水牛体细胞核移植电融合影响因素的研究

摘要

本研究主要探讨水牛体细胞核移植电融合的影响因素,以摸索出适合水牛体细胞核移植的电融合条件.结果显示;直流脉冲前施加2.0v交流电波能显著提高φ≤15μm供体细胞的融合率及胚胎的卵裂率(p<0.05),但对其存活率和囊胚率以及20≤φ≤30μm供体细胞的融合率、胚胎的存活率、卵裂率及随后的囊胚发育率无显著影响(p>0.05);然而无论施加交流电与否,直径20~30μm供体细胞的囊胚率均显著高于直径小于15μm供体细胞的囊胚率(p<0.05).融合淮Ca<'2+>浓度为0.1mmol/L的重组胚融合率显著高于0.2mmol/L的融合率,且囊胚率也显著高于0和0.05mmol/L的囊胚率(p<0.05),但各组间重组胚的存活率和卵裂率没有显著差异(p>0.05).注核操作液中添加PVA对重组胚的融合率和卵裂率没有显著影响(P>0.05),但激活后重组胚的存活率(95.83﹪)及囊胚发育率(16.67﹪)显著高于对照组的重组胚存活率(74.77﹪)和囊胚率(6.74﹪,P<0.05).结果表明:(1)直流脉冲前施加2.0v交流电波能提高直径较小供体细胞的融合效果;(2)融合液中Ca<'2+>浓度对核移植效果有显著影响,0.1mmol/L的Ca<'2+>可取得较好的水牛核移植效果;(3)注核操作液中添加0.1﹪PVA有利于提高水牛体细胞移植的效果.