融合条件对小鼠体细胞核移植融合率的影响

摘要

目的 提高小鼠体细胞核移植过程中融合效率.方法 使用CRY-3型和CE-450型细胞融合仪对B6D2F1小鼠去核卵母细胞与该品系小鼠胎儿成纤维细胞构成的重构胚进行融合,通过PEG/DMSO对供核细胞的预处理,比较了不同融合液,不同电极形状融合槽和供核细胞代次对融合率的影响.结果 (1)以PEG/DMSO对供核细胞预处理5 min的融合率显著高于同条件下未处理组(51.11%vs 25.64%)(P<0.05);(2)融合液中含0.1 g/L聚乙烯醇(PVA)组的融合率高于无PVA组;重构胚在甘露醇浓度为0.32 mol/L融合液中的融合率(48.21%)高于其他甘露醇浓度组(27.78%,41.67%和30.11%);(3)使用针状电极融合槽时的融合率(42.31%,43.13%)高于同条件下平行丝状电极融合槽组(30.43%,33.33%),其中又以在2 000 V/cm,20μs,2个脉冲时,交流电预处理30 s组最高(43.13%);(4)供核细胞传代一次后融合率随着传代次数的增加而下降.结论 通过PEG/DMSO对供核细胞进行预处理,并在融合液中添加PVA时,结合优化的融合条件可以提高小鼠体细胞核移植过程中融合率.