄酮含量,并采用DPPH和ABTS+自由基清除能力评价EEHI的体外抗氧化能力;在此基础上,采用细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7炎症模型,通过CCK-8法检测EEHI对细胞相对存活率的影响,在保证EEHI对细胞无细胞毒性作用基础上,分别采用Griess法和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术评估EEHI对LPS诱导的RAW 264.7细胞中炎症介质一氧化氮(N0)释放量的影响以及其对炎症因子(IL-1β、IL-10和INOS)和抗氧化基因(H0-1)信使RNA表达的影响;进一步利用免疫印迹和免疫荧光方法,以NF-κB炎症信号通路为切入点,研究EEHI对LPS诱导巨噬细胞中p-I1κBα和IκBα蛋白表达以及NF-1κB-p65蛋白移位的影响,从而探究EEHI潜在的抗炎机理.[结果]EEHI中总酚酸和总黄酮含量分别为54.70 mg GAE·g-1和116.20 mg QE.g-1;DPPH和ABTS+自由基清除能力IC50值分别为275.60和284.00 κg,mL-1.EEHI对RAW 264.7细胞的安全浓度为0-40 μg·mL-1.在LPS诱导的Raw 264.7细胞炎症模型中,相对于LPS刺激组,0-40 μg·mL-]的EEHI以浓度依赖方式显著地抑制了LPS诱导的RAW 264.7细胞中NO的释放量,且降低了细胞中炎症因子IL-1β、IL-10和INOS的基因表达量,并增强了抗氧化基因H0-1的表达.进一步研究发现,0-40 μg·mL-1的EEHI以浓度依赖方式显著抑制了LPS诱导的RAW 264.7细胞IκBα蛋白的磷酸化,且40 μg·mL-1的EEHI显著降低了NF-κB-p65蛋白的核移位现象,因此推测EEHI可能是通过抑制LPS诱导的NF-1κB信号通路的激活进而发挥了体外抗炎活性.[结论]无刺蜂蜂胶乙醇提取物中含有大量多酚类化合物,具有较好的抗炎和抗氧化效果,极具开发利用价值.