小鼠成纤维细胞凋亡与bcl-2结合蛋白

摘要

为检测细胞凋亡过程中ｂｃｌ２ 基因的结合蛋白， 用ＰＣＲ 技术扩增小鼠ｂｃｌ２ 基因（ｍｂｃｌ２） 调控区， 经亚克隆后的序列分析证实其准确性． 用５氟尿嘧啶（５Ｆｕ） 诱导小鼠成纤维细胞（Ｃ３Ｈ１０ Ｔ１／２ Ｃｌ ８） 凋亡， 以此ＰＣＲ产物作探针， 对上述细胞的核蛋白质粗提物进行迁移位移法（ＥＭＳＡ） 与ＤＮＡ蛋白质印迹分析． 结果表明， 细胞核内一分子质量为５３ ｋｕ的结合蛋白与ｍｂｃｌ２ 调控区的结合信号在５Ｆｕ 刺激１２ ｈ 后明显增强， 而一种１００ ｋｕ的ＤＮＡ 结合蛋白与该区的结合信号在５Ｆｕ 刺激１２ ｈ 后明显减弱． 因而， ｐ５３ 蛋白有可能是ｂｃｌ２ 的负转录因子， １００ ｋｕ的ＤＮＡ 结合蛋白有可能是ｂｃｌ２ 的正转录因子．