SH2 B1对肝癌细胞增殖、凋亡及Akt/mTOR通路的影响

摘要

目的 观察Src同源性2b衔接蛋白1(SH2B1)在肝癌细胞中表达情况,以及对肝癌细胞增殖、凋亡及蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路的影响.方法 通过荧光实时定量聚合酶链反应法检测人正常肝细胞株QSG-7701及肝癌细胞株HepG2中SH2B1 mRNA的表达情况,采用免疫印迹法(Western blot法)检测SH2B1蛋白表达,采用短发夹RNA(shRNA)慢病毒干扰技术构建沉默SH2B1基因的人肝癌细胞HepG2稳定转染细胞株,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测HepG2细胞增殖能力,采用磷脂酰丝氨酸蛋白抗体/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染流式细胞术检测HepG2细胞凋亡,采用Western blot法测定凋亡细胞相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3以及Akt/mTOR通路蛋白表达变化.结果 与正常细胞相比,肝癌细胞中SH2B1 mRNA、SH2B1蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与空白组、NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组SH2B1 mRNA、SH2B1蛋白表达显著降低(P<0.05);CCK-8试验显示,与NC shRNA组和空白组相比,SH2B1 shRNA组转染48 h后OD值显著降低(P<0.05);与空白组、NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与空白组、NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组细胞中Bax、caspase-3蛋白水平显著上升(P<0.05),Bcl-2蛋白水平下降(P<0.05);与空白组和NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组p-AKT、mTOR蛋白水平明显降低(P<0.05).结论 SH2B1在肝癌细胞株HepG2中高表达,沉默SH2 B1表达可能通过抑制Akt/mTOR信号通路活化,抑制肝癌细胞增殖,促进细胞凋亡.