瘢痕疙瘩成纤维细胞CDC2L1基因高甲基化通过上调BcL-2蛋白抑制细胞凋亡的研究

摘要

[目的]
　　瘢痕疙瘩是一种良性真皮肿瘤，它是整形外科领域的重点和难点之一，其形成机制迄今尚未完全明确，瘢痕疙瘩相关调控基因已成为当前研究的热点。本课题组在国际上首先发现CDC2L1基因与瘢痕疙瘩的发生密切相关，进一步研究发现瘢痕疙瘩组织中CDC2L1基因存在高甲基化，其表达活性降低、细胞凋亡减少。本实验通过体外培养原代人瘢痕疙瘩成纤维细胞，进一步在细胞水平探讨CDC2L1基因甲基化水平与细胞凋亡的关系，及其对关键因子Bcl-2表达的影响。通过CDC2L1基因甲基化水平影响瘢痕疙瘩细胞凋亡的机制研究，为瘢痕疙瘩的治疗提供新的理论依据。
　　[方法]
　　应用组织块贴壁法培养瘢痕疙瘩成纤维细胞6例，应用显微镜观察法和细胞免疫鉴定法，鉴定所培养细胞为成纤维细胞;然后应用甲基化特异性PCR法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞中CDC2L1基因甲基化水平;再以存在高甲基化的瘢痕疙瘩成纤维细胞为实验对象，应用流式细胞术和western blot法分别检测5-aza-dC加药组和未加药组组的细胞凋亡情况及CDC2L1和Bcl-2的表达。
　　[结果]
　　1.组织块贴壁法可以培养出实验所需的瘢痕疙瘩成纤维细胞。显微镜观察和细胞免疫鉴定皆表明所培养的细胞为实验所需的成纤维细胞。
　　2.MSP法检测结果示:在6例标本所培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞中，有5例存在CDC2L1基因高甲基化。
　　3.用5-aza-dC处理过的瘢痕疙瘩成纤维细胞与未加药组相比，细胞凋亡增加(P＜0.01)，CDC2L1基因表达增高(P＜0.05)，Bcl-2表达减少(P＜0.05)。
　　[结论]
　　在瘢痕疙瘩成纤维细胞中，CDC2L1基因启动子区CpG岛存在高甲基化;DNA甲基化转移酶抑制剂5-aza-dC可能能逆转瘢痕疙瘩成纤维细胞CDC2L1基因高甲基化，进而导致CDC2L1表达上调，Bcl-2表达减少，细胞凋亡增加。CDC2L1基因启动子区CpG岛发生高甲基化，可导致CDC2L1基因表达下降，进而可能通过下调细胞凋亡相关的Bcl-2信号通路，使细胞凋亡减少，最终促进了瘢痕疙瘩的发生发展;5-aza-dC的应用提示DNA甲基化转移酶抑制剂对瘢痕疙瘩可能具有一定的治疗价值，为临床治疗瘢痕疙瘩提供新的理论依据。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

4 讨论

5 小结

参考文献

综述 CDK11P58及其与肿瘤相关的研究进展

致谢

附录

在读期间的科研情况